• / 17
  • 下載費用:30 金幣  

2,3二羥基苯甲酸酯類化合物在制備治療糖尿病的食品和藥物中的應用.pdf

摘要
申請專利號:

CN201310176569.9

申請日:

2013.05.13

公開號:

CN103340880B

公開日:

2014.12.24

當前法律狀態:

授權

有效性:

有權

法律詳情: 授權|||著錄事項變更IPC(主分類):A61K 31/618變更事項:申請人變更前:杭州耐奇睿生物醫藥科技有限公司變更后:杭州耐奇睿生物醫藥科技有限公司變更事項:地址變更前:310058 浙江省杭州市西湖區浙江大學紫金港校區港灣家園4-3-1601變更后:310018 浙江省杭州經濟技術開發區白楊街道6號大街452號2幢D0609-D0610|||實質審查的生效IPC(主分類):A61K 31/618申請日:20130513|||公開
IPC分類號: A61K31/618; A61P3/10; A23L1/30 主分類號: A61K31/618
申請人: 杭州耐奇睿生物醫藥科技有限公司
發明人: 向蘭; 戚建華
地址: 310018 浙江省杭州經濟技術開發區白楊街道6號大街452號2幢D0609-D0610
優先權:
專利代理機構: 杭州天勤知識產權代理有限公司 33224 代理人: 胡紅娟
PDF完整版下載: PDF下載
法律狀態
申請(專利)號:

CN201310176569.9

授權公告號:

103340880B|||||||||

法律狀態公告日:

2014.12.24|||2014.03.05|||2013.11.06|||2013.10.09

法律狀態類型:

授權|||著錄事項變更|||實質審查的生效|||公開

摘要

本發明公開了一種2,3-二羥基苯甲酸酯類化合物在制備治療糖尿病的食品和藥物中的應用,所述2,3-二羥基苯甲酸酯類化合物的結構通式為:其中,n=4~29。本發明開拓了2,3-二羥基苯甲酸酯類化合物的一種新用途,為制備治療糖尿病的食品和藥物提供了新的思路和解決方法。另外,本發明的2,3-二羥基苯甲酸酯類化合物,能有效的抑制α-葡萄糖苷酶的活性,有效降低血糖。

權利要求書

權利要求書
1.  2,3-二羥基苯甲酸酯類化合物在制備治療糖尿病的食品和藥物中的應用,所述2,3-二羥基苯甲酸酯類化合物具有以下結構通式:

