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評估體內血管舒縮反應的動物模型.pdf

摘要
申請專利號:

CN200980142455.4

申請日:

2009.10.21

公開號:

CN102238968B

公開日:

2015.01.07

當前法律狀態:

授權

有效性:

有權

法律詳情: 授權|||實質審查的生效IPC(主分類):A61K 49/00申請日:20091021|||公開
IPC分類號: A61K49/00 主分類號: A61K49/00
申請人: 強生醫藥研究及開發有限責任公司
發明人: T·J·帕里; B·P·達米亞諾; E·C·吉亞迪諾; M·A·康奈利
地址: 美國新澤西州
優先權: 2008.10.21 US 61/107,053
專利代理機構: 中國專利代理(香港)有限公司 72001 代理人: 李進;林毅斌
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法律狀態
申請(專利)號:

CN200980142455.4

授權公告號:

102238968B||||||

法律狀態公告日:

2015.01.07|||2011.12.21|||2011.11.09

法律狀態類型:

授權|||實質審查的生效|||公開

摘要

一種評估化合物對體內血管舒縮反應的作用的方法,包括以下步驟:將所述化合物給予家兔,測量所述家兔中央耳動脈的管腔直徑,與所述家兔所述中央耳動脈管腔的基線直徑相比,在給予所述化合物之前測量所述基線直徑。

權利要求書

1.一種評估化合物對體內血管舒縮反應的作用的方法,所述方法
包括以下步驟:將所述化合物給予家兔,測量所述家兔中央耳動脈
(CEA)的管腔直徑,與所述家兔所述中央耳動脈管腔的基線直徑相比,
在給予所述化合物之前測量所述基線直徑。
2.權利要求1的方法,其中將所述化合物經口、外周、胃腸外或
局部給予所述家兔。
3.權利要求1的方法,其中所述化合物是血管舒張劑。
4.權利要求1的方法,其中所述化合物是血管收縮劑。
5.權利要求1的方法,其中通過超聲顯像系統測量所述管腔的直
徑。
6.一種評估化合物對體內血管舒縮反應的作用的方法,所述方法
包括以下步驟:
a.測量家兔CEA管腔的基線直徑;
b.將所述化合物給予所述家兔;
c.將血管收縮劑給予所述家兔的所述CEA使所述血管的直徑預
收縮;
d.將血管舒張劑給予所述家兔的所述CEA以增加所述預收縮血
管的直徑;和
e.通過與在步驟a測量的所述管腔的基線直徑相比,測量所述家
兔所述CEA所述管腔的直徑,來確定所述化合物對步驟c和d所得所
述血管的直徑的作用。
7.權利要求6的方法,其中通過超聲顯像系統測量所述管腔的直
徑。
8.權利要求6的方法,其中所述血管收縮劑包括去甲腎上腺素、
腎上腺素、苯腎上腺素、甲氧明、美芬丁胺、間羥胺、甲氧胺福林、
高劑量多巴胺、可卡因、苯丙胺和相關藥物、5-羥色胺、加壓素和相
關類似物、血管緊張素II和相關的肽、內皮素肽、尿壓素II或其組合。
9.權利要求6的方法,其中所述血管舒張劑包括乙酰膽堿、乙酰
甲膽堿、醋克利定、檳榔堿、毛果蕓香堿、西維美林、硝普鹽、硝酸
甘油、硝普酯、硝基甘油、笑氣、異丙腎上腺素和相關的β-2腎上腺
素受體激動劑、肼屈嗪、米諾地爾、二氮嗪、維拉帕米及其它鈣通道
拮抗劑、卡托普利、氯沙坦、可樂定、酮色林、組胺、六烴季銨、緩
激肽和相關的肽、腎上腺髓質素、心房肽和腦鈉肽、降鈣素基因相關
肽或其組合。
10.權利要求6的方法,其中所述血管舒張劑選自膽堿能激動劑
和血管舒張肽。
11.權利要求9的方法,其中所述膽堿能激動劑是乙酰膽堿、乙
酰甲膽堿、醋克利定、檳榔堿、毛果蕓香堿、西維美林或其組合。
12.權利要求9的方法,其中所述血管舒張肽是緩激肽和相關的
肽、腎上腺髓質素、心房肽和腦鈉肽、降鈣素基因相關肽或其組合。
13.一種評估化合物對體內血管舒縮反應的作用的方法,所述方
法包括以下步驟:
a.測量所述家兔CEA管腔的基線直徑;
b.將所述化合物給予家兔;
c.將血管收縮劑給予所述家兔的所述CEA使所述血管的直徑預
收縮;和
d.通過與在步驟a測量的所述管腔的基線直徑相比,測量所述家
兔所述中央耳動脈所述管腔的直徑,來確定所述化合物對步驟c所得
所述血管的直徑的作用。
14.權利要求13的方法,其中通過超聲顯像系統測量所述管腔的
直徑。
15.一種評估化合物對體內血管舒縮反應的作用的方法,所述方
法包括以下步驟:
a.測量所述家兔CEA管腔的基線直徑;
b.將所述化合物給予家兔;
c.通過與在步驟a測量的所述管腔的基線直徑相比,測量所述家
兔所述中央耳動脈所述管腔的直徑,來確定所述化合物對在步驟b所
得所述血管的直徑的作用。
16.權利要求15的方法,其中通過超聲顯像系統測量所述管腔的
直徑。

