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治療頭痛的中藥組合物及其制備方法.pdf

摘要
申請專利號:

CN201310312125.3

申請日:

2013.07.23

公開號:

CN103349737B

公開日:

2014.12.24

當前法律狀態:

授權

有效性:

有權

法律詳情: 授權|||實質審查的生效號牌文件類型代碼:1604號牌文件序號:101539329248IPC(主分類):A61K 36/8988專利申請號:2013103121253申請日:20130723|||公開
IPC分類號: A61K36/8988; A61P25/00; A61P25/06; A61P29/02; A61P25/20; A61P9/10; A61K35/64(2006.01)N 主分類號: A61K36/8988
申請人: 西安新通藥物研究有限公司
發明人: 張登科; 孫文軍
地址: 710077 陜西省西安市高新區錦業路69號創業研發園瞪羚谷C區12號
優先權:
專利代理機構: 西安智邦專利商標代理有限公司 61211 代理人: 姚敏杰
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法律狀態
申請(專利)號:

CN201310312125.3

授權公告號:

103349737B||||||

法律狀態公告日:

2014.12.24|||2013.11.13|||2013.10.16

法律狀態類型:

授權|||實質審查的生效|||公開

摘要

本發明公開了一種用于治療頭痛的中藥組合物及其制備方法,該中藥組合物由川芎、天麻、白芷、白芍、元胡及全蝎制備而成。本發明提供了有效部位集中、服用劑量小、患者服用方便的經現代藥理研究證實,療效確切、安全可靠、不良反應少的用于治療頭痛的中藥組合物及其制備方法。該中藥組合物具有活血祛風、通絡止痛的功效,可用于偏頭痛、緊張性頭痛等多種頭痛的預防和治療。

權利要求書

權利要求書
1.  用于治療頭痛的中藥組合物,其是由以下重量份數的活性原料制成:川芎7~8份(優選為7.5份)、天麻5.5~6.5份(優選為6份)、白芷2.5~3.5份(優選為3份)、白芍2.5~3.5份(優選為3份)、元胡5.5~6.5份(優選為6份)、全蝎0.4~0.5份(優選為0.45份)。

2.  權利要求1所述的中藥組合物,其天麻素含量不低于10mg/g,優選不低于14mg/g。

3.  權利要求1或2所述的中藥組合物,其由如下制備方法制備:
1)取處方比例的川芎、天麻、白芷、白芍及元胡,加水煎煮,濾過,合并并收集濾液,得水煎液;
2)將步驟1)獲得的水煎液減壓濃縮,得流浸膏;
3)將步驟2)所得的流浸膏加乙醇沉淀,收集濾液,濃縮、干燥并粉碎成細粉;
4)取處方比例的全蝎粉碎成細粉;
5)將步驟3)及步驟4)所得的細粉混合均勻,和,
6)檢測步驟5)的混合產物中的天麻素含量,保留天麻素含量不低于10mg/g(優選不低于14mg/g)的混合產物,即得中藥組合物。

4.  權利要求3所述的中藥組合物,其中:
在步驟1)中,加水的總重量為所煎煮藥材量的5~15倍,優選為10倍;
在步驟1)中,煎煮是分2~4次煎煮,優選分3次煎煮;
在步驟1)中,每次煎煮的時間為0.5~3h,優選每次煎煮時間為1~2h;
在步驟2)中,流浸膏的相對密度為1.0~1.5(60℃),優選為1.10~1.3(60℃);
在步驟3)中,沉淀時加乙醇至乙醇濃度為60~80%(V/V),優選為70%(V/V);
在步驟3)中,沉淀的時間是12~36h,優選為24h;
在步驟3)中,濃縮為濃縮至相對密度為1.30~1.35(60℃)的稠膏;和/或,
在步驟6)中,合格的產物經HPLC檢測天麻素含量不低于10mg/g,優選不低于14mg/g。

5.  權利要求1-4之任一所述的中藥組合物的制備方法,其包括:
1)取處方比例的川芎、天麻、白芷、白芍及元胡,加水煎煮,濾過,合并并收集濾液,得水煎液;
2)將步驟1)獲得的水煎液減壓濃縮,得流浸膏;
3)將步驟2)所得的流浸膏加乙醇沉淀,收集濾液,濃縮、干燥并粉碎成細粉;
4)取處方比例的全蝎粉碎成細粉;
5)將步驟3)及步驟4)所得的細粉混合均勻,和,
6)檢測步驟5)的混合產物中的天麻素含量,保留天麻素含量不低于10mg/g,(優選不低于14mg/g)的混合產物,即得中藥組合物。

6.  權利要求5所述的中藥組合物制備方法,其中
在步驟1)中,加水的總重量為所煎煮藥材量的5~15倍,優選為10倍;
在步驟1)中,煎煮是分2~4次煎煮,優選分3次煎煮;
在步驟1)中,每次煎煮的時間為0.5~3h,優選每次煎煮時間為1~2h;
在步驟2)中,流浸膏的相對密度為1.0~1.5(60℃),優選為1.10~1.3(60℃);
在步驟3)中,沉淀時加乙醇至乙醇濃度為60~80%(V/V),優選為70%(V/V);
在步驟3)中,沉淀的時間是12~36h,優選為24h;
在步驟3)中,濃縮為濃縮至相對密度為1.30~1.35(60℃)的稠膏;和/或,
在步驟6)中,合格的產物經HPLC檢測天麻素含量不低于10mg/g,優選不低于14mg/g。