其中,n=4~29。

2.  如權利要求1所述的應用,其特征在于,所述2,3-二羥基苯甲酸酯類化合物的結構通式中,n=4,7,9,11,13,15,17,19,21或29。

3.  如權利要求1所述的應用,其特征在于,所述2,3-二羥基苯甲酸酯類化合物的結構通式中,n=7~21。

4.  如權利要求3所述的應用,其特征在于,所述2,3-二羥基苯甲酸酯類化合物的結構通式中,n=7~17。

5.  如權利要求4所述的應用,其特征在于,所述2,3-二羥基苯甲酸酯類化合物的結構通式中,n=11~13。

6.  如權利要求5所述的應用,其特征在于,所述2,3-二羥基苯甲酸酯類化合物的結構通式中,n=13。

7.  如權利要求1所述的應用,其特征在于,糖尿病為Ⅱ型糖尿病。

8.  如權利要求1所述的應用,其特征在于,藥物的劑型為固體制劑或液體制劑。

說明書

說明書2,3-二羥基苯甲酸酯類化合物在制備治療糖尿病的食品和藥物中的應用
技術領域
本發明涉化合物的醫藥用途領域,尤其涉及一種2,3-二羥基苯甲酸酯類化合物在制備治療糖尿病的食品和藥物中的應用。 
背景技術
糖尿病在全球已成為一種爆發的流行病,據最新的世界糖尿病聯盟的統計及我國近年的幾項較大范圍的調查,目前全球的糖尿病人數已達到了3億人,而中國首當其沖,已逼近了一億大關。 
隨著物質文明的發達和人口老齡化的加劇,糖尿病發病率呈現迅速增長的趨勢。糖尿病如果得不到有效的治療,極易并發心血管疾病,如冠心病,腦血管病,腎病,視網膜病變等并發癥,這些并發癥成為威脅糖尿病病人生命的主要原因,因此保持接近正常范圍的血糖水平對于預防糖尿病并發癥十分重要。 
糖尿病是一種病因十分復雜的內分泌代謝性疾病,由體內胰島素絕對或相對不足所致,其標志是慢性升高的血葡萄糖水平。目前,糖尿病主要分為三種:Ⅰ型糖尿病,由于患者身體內不能夠產生胰島素,因此,他們需要規律的注射胰島素,以使血糖水平維持在正常的范圍內,Ⅰ型糖尿病的患者大約占總糖尿病患者的5~10%,而90~95%的糖尿病患者為Ⅱ型糖尿病。Ⅱ型糖尿病的患者胰腺b細胞還有分泌胰島素的能力,但是Ⅱ型糖尿病患者身體中的細胞對胰島素作用不敏感,即發生了胰島素抵抗。 
目前大部分治療糖尿病的口服降糖藥物雖然有一定效果,但存在停藥后易反彈,副作用多等缺點,因此,尋找具有潛在抗糖尿病活性的化合物,用于開發新的治療糖尿病的藥物仍是糖尿病治療研究中的熱點和難點。 
公開號為CN101774922A的中國專利文獻公開了一種2,3-二羥基苯甲酸酯類化合物及其制備方法和應用。該專利通過將中藥龍膽粉碎后,用甲醇浸提,抽濾濃縮,得甲醇浸提物粗樣,再用80%甲醇水溶液和正己烷萃取分離,得到正己烷層粗樣;將粗樣經硅膠開口柱分離,再通過ODS開 口柱分離,用反向HPLC純化,得到一類2,3-二羥基苯甲酸酯類天然化合物。作為小分子化合物,天然分離的2,3-二羥基苯甲酸酯類化合物在老年性癡呆的體外篩選模型PC12細胞中表現出顯著的類似神經生長因子(nerve growth factor,NGF)活性,可在制備預防老年癡呆癥等神經退行性疾病的藥物中的應用。 
發明內容
本發明提供了2,3-二羥基苯甲酸酯類化合物在制備治療糖尿病的食品和藥物中的應用,所述2,3-二羥基苯甲酸酯類化合物具有以下結構通式: 

