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一種大豆根瘤菌培養基以及用其制備大豆液體根瘤菌劑的方法.pdf

摘要
申請專利號:

CN201510644924.X

申請日:

2015.10.08

公開號:

CN105255757A

公開日:

2016.01.20

當前法律狀態:

撤回

有效性:

無權

法律詳情: 發明專利申請公布后的視為撤回IPC(主分類):C12N 1/20申請公布日:20160120|||公開
IPC分類號: C12N1/20; C05F11/08 主分類號: C12N1/20
申請人: 江蘇植豐生物科技有限公司
發明人: 楊國平; 李霞; 司海麗; 韓秋平
地址: 213200江蘇省常州市金壇區華興路28號
優先權:
專利代理機構: 常州市維益專利事務所32211 代理人: 周祥生
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法律狀態
申請(專利)號:

CN201510644924.X

授權公告號:

|||

法律狀態公告日:

2019.04.23|||2016.01.20

法律狀態類型:

發明專利申請公布后的視為撤回|||公開

摘要

本發明公開了一種大豆根瘤菌培養基以及用它制備大豆液體根瘤菌劑的方法,所述大豆根瘤菌培養基是包括丙三醇、甘露醇、葡萄糖、鼠李糖、果糖、α-酮戊二酸、酵母粉、絲氨酸、精氨酸、氯化銨、磷酸氫二鉀、磷酸二氫鉀、七水合硫酸鎂、二水合氯化鈣、七水合硫酸鐵、氯化鈉、二水合鉬酸鈉和生物素組份配制而成的水溶液;所述大豆液體根瘤菌劑是用上述大豆根瘤菌培養基發酵接種制備而成。本發明的菌劑20℃保存12個月活菌數仍然達每毫升100億以上。本發明的目的是為了解決現有存在的大豆液體根瘤菌劑營養不均衡、菌體活性低和發酵工藝制備的大豆根瘤菌在室溫下不能穩定存活的問題。