7.  用于治療頭痛的藥物制劑,其包括權利要求1-4之任一所述的中藥組合物和藥學上可接受的輔劑。

8.  權利要求7所述的藥物制劑,其是口服藥物制劑,優選是顆粒劑、片劑、糖漿劑、混懸劑、丸劑或膠囊劑,更優選是片劑。

9.  權利要求1~4之任一所述的中藥組合物在制備具有鎮痛作用、鎮靜作用和/或改善血液流變性作用的藥物中的應用。

10.  權利要求1~4之任一所述的中藥組合物在制備治療或預防頭痛的藥物中的應用。

說明書

說明書治療頭痛的中藥組合物及其制備方法
技術領域
本發明屬于中藥技術領域,具體而言,本發明涉及用于治療頭痛的中藥組合物、制劑及其制備方法和應用等。 
背景技術
頭痛是一種臨床上常見的多發病,高發病,經常性的頭痛能引起視力減退,疲勞,發熱,食欲不振,消瘦,失眠,煩躁不安,記憶力減退,行為異常等癥狀。中國原發性頭痛流行病學調查數據顯示:在18~65歲人口中,原發性頭痛發病率為23.8%,其中最常見的兩種頭痛:緊張性頭痛為10.77%,偏頭痛為9.3%,偏頭痛患者人均治療費用為728元/年。值得注意的是:偏頭痛會增加并發癥風險,可使缺血性卒中風險增加2.16倍,使發生腦白質異常風險增加3.9倍,還可引發重度抑郁癥、恐怖障礙等癥。嚴重的偏頭痛被世界衛生組織定為最致殘的慢性疾病之一,類同于腦呆、四肢癱瘓和嚴重精神疾病。 
目前,西醫并無治療頭痛、偏頭痛的專用特效藥物,必須診斷明確引起頭痛、偏頭痛是何疾病,才可給藥,有時即使診斷出引起頭痛、偏頭痛是何疾病,也無有效藥物給予,只能使用去痛片之類的一般止痛藥。另外,多數西藥都具有成癮性和其他毒副作用,如去痛片會帶來胃腸道等多方面的嚴重問題,且其往往對患者的頭痛、偏頭痛無顯著改善。 
相較于西醫,中醫在治療頭痛方面具有毒性低、副作用少,治療效果明顯且復發率低的特點。目前已經有相關治療頭痛、偏頭痛的藥方公開。如中國專利201110003329.X公開了一種治療偏頭痛的藥物,該藥物療效確切效果明顯,能夠有效地治療偏頭痛;另一方面其中原料包括:白芷、菊花、桂圓、蔓荊子、三七、川芎、天麻、地膚子、夏枯草、石菖蒲、玫瑰花、蒼耳子、決明子、蓮房、蓽茇及益智仁,16種原料,增加原料成本不說,如此之多的原料種類不易在生產中控制藥品質量,造成生產成本上升和/或療效不穩定。 
又如中國專利申請201210416622.3公開了一種治療偏頭痛的藥物其中原料 包括生地黃、天麻、蚯蚓、紅花、赤芍、川芎、羌活、菊花、龍膽、紫草、車前子、白芍、防風、細辛、肉桂等十幾種藥物也具有上述缺點。 
為此,本發明人經過長期而艱苦的研究和實踐,令人意外地獲得了一種中藥組合物配方不但能夠高效地治療偏頭痛、緊張性頭痛等多種頭痛,還具有鎮痛作用、鎮靜作用和/或改變血液流變性的作用,具有活血祛風、通絡止痛之功效。另外,本發明人還探索了該中藥組合物的制備方法,在不影響藥物療效和穩定性的情況下,很大程度地簡化了制備流程,盡量將不同的原料同時處理,節約了潛在的并行設備的投入,節省了生產成本,縮短了制備流程。 
發明內容
本發明要解決的技術問題在于提供新的中藥組合物,其用于治療偏頭痛、緊張性頭痛等多種頭痛。另外,本發明還提供了基于該中藥組合物的制劑、制備方法和應用等。 
具體而言,在第一方面,本發明提供了用于治療頭痛的中藥組合物,其是由川芎7~8份、天麻5.5~6.5份、白芷2.5~3.5份、白芍2.5~3.5份、元胡(即,延胡索)5.5~6.5份及全蝎0.4~0.5份制備而成。 
優選本發明第一方面的中藥組合物是由川芎7.5份、天麻6份、白芷3份、白芍3份、元胡6份及全蝎0.45份制備而成。 
為了保證療效的穩定和有效,本發明人摸索出了本發明第一方面的中藥組合物的質量評價標準,盡管中藥組合物中的活性成分非常復雜,但是經大量批次研究,發現其中天麻素非常適合作為質量指標。因此優選本發明第一方面的中藥組合物的天麻素含量不低于10mg/g,更優選不低于14mg/g。 
本發明人經過長期摸索,得出了在不影響療效、安全性的情況下便于大規模生產的制備工藝,而且其中便于質量控制,制備的中藥組合物質量穩定。因此,優選本發明第一方面的中藥組合物由如下制備方法制備: 
1)取處方比例的川芎、天麻、白芷、白芍及元胡,加水煎煮,濾過,合并并收集濾液得水煎液; 
2)將步驟1)獲得的水煎液減壓濃縮得流浸膏; 
3)將步驟2)所得的流浸膏加乙醇沉淀,收集濾液,濃縮、干燥并粉碎成 細粉; 