其中,n=4~29。 
優選的,所述2,3-二羥基苯甲酸酯類化合物的結構通式中,n=4,7,9,11,13,15,17,19,21或29。即所述2,3-二羥基苯甲酸酯類化合物為2,3-二羥基苯甲酸戊酯、2,3-二羥基苯甲酸辛酯、2,3-二羥基苯甲酸癸酯、2,3-二羥基苯甲酸十二烷酯、2,3-二羥基苯甲酸十四烷酯、2,3-二羥基苯甲酸十六烷酯、2,3-二羥基苯甲酸十八烷酯、2,3-二羥基苯甲酸二十烷酯、2,3-二羥基苯甲酸二十二烷酯或2,3-二羥基苯甲酸三十烷酯。 
優選的,所述2,3-二羥基苯甲酸酯類化合物的結構通式中,n=7~21。 
優選的,所述2,3-二羥基苯甲酸酯類化合物的結構通式中,n=7~17。 
優選的,所述2,3-二羥基苯甲酸酯類化合物的結構通式中,n=11~13。 
更優選的,所述2,3-二羥基苯甲酸酯類化合物的結構通式中,n=13,即該2,3-二羥基苯甲酸酯類化合物為2,3-二羥基苯甲酸十四烷酯。 
2,3-二羥基苯甲酸酯類化合物能夠抑制α-葡萄糖苷酶的活性,從而降低葡萄糖的水平,動物學試驗也表明2,3-二羥基苯甲酸酯類化合物能夠顯著降低小鼠的血糖水平,因此,可以以有效劑量的2,3-二羥基苯甲酸酯類化合物為活性成分,添加藥學上可接受的載體、稀釋劑等,制備治療糖尿病的藥物。 
糖尿病具體為Ⅱ型糖尿病。 
所述藥學上可接受的載體包括淀粉、蔗糖、微晶纖維素等填充劑,淀粉漿、羥丙纖維素、明膠、聚乙二醇等粘合劑,硬脂酸鎂、微粉硅膠、聚乙二醇類等濕潤劑,聚山梨脂、卵磷脂等吸收促進劑,伯洛沙姆、脂肪酸山梨坦、聚山梨脂等表面活性劑,還可以加入香味劑、甜味劑等其它輔劑。 
本發明所述的2,3-二羥基苯甲酸酯類化合物可以以單位劑量形式給藥,給藥途徑為腸內給藥或非腸內給藥,包括口服、肌肉注射、皮下注射、靜脈注射等。 
藥物的劑型可以是固體制劑、半固體劑、液體制劑等,包括片劑、丸劑、粉劑、分散片、小藥囊劑、酏劑、混懸劑、乳劑、溶液劑、糖漿劑、氣霧劑,軟膠囊、硬膠囊、無菌注射液、搽劑、栓劑等。 
上述各種劑型可采用常規方法進行制備。 
當然,可以以有效劑量的2,3-二羥基苯甲酸酯類化合物為活性成分,添加食品上可接受的載體、稀釋劑等,制備治療糖尿病的食品。 
所述食品上可接受的載體可參見現有技術。 
與現有技術相比,本發明的有益效果為: 
本發明開拓了2,3-二羥基苯甲酸酯類化合物的一種新用途,為制備治療糖尿病的食品和藥物提供了新的思路和解決方法。 
本發明的2,3-二羥基苯甲酸酯類化合物,能有效的抑制α-葡萄糖苷酶的活性,有效降低血糖。 
附圖說明
圖1a為化合物1~5對α--葡萄糖苷酶的影響; 
圖1b為化合物6~10對α--葡萄糖苷酶的影響; 
圖2為STZ對小鼠空腹血糖的影響; 
圖3為STZ對小鼠體重的影響; 
圖4為STZ對小鼠攝食量的影響; 
其中,圖2~圖4中,*P<0.05vs模型對照組,**P<0.01vs模型對照組, ***P<0.0001vs模型對照組,n=5; 
圖5為STZ對小鼠胰腺組織的影響; 
圖6為ABG-001對實驗性2型糖尿病小鼠空腹血糖的影響; 
圖7為ABG-001對實驗性2型糖尿病小鼠攝食量的影響; 
圖8為ABG-001對實驗性2型糖尿病小鼠飲水量的影響; 
其中,圖6~圖8中,*P<0.05vs模型對照組,**P<0.01vs模型對照組n=10; 
圖9為ABG-001對實驗性2型糖尿病小鼠體脂肪率的影響; 
其中,**P<0.01vs高脂對照組,##P<0.01vs模型對照組,n=10。 
具體實施方式
下面結合具體實施方式進一步闡釋本發明。 
實施例1苯甲酸酯類化合物的制備 
1、化合物1:2,3-二羥基苯甲酸戊酯 
將(154mg,1mmol)2,3-二羥基苯甲酸,10ml戊醇置于25ml圓底燒瓶中,冷至0℃,滴加2~3滴濃硫酸,回流攪拌24h。用薄層色譜(展開劑:正己烷/乙酸乙酯,5/1,V/V)跟蹤反應,反應停止后,蒸出戊醇,得粗產品,硅膠柱層析(展開劑:正己烷/乙酸乙酯,5/1,V/V),得白色固體170mg。 
理化性質:白色固體,1H NMR(500MHz,CDCl3)δ:11.00(s,1H),7.38(dd,1H,J=1.5,8.0Hz),7.12(dd,1H,J=1.0,8.0Hz),6.80(t,1H,J=8.0Hz),5.65(s,1H),4.41(t,2H,J=7.0Hz),1.78(m,2H),1.33~1.38(m,4H),0.90(t,3H,J=7.0Hz);13C NMR(125MHz,CDCl3)δ:170.4,148.9,145.1,120.5,119.7,119.1,112.7,65.7,28.2,28.1,22.3,13.9ppm;IR(KBr)ν:3458,2931,2865,1674,1469,1309,1268,1067,754cm-1;HRMS:m/z[M+H]+calcd for C12H17O4+:225.1121,found:225.1104。 
2、化合物2:2,3-二羥基苯甲酸辛酯 
合成方法同化合物1,反應投料為:(154mg,1mmol)2,3-二羥基苯甲酸、10ml辛醇,獲得白色固體128mg。 