說明書

評估體內血管舒縮反應的動物模型

相關申請的交叉參考

本申請要求2008年10月21日提交的美國臨時專利申請號
61/107,053的權益,其內容通過引用而整體結合到本文中。

發明背景

1.發明領域

提供非侵入性評估體內血管收縮和血管舒張的方法。

2.相關技術的說明

心臟、腦和腎臟的血管結構能夠在較寬的灌注壓范圍內維持恒定
血流,這種現象稱為自動調節。幾種因素影響在冠脈及其它血管床中
的血流,包括動脈壓、組織壓、神經和體液影響、組織代謝物、血管
肌源性緊張度和內皮(由Konidala和Gutterman綜述,2004,Progress?in?
Cardiovascular?Diseases?46:349-373)。對血管中收縮和舒張刺激的適當
的血管舒縮反應是調節血流的關鍵因素。收縮與舒張刺激之間平衡的
失調可影響器官血流(如缺血)和總外周阻力,導致血壓改變(如高血
壓)。

在正常生理狀態下,通過阻力血管對多種因素反應性舒張的能力
可克服對血流的阻力。但是,一些病理生理狀態包括動脈粥樣硬化、
血栓形成和內皮損傷影響阻力血管對正常血管舒張信號反應性舒張
的能力。此外,疾病例如糖尿病、肥胖癥、充血性心力衰竭和高血壓、
某些自身免疫性疾病和某些內分泌紊亂對阻力血管的舒張具有不良
作用。

其它因素例如內源性因素、藥物和飲食可干擾正常動脈舒張。例
如,蛋氨酸及其代謝副產物同型半胱氨酸和血脂障礙損害多種血管類
型的舒張過程(Dayal?et?al.,2005,Circulation?112:737-744;Distrutti?et?
al.,2008,Hepatology?47:659-667;Hansrani?and?Stansby,2008,Journal?
of?Surgical?Research?145:13-18;Moat?et?al.,2006,Journal?of?Clinical?
Investigation?36:850-859)。高脂肪或鹽攝入產生異常血管舒張
(Hermann?et?al.,2003,Circulation?108:2308-2311;Mahmud?et?al.,2008,
Journal?of?Pediatrics?152:557-562)。也已顯示溶解的香煙顆粒和煙堿代
謝物可阻斷血管松弛(Zhang?et?al.,2006,BMC?Cardiovascular?Disorders?
6:3;Conklin?et?al.,2001,Journal?of?Surgical?Research,95:23-31)。通常見
于嗜鉻細胞瘤的過量循環去甲腎上腺素水平導致血管舒張異常
(Hagashi?et?al.,2002,Hypertension?39:513-518)。例如,糖皮質激素、
可卡因、某些抗腫瘤藥、環孢素A、氟烷已知對正常動脈舒張具有不
良作用(Tonga?et?al.,2001,Toxicology?Letters?123:43-50;El-Mas?et?al.,
2007,Biochemical?Pharmacology?73:359-367;Chow?et?al.,2006,Journal?
of?Clinical?Oncology?24:925-928;Mondo?et?al.,2006,Clinical?and?
Experimental?Pharmacology?and?Physiology?33:1029-1034)。