4)取處方比例的全蝎粉碎成細粉; 
5)將步驟3)及步驟4)所得的細粉混合均勻,和, 
6)檢測步驟5)的混合產物中的天麻素含量,保留天麻素含量不低于10mg/g,優選不低于14mg/g的混合產物,即得中藥組合物。 
本發明人經研究進一步優化了制備工藝。例如上述制備方法中: 
在步驟1)中,加水的總重量為所煎煮藥材量的5~15倍,優選為10倍。 
或者,上述制備方法中: 
在步驟1)中,煎煮是分2~4次煎煮,優選分3次煎煮。 
或者,上述制備方法中: 
在步驟1)中,每次煎煮的時間為0.5~3h,優選每次煎煮時間為1~2h。 
或者,上述制備方法中: 
在步驟2)中,流浸膏的60℃的相對密度為1.0~1.5,優選為1.10~1.3。 
或者,上述制備方法中: 
在步驟3)中,沉淀時加乙醇至乙醇濃度為60~80%(V/V),優選為70%(V/V)。 
或者,上述制備方法中: 
在步驟3)中,沉淀的時間是12~36h,優選為24h。 
或者,上述制備方法中: 
在步驟3)中,濃縮為濃縮至60℃的相對密度為1.30~1.35的稠膏。 
或者,上述制備方法中: 
在步驟6)中,合格的產物經HPLC檢測天麻素含量不低于10mg/g,優選不低于14mg/g。 
在第二方面,本發明相應地提供了本發明第一方面的中藥組合物的制備方法,其包括: 
1)取處方比例的川芎、天麻、白芷、白芍及元胡,加水煎煮,濾過,合并并收集濾液得水煎液; 
2)將步驟1)獲得的水煎液減壓濃縮得流浸膏; 
3)將步驟2)所得的流浸膏加乙醇沉淀,收集濾液,濃縮、干燥并粉碎成細粉; 
4)取處方比例的全蝎粉碎成細粉; 
5)將步驟3)及步驟4)所得的細粉混合均勻,和, 
6)檢測步驟5)的混合產物中的天麻素含量,保留天麻素含量不低于10mg/g,優選不低于14mg/g的混合產物,即得中藥組合物。 
優選在本發明第二方面的制備方法中 
在步驟1)中,加水的總重量為所煎煮藥材量的5~15倍,優選為10倍; 
在步驟1)中,煎煮是分2~4次煎煮,優選分3次煎煮; 
在步驟1)中,每次煎煮的時間為0.5~3h,優選每次煎煮時間為1~2h; 
在步驟2)中,流浸膏的相對密度為1.0~1.5(60℃),優選為1.10~1.3(60℃); 
在步驟3)中,沉淀時加乙醇至乙醇濃度為60~80%(V/V),優選為70%(V/V); 
在步驟3)中,沉淀的時間是12~36h,優選為24h;在步驟3)中,濃縮為濃縮至相對密度為1.30~1.35(60℃)的稠膏;和/或, 
在步驟6)中,合格的產物經HPLC檢測天麻素含量不低于10mg/g,優選不低于14mg/g。 
在第三方面,本發明提供了用于治療頭痛(如,偏頭痛,緊張性頭痛等多種頭痛)的藥物制劑,其包括本發明第一方面的中藥組合物和藥學上可接受的輔劑。 
在本文中,藥學上可接受的輔劑包括藥學上可接受的載體、賦形劑、稀釋劑等,它們與活性成分相容。運用藥學上可接受的輔劑制備藥物制劑對本領域普通技術人員來說是公知的。本發明的藥物制劑將活性成分(中藥組合物)和藥學上可接受的輔劑組合在一起,配制成各種制劑,優選為固體制劑和液體制劑,更優選為固體制劑。本發明的制劑可以為單位劑量形式,如片劑、丸劑、膠囊劑(包括持續釋放或延遲釋放形式)、粉劑、混懸劑、顆粒劑、酊劑、糖漿劑、乳液劑、懸浮液、針劑、等劑型以及各種緩釋劑型,從而適合各種給藥方式,例如口服、非腸道注射、粘膜、肌肉、靜脈內、皮下、眼內、皮內或經過 皮膚等的給藥形式。 
優選本發明第三方面的藥物制劑是口服藥物制劑,如顆粒劑、片劑、丸劑和/或膠囊劑,更優選為片劑。 
藥物制劑的用量可以根據其中的活性成分(中藥組合物)的含量并結合具體劑型、給藥方式以及給藥對象的情況而定,也可以根據動物實驗來推定人的劑量并確定所需的含量。在本發明的具體實施方式中,藥物制劑的用量通常以川芎、天麻、白芷、白芍、元胡及全蝎等生藥(原料)的量來計,不考慮其中的藥學上可接受的輔劑量。現存的藥學上可接受的輔劑數量眾多,根據本發明人實驗,優選在本發明第三方面的藥物制劑中,藥學上可接受的輔劑包括淀粉、羧甲淀粉鈉和/或二氧化硅。 
在另一方面,本發明提供了本發明第一方面的中藥組合物在制備具有鎮痛作用、鎮靜作用和/或改善血液流變性作用的藥物中的應用及在治療或預防偏頭痛、緊張性頭痛等多種頭痛的藥物中的應用,優選提供本發明第一方面的中藥組合物在制備用于治療和/或改善本發明具體實施方式所述癥狀的藥物制劑中的應用。優選其中藥物制劑是本發明第三方面的藥物制劑。 