理化性質:白色固體,1H NMR(500MHz,CDCl3)δ:11.01(s,1H),7.38(dd,1H,J=1.5,8.0Hz),7.10(dd,1H,J=1.0,8.0Hz),6.80(t,1H,J=8.0 Hz),5.64(s,1H),4.35(t,2H,J=7.0Hz),1.78(m,2H),1.44(m,2H),1.26~1.38(m,8H),0.89(t,3H,J=7.0Hz);HRMS:m/z[M+H]+calcd for C15H23O4+:267.1591,found:267.1590。 
3、化合物3:2,3-二羥基苯甲酸癸酯 
將(154mg,1mmol)2,3-二羥基苯甲酸,(316mg,2mmol)正癸醇,10ml四氫呋喃置于25ml圓底燒瓶中,冷至0℃,加入(250mg,1.2mmol)二環己基碳二亞胺,室溫攪拌24h。用薄層色譜(展開劑:正己烷/乙酸乙酯,2/1,V/V)跟蹤反應。反應停止后,蒸出溶劑,殘余物用乙酸乙酯溶解,過濾,濾液用5%檸檬酸溶液、飽和碳酸氫鈉溶液、水洗,酯層經無水硫酸鈉干燥,過濾,旋蒸濃縮得初產品440mg,硅膠柱層析(展開劑:正己烷/乙酸乙酯,2/1,V/V),得白色固體132mg。 
理化性質:白色固體,1H NMR(500MHz,CDCl3)δ:11.01(s,1H),7.37(dd,1H,J=1.5,8.0Hz),7.09(dd,1H,J=1.5,8.0Hz),6.80(t,1H,J=8.0Hz),5.65(s,1H),4.35(t,2H,J=7.0Hz),1.78(m,2H),1.44(m,2H),1.27~1.35(m,12H),0.88(t,3H,J=7.0Hz);13C NMR(125MHz,CDCl3)δ:170.8,148.9,145.0,120.5,120.0,119.6,119.1,65.7,31.9,29.5,29.3,29.2,28.5,27.6,25.9,22.7,14.1ppm;IR(KBr)ν:3478,2926,2885,1667,1469,1309,1267,1067,753cm-1;HRMS:m/z[M+H]+calcd for C17H27O4+:295.1904,found:295.1910。 
4、化合物4:2,3-二羥基苯甲酸十二烷酯 
合成方法同化合物3,反應投料為:(154mg,1mmol)2,3-二羥基苯甲酸、(372mg,2mmol)十二烷醇,(250mg,1.2mmol)二環己基碳二亞胺,15ml四氫呋喃,獲得白色固體180mg。 
理化性質:白色固體,1H NMR(500MHz,CDCl3)δ:11.01(s,1H),7.38(dd,1H,J=1.5,8.0Hz),7.10(dd,1H,J=1.0,8.0Hz),6.80(t,1H,J=8.0Hz),5.64(s,1H),4.35(t,2H,J=6.5Hz),1.78(m,2H),1.44(m,2H),1.26~1.35(m,16H),0.88(t,3H,J=7.0Hz);HRMS:m/z[M+H]+calcd for C19H31O4+:323.2217,found:323.2236。 
5、化合物5:2,3-二羥基苯甲酸十四烷酯 
合成方法同化合物3,反應投料為:(154mg,1mmol)2,3-二羥基苯甲酸、(428mg,2mmol)十四烷醇,(250mg,1.2mmol)二環己基碳二亞胺,15ml四氫呋喃,獲得白色固體150mg。 
理化性質:白色固體,1H NMR(500MHz,CDCl3)δ:11.01(s,1H),7.37(dd,1H,J=1.5,8.5Hz),7.10(dd,1H,J=1.0,8.0Hz),6.80(t,1H,J=8.0Hz),5.63(s,1H),4.35(t,2H,J=6.5Hz),1.78(m,2H),1.44(m,2H),1.26~1.35(m,20H),0.88(t,3H,J=7.0Hz);13C NMR(125MHz,CDCl3)δ:170.4,148.9,145.0,120.5,119.6,119.1,112.6,65.7,31.9,29.7~29.6,29.5,29.4,29.2,28.5,25.9,22.7,14.1ppm;IR(KBr)ν:3485,2917,2849,1669,1467,1310,1267,1157,1067,759cm-1;HRMS:m/z[M+H]+calcd for C21H35O4+:351.2530,found:351.2536。 
6、化合物6:2,3-二羥基苯甲酸十六烷酯 
合成方法同化合物3,反應投料為:(154mg,1mmol)2,3-二羥基苯甲酸、(484mg,2mmol)十六烷醇,(250mg,1.2mmol)二環己基碳二亞胺,15ml四氫呋喃,獲得白色固體178mg。 
理化性質:白色固體,1H NMR(500MHz,CDCl3)δ:11.01(s,1H),7.37(dd,1H,J=1.5,8.0Hz),7.10(dd,1H,J=1.0,8.0Hz),6.80(t,1H,J=8.0Hz),5.65(s,1H),4.35(t,2H,J=6.5Hz),1.78(m,2H),1.44(m,2H),1.25~1.35(m,24H),0.88(t,3H,J=7.0Hz);HRMS:m/z[M+H]+calcd for C23H39O4+:379.2843,found:379.2848。 
7、化合物7:2,3-二羥基苯甲酸十八烷酯 