研究已顯示當內皮功能完整時,血管對膽堿能激動劑或擬膽堿藥
表現舒張反應(Sugama?et?al.,2002,Japan?Heart?J?43:545-558;Laher?et?
al.,1995,Canadian?J?Physiology?Pharmacology?73:1669-1673)。血管舒
張是由于乙酰膽堿及其它擬膽堿藥對內皮細胞上毒蕈堿M3受體的刺
激,然后釋放血管舒張劑一氧化氮(NO),這是靜止血管緊張度的主要
決定因素(Brown?and?Taylor,2001,Pharmacological?Basis?of?
Therapeutics,Hardman,J.G?and?Limbird,第10版,pp?155-173;Moody?et?
al.,2001,Pharmacological?Basis?of?Therapeutics,Hardman,J.G?and?
Limbird,第10版,pp?385-397)。當內皮細胞受傷或被損害時,毒蕈堿
受體-刺激的NO產生減少。在無對抗的交感神經腎上腺素能緊張度的
存在下,NO量減少聯合平滑肌細胞中毒蕈堿受體的刺激不僅可以導
致血管舒張反應的喪失,還可能在血管中產生血管收縮。因此,由膽
堿能激動劑刺激的血管舒張取決于功能上完整的內皮。

因為人與家兔之間血管形態的相似性,所以家兔已被用作測量對
藥物的血管舒縮反應的研究模型。Laher?et?al.使用從家兔腎臟或耳分
離的血管證實α-毒素選擇性損傷內皮介導的血管舒張(Laher?et?al.,
1995,Canadian?J?Physiology?Pharmacology?73:1669-1673)。最近,Drolet?
et?al.(Drolet?et?al.,2004,Cardiovascular?Ultrasound?2:10)使用腹主動脈
超聲記錄顯示在對乙酰膽堿的反應中,腹主動脈的直徑從1%變為4%。
這些方法既不提供正常存在于體內的合適生理環境,也缺乏有效檢驗
體內血管舒縮反應的足夠的動態范圍或敏感性。因此,仍然有需要發
展用于測量體內血管舒縮反應的有效和敏感的方法。

本申請提供評估測試化合物對血管舒縮反應的作用的方法。此
外,提供評估內皮對血管舒縮功能的作用的方法,包括全身暴露于收
縮劑例如去甲腎上腺素、舒張劑例如乙酰膽堿或其它增進或干擾內皮
信號的藥物,測量家兔中央耳動脈的內腔。本申請的動脈血管舒縮功
能動物模型可用于評估測試化合物對體內基礎血管緊張度和內皮依
賴性血管舒縮功能的作用。

發明概述

本發明的一個目的是提供評估化合物對體內血管舒縮反應的作
用的方法,包括以下步驟:將化合物給予家兔,測量家兔中央耳動脈
管腔的直徑,與家兔中央耳動脈管腔的基線直徑相比。化合物可以是
血管舒張劑或血管收縮劑。