本發明取得的優異效果包括: 
1.組方新穎合理、簡單有效:方中川芎味辛性溫,歸肝、膽、心包經,辛溫升散而能上行頭目,善于祛風活血而止頭痛,長于治少陽、厥陰經頭痛(頭頂或兩側痛),為諸經頭痛之要藥;天麻味甘性平,既息肝風,又平肝陽,祛風通絡,與川芎為伍,其力倍增,共為君藥。白芷辛散而不燥,長于治陽明經頭痛(前額及眉心痛),元胡辛散溫通,能活血行氣止痛,二者協助君藥以增強疏風止痛之效,共為臣藥。風藥多燥,白芍苦、甘、酸,微寒,能養血柔肝,緩急止痛,使祛風而不傷陰血,防止生發太過,為佐藥。全蝎辛平,善于搜風通絡止痛,可引諸藥直達病所,為使藥。諸藥合用,共奏活血祛風、通絡止痛之功。 
2.有效部位集中、服用劑量小、患者服用方便。本發明所采用水煎醇沉的提取方式對活性物質的有效成分進行了富集,除去了雜質,大大減少了服用劑量,符合現代中藥“三效、三小、五方便”的特點。且利用本發明所提供的制劑工藝所制得的片劑,患者服用方便,生產工藝簡單、釋藥速度快,有利于藥效的發揮。 
3.制備工藝簡單,無特殊試劑及設備的要求,易于進行大規模生產。 
4.產品質量穩定可控。本發明采用薄層層析法對中藥原料川芎、天麻、白芷、元胡及白芍鑒別分析,從原料源頭進行質量控制。隨后采用HPLC的方法以天麻素為檢測指標來控制產品的質量,通過原料控制及產品控制相結合的手段實現產品的穩定性。 
為了便于理解,以下將通過具體的實施例對本發明進行詳細地描述。需要特別指出的是,這些描述僅僅是示例性的描述,并不構成對本發明范圍的限制。依據本說明書的論述,本發明的許多變化、改變對所屬領域技術人員來說都是顯而易見的。 
另外,本發明引用了公開文獻,這些文獻是為了更清楚地描述本發明,它們的全文內容均納入本文進行參考,就好像它們的全文已經在本文中重復敘述過一樣。 
具體實施例
以下通過實施例進一步說明本發明的內容。如未特別指明,實施例中所用的技術手段為本領域技術人員所熟知的常規手段和市售的常用儀器,可參見《中國藥典》以及SFDA的相關規定和指引等。 
實施例一:天芎頭風片的制備 
1、處方: 
川芎  750g  天麻  600g  元胡  600g 
白芷  300g  白芍  300g  全蝎  45g 
2、中藥組合物的制備: 
取處方比例藥材(除全蝎),在加水量分別是藥材重量的4倍、3倍及3倍的情況下煎煮三次,每次煎煮1.5小時,濾過,合并濾液,減壓濃縮至相對密度為1.20(60℃測)的流浸膏,加乙醇使含醇量為70%,靜置24小時,取上清液,回收乙醇,減壓濃縮至相對密度為1.30~1.35(60℃測)的稠膏,減壓干燥,并粉碎,過100目篩,得干浸粉。稱取處方比例的全蝎,粉碎成粉,與干浸粉混合均勻,即為中藥組合物。 
3、藥物制劑的制備: 
稱取制備好的中藥組合物282g,加入168g淀粉和45g羧甲淀粉鈉,混勻,用無水乙醇潤濕,再以95%乙醇制粒,過18目篩,30~40℃干燥,16目篩整粒,加入約5g二氧化硅,混勻,壓制成1000片。 
4.藥品質量的鑒定 
色譜條件及系統適用性試驗: 
以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;乙腈-0.05%磷酸水溶液(3:97)為流動相;檢測波長220nm;流速1.0ml/min;柱溫30℃;色譜柱的理論板數按天麻素峰計算應不低于4000。 
對照品溶液的制備:取天麻素對照品適量,精密稱定,加流動相制成每1ml含50μg的溶液,即得。 
供試品溶液的制備:取本品10片,研細,取細粉約0.3g,精密稱定,置具塞錐形瓶中,精密加入乙腈-0.05%磷酸水溶液(3:97)50ml,密塞,稱定重量,超聲處理(功率250w,頻率33kHz)20分鐘,放冷,再稱定重量,用乙腈-0.05%磷酸水溶液(3:97)補足減失的重量,搖勻,濾過,取濾液,即得。 
測定:精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20μl,分別注入液相色譜儀,測定,即得。 
測定結果:取三個批號重量差異項下制得的天芎頭風片各10片,精密稱定,研細,取約0.3g,精密稱定,按供試品溶液制備方法進行制備,分別精密吸取對照品溶液及供試品溶液各20μL,注入液相色譜儀,按上述色譜條件進行測定,按外標法以峰面積計算。結果見表1。 
表1三批樣品中天麻素含量測定結果 