合成方法同化合物3,反應投料為:(154mg,1mmol)2,3-二羥基苯甲酸、(540mg,2mmol)十八烷醇,(250mg,1.2mmol)二環己基碳二亞胺,15ml四氫呋喃,獲得白色固體170mg。 
理化性質:白色固體,1H NMR(500MHz,CDCl3)δ:11.01(s,1H),7.37(dd,1H,J=1.5,8.0Hz),7.10(dd,1H,J=1.0,8.0Hz),6.80(t,1H,J=8.0Hz),5.63(s,1H),4.35(t,2H,J=6.5Hz),1.78(m,2H),1.44(m,2H),1.25~1.35(m,28H),0.88(t,3H,J=7.0Hz);13C NMR(125MHz,CDCl3)δ:170.4, 148.9,145.1,120.5,119.6,119.1,112.7,65.7,31.9,29.7~29.6,29.5,29.4,29.2,28.5,25.9,22.7,14.1ppm;IR(KBr)ν:3473,2917,2850,1665,1467,1266,1159,1064,799,762cm-1;HRMS:m/z[M+H]+calcd for C25H43O4+:407.3156,found:407.3192。 
8、化合物8:2,3-二羥基苯甲酸二十烷酯 
合成方法同化合物3,反應投料為:(154mg,1mmol)2,3-二羥基苯甲酸、(896mg,3mmol)二十烷醇,(206mg,1mmol)二環己基碳二亞胺,15ml四氫呋喃,獲得白色固體104mg。 
理化性質:白色固體,1H NMR(500MHz,CDCl3)δ:11.00(s,1H),7.37(dd,1H,J=1.5,8.0Hz),7.10(dd,1H,J=0.5,8.0Hz),6.80(t,1H,J=8.0Hz),5.63(s,1H),4.34(t,2H,J=6.5Hz),1.78(m,2H),1.43(m,2H),1.25~1.35(m,32H),0.88(t,3H,J=7.0Hz);13C NMR(125MHz,CDCl3)δ:170.4,148.9,145.0,120.5,119.6,119.1,112.7,65.7,31.9,29.7~29.6,29.5,29.4,29.2,28.5,25.9,22.7,14.1ppm;IR(KBr)ν:3403,2919,2850,1675,1467,1313,1254,1159,1067,752cm-1;HRMS:m/z[M+H]+calcd for C27H47O4+:435.3469,found:435.3489。 
9、化合物9:2,3-二羥基苯甲酸二十二烷酯 
合成方法同化合物3,反應投料為:(154mg,1mmol)2,3-二羥基苯甲酸、(653mg,2mmol)二十二烷醇,(250mg,1.2mmol)二環己基碳二亞胺,15ml四氫呋喃,獲得白色固體102mg。 
理化性質:白色固體,1H NMR(500MHz,CDCl3)δ:11.01(s,1H),7.37(dd,1H,J=1.5,8.0Hz),7.10(dd,1H,J=1.0,8.0Hz),6.80(t,1H,J=8.0Hz),5.63(s,1H),4.34(t,2H,J=6.5Hz),1.78(m,2H),1.43(m,2H),1.25~1.35(m,36H),0.88(t,3H,J=7.0Hz);13C NMR(125MHz,CDCl3)δ:170.4,148.9,145.1,120.5,119.6,119.1,112.7,65.7,31.9,29.7~29.6,29.5,29.4,29.2,28.5,25.9,22.7,14.1ppm;IR(KBr)ν:3397,2918,2849,1675,1469,1312,1256,1158,1065,750cm-1;HRMS:m/z[M+H]+calcd for C29H51O4+:463.3782,found:463.3790。 
10、化合物10:2,3-二羥基苯甲酸三十烷酯 
合成方法同化合物3,反應投料為:(154mg,1mmol)2,3-二羥基苯甲酸、(1.32g,3mmol)三十烷醇,(250mg,1.2mmol)二環己基碳二亞胺,20ml四氫呋喃,獲得白色固體75mg。 
理化性質:白色固體,1H NMR(500MHz,CDCl3)δ:11.00(s,1H),7.37(dd,1H,J=1.5,8.5Hz),7.10(dd,1H,J=1.0,8.0Hz),6.80(t,1H,J=8.0Hz),5.63(s,1H),4.34(t,2H,J=6.5Hz),1.77(m,2H),1.45(m,2H),1.25~1.35(m,52H),0.88(t,3H,J=7.0Hz);13C NMR(125MHz,CDCl3)δ:164.5,149.4,145.0,120.5,119.6,119.1,112.6,65.7,34.9,31.9,29.7~29.5,29.4,29.2,28.5,25.9,25.4,24.7,22.7,14.1ppm;IR(KBr)ν:3484,2920,2848,1665,1468,1313,1262,1162,1076,801cm-1;MS(m/z):575[M]+。 
實施例2苯甲酸酯類化合物對α-葡萄糖苷酶的活性抑制作用的研究 
利用α-葡萄糖苷酶抑制試驗對表1的苯甲酸酯類的化合物進行篩選。 
表1苯甲酸酯類化合物 