權利要求書

1.一種大豆根瘤菌培養基,其特征在于:它是包括丙三醇、甘露醇、葡
萄糖、鼠李糖、果糖、α-酮戊二酸、酵母粉、絲氨酸、精氨酸、氯化銨、磷酸
氫二鉀、磷酸二氫鉀、七水合硫酸鎂、二水合氯化鈣、七水合硫酸鐵、氯化
鈉、二水合鉬酸鈉和生物素的水溶液,其中,各組分在水溶液中的溶度分別
為:丙三醇1~3克/升、甘露醇1~3克/升、葡萄糖1~3克/升、鼠李糖1~3克/
升、果糖1~3克/升、α-酮戊二酸0.5~1.5克/升、酵母粉2.5~4.5克/升、絲氨酸
0.13~0.25克/升、精氨酸0.1~0.2克/升、氯化銨0.65~1.6克/升、磷酸氫二鉀
1~3克/升、磷酸二氫鉀0.2~0.5克/升、七水合硫酸鎂0.1~0.3克/升、二水合氯
化鈣0.1~0.2克/升、七水合硫酸鐵0.005~0.011克/升、氯化鈉0.05~0.15克/
升、二水合鉬酸鈉0.01~0.03克/升、生物素0.0005~0.002克/升,所述大豆根瘤
菌培養基的pH為6.8~7.5。
2.根據權利要求1所述的大豆根瘤菌培養基,其特征在于:各組分在水溶
液中的溶度分別為:丙三醇1.5~2.5克/升、甘露醇1.5~2.5克/升、葡萄糖
1.5~2.5克/升、鼠李糖1.5~2.5克/升、果糖1.5~2.5克/升、α-酮戊二酸0.75~1.25
克/升、酵母粉3.0~4.0克/升、絲氨酸0.15~0.20克/升、精氨酸0.125~0.175克/
升、氯化銨0.8~1.25克/升、磷酸氫二鉀1.1~1.6克/升、磷酸二氫鉀0.25~0.4克
/升、七水合硫酸鎂0.15~0.25克/升、二水合氯化鈣0.11~0.15克/升、七水合硫
酸鐵0.006~0.009克/升、氯化鈉0.08~0.12克/升、二水合鉬酸鈉0.015~0.025克
/升和生物素0.0008~0.0012克/升。
3.根據權利要求1或2所述的大豆根瘤菌培養基,其特征在于:各組分在
水溶液中的溶度分別為:丙三醇2克/升、甘露醇2.0克/升、葡萄糖2.0克/升、
鼠李糖2.0克/升、果糖2.0克/升、α-酮戊二酸1.0克/升、酵母粉3.5克/升、絲
氨酸0.18克/升、精氨酸0.15克/升、氯化銨1.1克/升、磷酸氫二鉀1.2克/升、
磷酸二氫鉀0.34克/升、七水合硫酸鎂0.2克/升、二水合氯化鈣0.13克/升、七
水合硫酸鐵0.0083克/升、氯化鈉0.1克/升、二水合鉬酸鈉0.02克/升和生物素
0.001克/升。
4.利用權利要求1所述的大豆根瘤菌培養基制備大豆液體根瘤菌劑的方
法,其特征在于,按以下步驟進行配制:
步驟一,大豆液體根瘤菌培養基的制備:按照丙三醇濃度為1~3克/升、甘
露醇濃度為1~3克/升、葡萄糖濃度為1~3克/升、鼠李糖濃度為1~3克/升、果
糖濃度為1~3克/升、α-酮戊二酸濃度為0.5~1.5克/升、酵母粉濃度為2.5~4.5
克/升、絲氨酸濃度為0.13~0.25克/升、精氨酸濃度為0.1~0.2克/升、氯化銨濃
度為0.65~1.6克/升、磷酸氫二鉀濃度為1~3克/升、磷酸二氫鉀濃度為0.2~0.5
克/升、七水合硫酸鎂濃度為0.1~0.3克/升、二水合氯化鈣濃度為0.1~0.2克/
升、七水合硫酸鐵濃度為0.005~0.011克/升、氯化鈉濃度為0.05~0.15克/升、
二水合鉬酸鈉濃度為0.01~0.03克/升、生物素濃度為0.0005~0.002克/升稱取上
述物質,并依次加入到純水中混合均勻,調節pH至6.8~7.5,得大豆液體根瘤
菌培養基;
步驟二,大豆液體根瘤菌劑的制備:將步驟一得到的大豆液體根瘤菌培養
基加入到發酵罐中,在罐壓0.15~0.2kPa、溫度121℃條件下滅菌20min,待培
養基溫度降至30℃時,將大豆根瘤菌按體積百分含量為5%~10%的接種量接種
至發酵罐中的大豆液體根瘤菌培養基中,在發酵溫度為25~35℃、攪拌速度為
50~150r/min、空氣流量為0.3~0.6v/v/m、罐壓為0.05~0.2kPa、溶氧為
60%~80%、發酵液pH為6.5~7.5的條件下,發酵72~144h,即得大豆液體根瘤
菌劑。
5.根據權利要求4所述的大豆液體根瘤菌劑的制備方法,其特征在于:在
步驟一中,各組份按如下濃度要求稱取:丙三醇1.5~2.5克/升、甘露醇1.5~2.5
克/升、葡萄糖1.5~2.5克/升、鼠李糖1.5~2.5克/升、果糖1.5~2.5克/升、α-酮
戊二酸0.75~1.25克/升、酵母粉3.0~4.0克/升、絲氨酸0.15~0.20克/升、精氨
酸0.125~0.175克/升、氯化銨0.8~1.25克/升、磷酸氫二鉀1.1~1.6克/升、磷酸
二氫鉀0.25~0.4克/升、七水合硫酸鎂0.15~0.25克/升、二水合氯化鈣0.11~0.15
克/升、七水合硫酸鐵0.006~0.009克/升、氯化鈉0.08~0.12克/升、二水合鉬酸
鈉0.015~0.025克/升和生物素0.0008~0.0012克/升。
6.根據權利要求5所述的大豆液體根瘤菌劑的制備方法,其特征在于:
在步驟一中,各組份按如下濃度要求稱取:丙三醇2克/升、甘露醇2.0克/升、
葡萄糖2.0克/升、鼠李糖2.0克/升、果糖2.0克/升、α-酮戊二酸1.0克/升、酵
母粉3.5克/升、絲氨酸0.18克/升、精氨酸0.15克/升、氯化銨1.1克/升、磷酸
氫二鉀1.2克/升、磷酸二氫鉀0.34克/升、七水合硫酸鎂0.2克/升、二水合氯
化鈣0.13克/升、七水合硫酸鐵0.0083克/升、氯化鈉0.1克/升、二水合鉬酸鈉
0.02克/升和生物素0.001克/升。
7.根據權利要求4所述的大豆液體根瘤菌劑的制備方法,其特征在于:
在步驟二中,所述的大豆液體根瘤菌培養基占發酵罐總體積的70%。
8.根據權利要求4所述的大豆液體根瘤菌劑的制備方法,其特征在于:
在步驟二中,大豆液體根瘤菌培養基接種后在發酵溫度為29~31℃、攪拌速度
為75~125r/min、空氣流量為0.35~0.55v/v/m、罐壓為0.075~0.18kPa、溶氧為
65~75%、發酵液pH為6.8~7.3的條件下,發酵72~144h。
9.根據權利要求8所述的大豆液體根瘤菌劑的制備方法,其特征在于:
在步驟二中,大豆液體根瘤菌培養基接種后在發酵溫度為30℃、攪拌速度為
100r/min、空氣流量為0.45v/v/m、罐壓為0.1kPa、溶氧為70%、發酵液pH為
7.2的條件下,發酵72~144h。
10.根據權利要求4所述的大豆液體根瘤菌劑的制備方法,其特征在于:
在步驟二中,所述的大豆根瘤菌為慢生型大豆根瘤菌。

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一種 大豆 根瘤菌 培養基 以及 制備 液體 根瘤菌劑 方法
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