由表1的測定結果可以看出,本發明的提取及制劑方法制得的天芎頭風片中天麻素含量平均在4mg左右,經換算成不含輔料的中藥組合物中,天麻素含量大于10mg/g,平均在14mg/g左右。但是,也發現,在部分批次中,天麻素含量低 于甚至大大低于10mg/g,其藥效下降十分明顯,故僅僅保留天麻素含量大于10mg/g的制劑進行以下實驗。 
實施例二:中藥組合物的藥效學實驗 
【受試藥物】 
試驗藥品名稱:實施例1記載的方式獲得的中藥組合物——天芎頭風片(下文如無相反指示,簡稱“中藥組合物”),其中每克中藥組合物相當于9.03生藥。 
【陽性對照藥】 
琥珀酸舒馬普坦片,天津華津制藥有限公司,規格:100mg/片,批號:2A6914T。正天丸,華潤三九醫藥股份有限公司,規格:6g/袋,批號:1202034H。 
布洛芬片,重慶科瑞制藥(集團)有限公司,規格:0.1克/片,批號:582001。艾司唑侖片,華中藥業股份有限公司,規格:1mg/片,批號:20120402。 
【試驗動物】 
SD大鼠:購自成都達碩生物科技有限公司,生產許可證號:SCXK(川)2008-24,動物質量合格證號:No.0002873。 
KM小鼠:購自成都達碩生物科技有限公司,生產許可證號:SCXK(川)2008-24,動物質量合格證號:No.0003150。 
【造模用藥】 
戊巴比妥鈉,Ruibio公司,規格:25g/瓶,批號:P3350。 
利血平注射液,廣東邦民制藥廠有限公司生產,規格:1ml:1mg,批號120507。硝酸甘油(GTN),北京益民藥業有限公司出品,規格1ml:5mg,批號:20110221。【試驗方法及結果】 
一、頭痛治療效果實驗 
1.皮下注射硝酸甘油所致大鼠偏頭痛模型預防和治療試驗 
⑴治療實驗 
取SD大鼠84只,雌雄各半,體重180-220g,隨機分為7組,每組12只。①中藥組合物高劑量組5.1g生藥/kg;②中藥組合物中劑量組3.4生藥/kg;③中藥組合物低劑量組1.7g生藥/kg;④西藥陽性組琥珀酸舒馬普坦片5.4mg/kg;⑤中藥陽性組正天丸1.4g/kg;⑥模型對照組和⑦空白對照組給予等體積純化水 10ml/kg。采用2.5mg/ml硝酸甘油按照10mg/kg劑量對大鼠皮下注射造模,制備大鼠偏頭痛模型,造模成功后立即按以上各分組劑量灌胃給藥,給藥后以每30min分段計算擾頭出現次數,共記錄不低于3h。 
⑵預防實驗 
將上述治療試驗結束后大鼠,繼續保持原有組別,每天按各分組對應的劑量灌胃給藥,連續2周;末次給藥30min后,大鼠皮下注射硝酸甘油注射液10mg/kg造模。造模成功后以每30min分段計算擾頭出現次數,共記錄不低于3h。 
實驗結果各給藥組與模型對照組比較,組間t檢驗處理,結果見表1-1、表1-2。 
實驗結果:治療結果:5.1~1.7g/kg中藥組合物對造模后0~60min內和120~180min撓頭有極顯著抑制作用(p<0.001),抑制作用與5.4mg/kg琥珀酸舒馬普坦片組相近。 
預防結果:5.1~1.7g/kg中藥組合物組對造模后0~180min撓頭有極顯著抑制作用(p<0.001),其抑制作用與1.4g/kg正天丸組相近。 
從實驗結果可以看出,中藥組合物在治療和預防頭痛有著明顯的療效,能夠顯著地抑制頭痛所引起的大鼠撓頭行為。 
2.利血平化低5-HT伴局部腦血管痙攣小鼠偏頭痛模型治療試驗 
取KM小鼠84只,雌雄各半,體重21-30g,隨機分為7組,每組12只。①中藥組合物高劑量組7.1g生藥/kg;②中藥組合物中劑量組4.7生藥/kg;③中藥組合物低劑量組2.4g生藥/kg;④西藥陽性組琥珀酸舒馬普坦片7.6mg/kg;⑤中藥陽性組正天丸1.8g/kg;⑥模型對照組和⑦空白對照組給予等體積純化水10ml/kg。皮下注射利血平(1mg/kg)制造小鼠偏頭痛模型,其中空白對照組以注射0.9%的氯化鈉注射液代替注射利血平,其它分組注射利血平造模。于造模后第5天開始,空白對照組和模型對照組灌胃純化水10ml/kg,其他各分組按對應的劑量灌胃藥液,連續灌胃6天。于末次給藥1小時后測各項指標。結果見表2-1、表2-2及表2-3。 
結果:與模型對照組比,7.1~2.4g/kg中藥組合物組能延長凝血時間(p<0.01或p<0.001),降低偏頭痛間歇期小鼠的血漿NO、5-HT和大腦5-HT的濃度(p<0.01)。 
結論:中藥組合物對利血平致偏頭痛有一定的治療作用,其作用機制與調節血中NO、5-HT的含量和腦組織中5-HT等單胺類神經遞質的含量有關。其中,7.1g/kg中藥組合物組的治療作用更為明顯。 
表1-1中藥組合物治療給藥對硝酸甘油致偏頭痛模型大鼠不同時間段撓頭次數影響 