將化合物用0.1mol/L、PH7.0的磷酸鹽緩沖液稀釋成1mg/ml,100μg/ml,10μg/ml,1μg/ml的溶液。取30μl后置于96孔板中,與0.075U的α-葡萄糖苷酶酶液50μl混合,底物為50μl的3mmol/L pNPG(對硝基苯基-α-D-吡喃葡萄糖苷);37℃反應30min后加入100μl0.1mol/L Na2CO3溶液終止反應,用酶標儀(Bio-Rad,日本)波長為405nm測定其吸光值,計算α-葡萄糖苷酶抑制率和半數抑制濃度(IC50)值。 
α-葡萄糖苷酶抑制率的計算公式是: 
α-葡萄糖苷酶抑制劑%=(A陰性組-A空白組)-(A待測樣品組-A空白組)/(A陰性組-A空白組) 
其中,A陰性組為只含磷酸緩沖液及α-葡萄糖苷酶及pNPG底物的吸光值,A空白組為只含磷酸緩沖液及滅活的α-葡萄糖苷酶及pNPG底物的吸光值,A待檢樣品組為含有待檢化合物,α-葡萄糖苷酶及pNPG底物的吸光值。 
參照圖1a和圖1b可知,化合物1~化合物10對α-葡萄糖苷酶均具有一定的抑制作用,阿卡波糖(商品名為拜唐蘋)是一種新型口服降糖藥,在腸道內競爭性抑制α-葡萄糖苷酶,與阿卡波糖相比,在十個化合物中對α-葡萄糖苷酶抑制效果最差的化合物1也可達到與阿卡波糖相當的效果,而2,3-二羥基苯甲酸十四酯(ABG-001)對α-葡萄糖苷酶活性的抑制作用最為明顯,其中,2,3-二羥基苯甲酸十四酯的IC50為0.17mg/ml,而陽性對照阿卡波糖的IC50為0.68mg/ml,2,3-二羥基苯甲酸十四酯對α-葡萄糖苷酶活性的抑制效果是阿卡波糖4倍。 
實施例3實驗性2型糖尿病小鼠的制備方法的研究 
鏈脲佐菌素(streptozocin,STZ)是經典的致糖尿病藥物,其存在亞硝基基團,可產生胰島β細胞毒性物質NO。NO參與許多自由基級聯式反應,誘導胰島β細胞凋亡,降低細胞代謝和胰島素的分泌。 
為正確制備實驗性2型糖尿病小鼠,本實施例對制備實驗性2型糖尿病小鼠的STZ注射劑量進行了研究。 
實驗小鼠種類為:5周齡的ICR雄性小鼠 
(1)實驗方法 
本實施例將實驗動物分為了對照組、STZ高劑量組、STZ中劑量組和STZ低劑量組,每組5只。 
各組的飼料均為高脂飼料(由上海斯萊克實驗動物有限公司提供)。動物禁食不禁水12h,STZ低劑量組按40mg/kg體重的劑量腹腔注射STZ,連續注射三天,每天一次,共注射三次;STZ中劑量組按70mg/kg體重的劑量注射STZ,間隔一天注射一次,共注射兩次;STZ高劑量組按100mg/kg體重的劑量一次性腹腔注射;高脂對照組注射0.1mol/L pH為7.0的檸檬酸緩沖液,注射體積為100μl,注射次數為每天一次,連續注射三 天,共注射三次。 
對造模前以及造模后第三天、第十天和第十七天的各組小鼠的空腹血糖值進行測定,并對小鼠的每日攝食量進行了監測,在第十七天對各組小鼠進行了解剖取胰臟,進行石蠟切片,蘇木素伊紅染色。 
(2)實驗結果 
在注射STZ后,STZ高劑量組、STZ低劑量組均表現出了血糖顯著升高的現象(見圖2),并且各劑量組在體重上,均發生了顯著下降的變化(見圖3),同時攝食量也顯著增加(見圖4)。這一結果表明,STZ的確能致小鼠糖尿病。 
通過對各組小鼠的胰腺組織切片結果進行比較,參見圖5,發現高劑量組和中劑量組對胰島細胞造成了嚴重的炎癥細胞浸潤,而低劑量組并未造成嚴重損傷,因此低劑量組為成功的實驗性2型糖尿病組。 
實施例4  化合物ABG-001對實驗性2型糖尿病小鼠的影響 
(1)實驗方法 
1)動物分組: 
取健康雄性小鼠40只(由上海斯萊克實驗動物有限公司提供),隨機分為正常對照組、高脂對照組、模型對照組和ABG-001組,每組10只小鼠,其中,模型對照組和ABG-001劑量組的小鼠事先用STZ誘導糖尿病,構建實驗性2型糖尿病小鼠模型。各組的飼料均為高脂飼料(由上海斯萊克實驗動物有限公司提供)。 
實驗性2型糖尿病小鼠模型的構建方法為: 
用高脂飼料連續飼養5周后,動物禁食不禁水12h,按40mg/kg體重的劑量腹腔注射STZ溶液(臨用前配制),連續注射三天,每天一次,共注射三次;高脂對照組注射0.1mol/L pH為7.0的檸檬酸緩沖液,注射體積為100μl,注射次數為每天一次,連續注射三天,共注射三次。 
2)處理方法 
造模后第四天開始連續給藥處理50天。 
正常對照組:給與普通飼料,同時灌胃金龍魚油;劑量為100μl,每天一次; 
高脂對照組:給與高脂飼料,灌胃金龍魚油,劑量為100μl,每天1 次; 
模型對照組:給與高脂飼料,灌胃金龍魚油,劑量為100μl,每天1次; 
ABG-001組:給與高脂飼料,按照10mg/kg的劑量灌胃,每天一次,化合物ABG-001可先用100μl金龍魚油溶解。 
每日測定各組小鼠的日攝食量和日飲水量,每隔一周禁食12h,尾部取血,測定各組小鼠的血糖變化值。末次給藥后,小鼠禁食不禁水12h,取血檢測血清中血糖、甘油三酯、膽固醇、肌酐、AST、ALT等指標,并取心、肝、胰、脾、腎、脂肪等組織稱重。 
(2)實驗結果 
表2ABG-001對實驗性2型糖尿病小鼠血清指標的影響 

注:*P<0.05vs模型對照組,**P<0.01vs模型對照組,#P<0.05vs高脂對照組,##P<0.01vs高脂對照組,n=10。 
表3ABG-001對實驗性2型糖尿病小鼠組織重量的影響 

注:*P<0.05vs模型對照組,**P<0.01vs模型對照組,#P<0.05vs高脂對照組,##P<0.01vs高脂對照組,n=10。 
如圖6,與模型對照組相比,在造模后第11、18、25、32、38和53 天,ABG-001組的空腹血糖值均顯著性降低,血糖降低率可達59.28%。如表2所示,與模型對照組相比,末次給藥后,ABG-001組血清中的血糖值顯著性降低。 
如圖7和圖8所示,在給藥處理的一到七周,ABG-001組比模型對照組的攝食量和飲水量均顯著的降低,說明通過ABG-001的給藥處理,能明顯減輕了實驗性2型糖尿病小鼠臨床表現中多飲多食的癥狀。 
如圖9所示,ABG-001組與模型對照組的脂肪重量與體重的比值(體脂肪率)相比,也存在顯著差異,體脂肪率明顯增加,并且對各組別各組織重量進行了比較,發現,ABG-001組與模型對照組的脂肪重量存在顯著差異(表3),脂肪重量增加了80%以上。 
以上結果表明,ABG-001能夠降低實驗性2型糖尿病小鼠的血糖,并顯著減輕了2型糖尿病小鼠臨床表現中多飲多食的癥狀,改善因糖尿病導致的消瘦。 
實施例5  ABG-001急性大劑量口服給藥未出現毒性反應 
實驗主要材料:ICR小鼠(體重22g~25g,雄性和雌性各10只,購自浙江大學實驗動物中心)。 
實驗操作:ABG-001較難溶于水。 
將ABG-001溶解于99.5%乙醇中,然后添加1%吐溫80,用生理鹽水稀釋到使用濃度(乙醇的最終濃度小于2%)。經口服藥5g/kg。 
急性中毒試驗:將4周齡ICR雄性小鼠20只,雌雄各半,隨機分為對照組,5g/kg處理組。將溶于1%Tween-80的化合物ABG-001經口服藥5g/kg,連續觀察一周,每天觀察動物的精神狀態,測定體重及攝食量。 
化合物投入10分鐘后小鼠肢體出現卷縮,運動量減少。1小時后,全部恢復正常。一周內小鼠無死亡情況,攝食量無明顯變化,體重變化無明顯減少。心,肝,脾,腎及白色脂肪組織重量及眼觀無顯著性差異。 
實驗結果: 
(1)如表4所示,與生理鹽水對照組相比,ABG-001處理組動物沒有出現體重增加/減少(包括各臟器重量)。 
表4ICR小鼠體重和各臟器系數(每組10只,♂=5,♀=5;ABG-001=5g/kg) 