注:各給藥組與模型對照組比較**p<0.01***p<0.001 
表1-2中藥組合物預防給藥對硝酸甘油致偏頭痛模型大鼠不同時間段撓頭次數影響 

注:各給藥組與模型對照組比較***p<0.001 
表2-1中藥組合物對利血平化偏頭痛模型小鼠凝血時間的影響

注:①模型對照組與空白對照組比較▲▲▲p<0.001②各給藥組與模型對照組比較***p<0.001或**p<0.01。 
PT:凝血酶原時間;aPTT:部分活化凝血酶原時間。 
表2-2中藥組合物對利血平化偏頭痛模型小鼠血漿NO和5-HT濃度影響

注:①模型對照組與空白對照組比較▲▲▲p<0.001②各給藥組與模型對照組比較**p<0.01***p<0.00 
表2-3中藥組合物對利血平化偏頭痛模型小鼠大腦5-HT含量影響

注:①模型對照組與空白對照組比較▲▲▲p<0.001②各給藥組與模型對照組比較**p<0.01***p<0.001 
二、改變血液流變性實驗 
改善血瘀模型大鼠血液流變性試驗 
取SD大鼠60只,體重220~260g,雌雄各半,隨機分為6組,每組10只。。①中藥組合物高劑量組3.36g生藥/kg;②中藥組合物中劑量組1.12g生藥/kg;③中藥組合物低劑量組0.56g生藥/kg;④中藥陽性組正天丸1.94g/kg;⑤正常組及⑥模型對照組給予等體積純化水10ml/kg。按各分組劑量每天灌胃給藥,第6天給藥后30min,除正常組外,其余各組大鼠皮下注射0.8mg/kg鹽酸腎上腺素(Adr),冰浴(0~2℃)4min,間隔兩小時后,再注射一次同等劑量Adr。最后一次注射Adr后12h,腹腔注射3%戊巴比妥鈉30mg/kg麻醉大鼠,從腹主動脈取血,以肝素抗凝,在血液流變儀上測定全血黏度和血漿黏度等指標,結果見表3-1、3-2所示。 
結果:3.36~1.12g/kg中藥組合物能明顯或極顯著改善血瘀模型大鼠全血粘度、全血高切還原粘度、全血低切還原粘度、紅細胞剛性指數、紅細胞聚集指數、全血高切相對指數、全血低切相對指數等血液流變學指標(p<0.05~p<0.001)。 
結論:中藥組合物具有明顯或極顯著改善血瘀證模型動物血液流變性指標作用,表明中藥組合物能使血瘀證模型動物血液粘、濃、凝、聚明顯恢復,能夠有效的改善血液流變性。 
表3-1中藥組合物改善血瘀模型大鼠血液流變性試驗

注:①模型組與正常組比較▲p<0.05▲▲p<0.01▲▲▲p<0.001②各給藥組與模型組比較*p<0.05**p<0.01***p<0.001 
表3-2中藥組合物改善血瘀模型大鼠血液流變性影響

注:①模型組與正常組比較▲p<0.05▲▲p<0.01▲▲▲p<0.001②各給藥組與模型組比較*p<0.05**p<0.01***p<0.001 
三、鎮痛實驗 
1.小鼠熱板法鎮痛試驗 
取KM小鼠60只,雌性。隨機分為模型對照組、中藥陽性組(正天丸)、西藥陽性組(布洛芬片)和中藥組合物高、中、低劑量組(9.44、4.72和2.36g生藥/kg),共6組,連續灌胃給藥5天,觀察第1次灌胃給藥后和末次灌胃給藥后2h內的痛閾值,計算痛閾值提高百分率,判斷起效時間和鎮痛作用持續時間,進行組間統計學分析,評價供試品鎮痛作用,結果見表4-1及表4-2。 
結果:如表4-1及表4-2所示,9.44~2.36g/kg中藥組合物單次給藥及多次給藥(連續給藥5天)后,對熱板法所致小鼠疼痛均有顯著鎮痛作用(p<0.001~p<0.05),鎮痛作用可持續120min,且鎮痛作用呈劑量-效應關系。中藥組合物鎮痛作用及鎮痛持續時間優于正天丸(p<0.05)。 
結論:中藥組合物對熱板法誘發熱灼型疼痛模型動物有鎮痛作用。 
2.小鼠扭體法鎮痛試驗 
取KM小鼠60只,雌雄各半。分性別、按體重隨機分為模型對照組、中藥陽性組(正天丸)、西藥陽性組(布洛芬片)和中藥組合物高、中、低劑量組(9.44、4.72和2.36g生藥/kg),共6組,連續灌胃給藥5天,觀察第1次灌胃給藥后和末次灌胃給藥后小鼠對腹腔注射0.6%冰乙酸誘發的扭體反應的抑制作用,計算抑制率,進行組間統計學分析,評價供試品鎮痛作用,結果見表4-3及表4-4。 
結果:如結果見表4-3及表4-4所示,9.44~4.72g/kg中藥組合物單次給藥及多次給藥(連續給藥5天)后,對醋酸致小鼠疼痛均有顯著鎮痛作用(p<0.001~p<0.05),鎮痛作用呈劑量-效應關系,且多次給藥較單次給藥效果更佳,說明沒有產生藥物耐受性,鎮痛作用效果優于正天丸(p<0.05)。 
結論:中藥組合物對化學刺激致痛模型動物具有鎮痛作用。 
表4-1中藥組合物單次給藥小鼠熱板法鎮痛試驗結果 

注:各給藥組與模型對照組比較*p<0.05**P<0.01***p<0.001 
表4-2中藥組合物連續給藥5天小鼠熱板法鎮痛試驗結果 

注:各給藥組與模型對照組比較*p<0.05**P<0.01***p<0.001 
表4-3中藥組合物單次給藥小鼠扭體法鎮痛試驗 

注:各給藥組與模型對照組比較*p<0.05**p<0.01***p<0.001 
表4-4中藥組合物連續給藥5天小鼠扭體法鎮痛試驗 

注:各給藥組與模型對照組比較*p<0.05**p<0.01***p<0.001 
四、鎮靜實驗 
1.小鼠自發活動試驗 
取KM小鼠60只,雌雄各半。按性別、體重隨機分為對照組、中藥陽性組(正天丸)、西藥陽性組(艾司唑侖片)和中藥組合物高、中、低劑量組(9.44、4.72和2.36g生藥/kg),共6組,連續灌胃給藥5天,觀察第1次灌胃給藥后和末次灌胃給藥后小鼠的自發活動(站立次數和走動次數)情況,進行組間統計學分析,評價供試品鎮靜作用,結果見表5-1及表5-2。 
結果:9.44~2.36g/kg中藥組合物單次給藥及多次給藥(連續給藥5天)后1h能顯著減少小鼠站立次數和走動次數(p<0.01或p<0.001),鎮靜作用呈劑量-效應關系,中藥組合物多次給藥與單次給藥鎮靜效果相當,說明沒有產生藥物耐受性,其鎮靜作用效果優于正天丸和艾司唑侖片(p<0.05)。 
結論:中藥組合物具有鎮靜作用。 
表5-1中藥組合物單次給藥小鼠自發活動試驗 

注:各給藥組與對照組比較*p<0.05**p<0.01***p<0.001 
表5-2中藥組合物多次給藥小鼠自發活動試驗 

注:各給藥組與對照組比較*p<0.05**p<0.01***p<0.001 
2.小鼠戊巴比妥鈉閾劑量和閾下劑量催眠試驗 
設對照組、中藥陽性組(正天丸)、西藥陽性組(艾司唑侖片)和中藥組合物高、中、低劑量組(9.44、4.72和2.36g生藥/kg),每組10只KM種小鼠,雌雄各半。連續灌胃給藥5天,觀察第1次灌胃給藥后和末次灌胃給藥后,對戊巴比妥鈉閾劑量催眠作用(催眠潛伏期和催眠時間)的影響,以及對戊巴比妥鈉閾下劑量誘導小鼠入睡數量的影響,評價其鎮靜作用,進行組間統計學分析,評價供試品鎮靜作用,結果見表5-3及表5-4。 
結果:9.44~2.36g/kg中藥組合物單次給藥及多次給藥(連續給藥5天)后具有延長閾劑量和閾下劑量戊巴比妥鈉催眠作用,其協同催眠作用效果優于正天丸片(p<0.05)。 
結論:中藥組合物具有鎮靜作用。 
表5-3中藥組合物單次給藥小鼠戊巴比妥鈉閾下劑量催眠試驗 