臟器系數=臟器重/體重(%)。 
(2)如表5所示,與生理鹽水對照組相比,ABG-0015g/kg組沒有顯示血液生化學指標的異常,提示肝、腎、造血器官等功能沒有被損害。 
表5ICR小鼠血液生化指標(每組♀=10,♂=10;ABG-001=5g/kg灌胃) 

其中,TP:總蛋白;ALB:白蛋白;GLOB:球蛋白;ALT:丙氨酸氨基轉移酶;AST:谷草轉氨酶;TBIL:總膽紅素;DBIL:直接膽紅素;CHE:乙酰膽堿酯酶。 

關 鍵 詞:
羥基 苯甲酸 化合物 制備 治療 糖尿病 食品 藥物 中的 應用
  專利查詢網所有資源均是用戶自行上傳分享,僅供網友學習交流,未經上傳用戶書面授權,請勿作他用。
關于本文
本文標題:2,3二羥基苯甲酸酯類化合物在制備治療糖尿病的食品和藥物中的應用.pdf
鏈接地址:http://www.rgyfuv.icu/p-6419011.html
關于我們 - 網站聲明 - 網站地圖 - 資源地圖 - 友情鏈接 - 網站客服客服 - 聯系我們

[email protected] 2017-2018 zhuanlichaxun.net網站版權所有
經營許可證編號:粵ICP備17046363號-1 
 


收起
展開
山东11选5中奖结果走势图