注:各給藥組與模型對照組比較**p<0.01***p<0.001 
表5-4中藥組合物多次給藥小鼠戊巴比妥鈉閾下劑量催眠試驗 

注:各給藥組與模型對照組比較*p<0.05**p<0.01 
【實驗結論】: 
通過以上實驗表明:中藥組合物可預防和治療硝酸甘油引起的偏頭痛大鼠, 對利血平化低5-HT伴局部腦血管痙攣小鼠偏頭痛模型具有顯著治療作用,并且能夠有效的改善血液流變性,對熱板法誘發熱灼型疼痛模型以及醋酸致小鼠疼痛模型均有顯著鎮痛作用,此外還具有鎮靜催眠作用。 
實施例三中藥組合物的急毒實驗 
中藥組合物干膏粉按4.25g生藥/ml、40ml/kg/次及3次/24h的最大給藥量(510.00g生藥/kg/24h),約相當于臨床日用劑量983倍,灌胃給藥KM小鼠,觀察給藥后14天內小鼠出現的毒性反應癥狀和恢復時間。 
結果:給藥后,給藥組和對照組小鼠運動功能、反射、眼檢指征、心血管指征、唾液分泌、肌張力、及皮膚均未見任何異常情況,兩組小鼠糞便呈濕潤顆粒狀,未見驚厥、抽搐、豎毛、痛覺喪失或死亡等毒性反應。試驗觀察期間給藥組小鼠平均體重增長率和小鼠攝食量與對照組相當,各時間點檢查兩組體重及攝食量無明顯差異。系統尸解檢查結果無異常。 
結論:中藥組合物給KM品系小鼠灌胃未測出LD50,24小時內給藥3次,觀察14天,小鼠無死亡,其最大受試藥物量509.94g/kg/24h,約為臨床人擬用量的983倍。在此劑量下未觀察到中藥組合物的毒性反應。 
實施例四中藥組合物的長毒實驗 
中藥組合物干膏粉按41.54、20.77、10.38g生藥/kg/24h,相當于臨床劑量的80、40、20倍,連續灌胃給藥3個月,停藥恢復2周,觀察大鼠給藥期間和停藥期間出現的毒性反應癥狀。觀察結果如下: 
(1)一般情況觀察 
給藥期間大鼠呼吸系統、消化系統、中樞和運動神經系統、植物神經系統、泌尿生殖系統、眼、皮膚和皮毛觀察均無異常。 
(2)體重和大鼠體重增長 
體重:♂、♀大鼠各劑量組與對照組比較無顯著性差異(P>0.05)。♂大鼠體重增長:♂大鼠大劑量組第9、12周體重增長明顯低于對照組;中劑量組第8、15周體重增長明顯高于對照組,第9周體重增長明顯低于對照組;小劑量第5周體重增長明顯低于對照組。♀大鼠體重增長:大劑量組第4、7、11周體重增長明顯 低于對照組;小劑量組第10周體重變化值明顯高于對照組,小劑量組第4、11周體重變化值明顯低于對照組。分析:大鼠體重增長、攝食量在個別周低于對照組,又在個別周高于對照組,無明顯劑量關系,為動物的正常生理波動,非藥物引起,故無生物學意義。 
(3)攝食量 
♂大鼠大劑量組第7周飼料攝食量明顯高于對照組,第8、12周飼料攝食量明顯低于對照組;中劑量組第1、2、3、10、11周飼料攝食量明顯高于對照組,第8、12周飼料攝食量明顯低于對照組;小劑量組第1、2、10周飼料攝食量明顯高于對照組,第8周飼料攝食量明顯低于對照組。♀大鼠大劑量組第7周飼料攝食量明顯高于對照組,第5周飼料攝食量明顯低于對照組;中劑量組第7周飼料攝食量明顯高于對照組。 
分析:大鼠攝食量在個別周低于對照組,又在個別周高于對照組,無明顯劑量關系,為動物的正常生理波動,非藥物引起,故無生物學意義。 
(4)血常規和網織紅細胞檢查 
給藥3個月和恢復期血液學指標各劑量組和對照組比較無明顯差異。 
(5)血凝檢測 
Coag-T給藥期和停藥期檢查均無明顯縮短或延長變化。 
(6)血液生化檢查結果 
①肝功能檢查 
大鼠連續給藥3個月,中劑量組球蛋白(G)明顯高于對照組,其值在正常范圍內波動,無其它肝損傷特異性指標異常表現,病理組織檢查大劑量組肝臟也未見明顯異常病理變化,無劑量關系,故無生物學意義。停藥2周后恢復。給藥3個月和停藥2周其它肝功能檢查未見明顯異常(p>0.05)。 
②腎功能檢查 
給藥3個月和停藥2周腎功能檢查未見明顯異常(p>0.05)。 
③血脂血糖檢查 
給藥3個月和停藥2周血脂血糖檢查未見明顯異常(p>0.05)。 
④心肌酶譜檢查 
給藥3個月和停藥2周CK檢查未見明顯異常(p>0.05)。 
(7)血清電解質檢查 
給藥3個月中藥組合物大劑量組Na離子升高(p<0.05),升高率1.16%,停藥后可以恢復。其余指標無明顯差異。停藥2周,小劑量組氯離子(CL)明顯低于對照組,其值在正常范圍內波動,因無劑量關系,故無生物學意義。 
(8)系統尸解及臟器指數檢查 
給藥3個月和停藥2周系統尸解,各組受試大鼠體表、胸腹壁皮下組織、腹腔及盆腔、胸腔檢查、顱內檢查、心臟、主動脈、肝臟、脾臟、肺、腎、胃、十二指腸、空腸、回腸、盲腸、結腸、直腸、腦、脊髓、視神經、坐骨神經、垂體、淋巴結、內分泌腺(腎上腺、甲狀腺、甲狀旁腺、胰腺、胸腺)、頜下腺、子宮、陰道、卵巢、乳腺、睪丸、附睪、前列腺、精囊、膀胱、鼻中隔、咽喉、氣管、食道、眼、胸骨(骨髓)和骨骼肌均未見異常病變。給藥3個月和停藥2周各組受試大鼠心、肝、脾、肺、腎、腦、子宮(雌性)、卵巢(雌性)、睪丸(雄性)、附睪(雄性)、腎上腺、胸腺臟器指數檢查,均未見異常(p>0.05)。 
(9)病理組織學檢查 
連續灌胃給藥3個月組織病理學鏡下檢查,大劑量組和對照組大鼠主要病變表現為呼吸系統(肺)常見的炎癥病理改變,停藥恢復2周組織病理學鏡下檢查,大劑量組和對照組大鼠主要病變表現為呼吸系統(肺)常見的組織炎癥改變,對兩組大鼠上述病變類型數據進行等級資料分析統計和比較,結果均無明顯差異(P>0.05)。動物在試驗中途無死亡發生,考慮為灌胃給藥時嗆咳造成肺部炎性改變,與受試物無關。其它系統,如心血管系統、神經系統、淋巴造血系統、視覺系統、骨骼肌肉系統、生殖系統及內分泌系統均未發現明顯的器官組織病理性損害。 
(10)毒性分析及結論 
中藥組合物灌胃給藥3個月未見有明顯的毒性反應靶器官,主要毒性反應為本品長期大劑量服用可能引起Na離子升高,停藥后可恢復。中劑量組(20.77g生藥/kg/24h)及以下劑量為安全劑量。 

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