本發明的另一個目的是提供評估化合物對體內血管舒縮反應的
作用的方法,包括以下步驟:測量家兔中央耳動脈管腔的基線直徑,
將化合物給予家兔,然后給予血管收縮劑以預收縮血管直徑,接著將
血管舒張劑給予家兔以增加預收縮血管的直徑,通過再次測量家兔中
央耳動脈管腔的直徑,確定在對血管舒張劑的反應中,化合物對預收
縮血管的基線直徑改變的作用。

本發明的另一個目的是提供評估化合物對體內血管舒縮反應的作
用的方法,包括以下步驟:將化合物給予家兔,測量家兔中央耳動脈管
腔的基線直徑,然后將血管收縮劑給予家兔中央耳動脈以收縮血管直
徑,通過再次測量家兔中央耳動脈管腔的基線直徑確定化合物對收縮
血管直徑的作用。

本發明的另一個目的是提供評估化合物對體內血管舒縮反應的作
用的方法,包括以下步驟:將化合物給予家兔,測量家兔中央耳動脈
管腔的基線直徑,通過再次測量家兔中央耳動脈管腔的基線直徑確定
化合物對收縮血管直徑的作用。

根據本發明,可以將化合物經口、外周、胃腸外或局部給予家兔,
可通過超聲顯像系統測量所述管腔的直徑。

根據以下詳細描述,并結合附圖考慮,本發明的其它目的和特征
將變得顯而易見。但是,應理解設計附圖只用于示例性目的,并非限
制本發明的定義,本發明的定義應參考所附的權利要求。還應理解附
圖不一定按比例繪制,除非另外說明,它們只用于在概念上舉例說明
本文描述的結構和方法。

附圖簡述

在圖中:

圖1:(A)在家兔中L-NAME對去甲腎上腺素預收縮動脈的乙酰
膽堿誘發的血管舒張中中央耳動脈管腔直徑的作用。將數據以終平均
直徑±SEM表示。N=6條血管。(B)在家兔中L-NAME對去甲腎上腺
素預收縮動脈的乙酰膽堿誘發的血管舒張中中央耳動脈管腔面積的
作用。將數據以終平均面積±SEM表示。N=6。

圖2:(A)在家兔中化合物2對去甲腎上腺素預收縮動脈的乙酰膽
堿誘發的血管舒張中中央耳動脈管腔直徑的作用。將數據以終平均直
徑±SEM表示。N=6。(B)在家兔中化合物2對去甲腎上腺素預收縮動
脈的乙酰膽堿誘發的血管舒張中中央耳動脈管腔面積的作用。將數據
以終平均面積±SEM表示。N=6。

圖3:(A)在家兔中托塞匹布對去甲腎上腺素預收縮動脈的乙酰膽
堿誘發的血管舒張中中央耳動脈管腔直徑的作用。將數據以終平均直
徑±SEM表示。N=6。(B)在家兔中托塞匹布對去甲腎上腺素預收縮
動脈的乙酰膽堿誘發的血管舒張中中央耳動脈管腔面積的作用。將數
據以終平均面積±SEM表示。N=6。

本發明優選實施方案的詳述

包括通常由一氧化氮介導的內皮依賴性血管舒張在內的血管舒
縮反應的異常,被認為在血管疾病(CAD,高血壓等)中發揮主要作用,
可能伴隨心血管危險增加。損傷正常血管舒張機制的藥物可增加不良
心血管事件的危險。臨床研究顯示在接受托塞匹布(一種膽固醇酯轉移
蛋白(CETP)抑制劑)的患者中收縮壓較高(Barter?et?al.,2007,New?
England?J?Med?357:2109-2122)。這可能是由于托塞匹布對正常血管舒
張刺激的血管舒縮反應的作用。因為CETP抑制劑是可能用于調節膽
固醇代謝的藥物,所以它可用于檢驗CETP抑制劑,包括托塞匹布和
化合物2,因為它們對血管舒縮反應的作用。托塞匹布,(2R,4S)-4-[[3,5-
雙(三氟甲基)芐基](甲氧基羰基)氨基]-2-乙基-6-(三氟甲基)-3,4-二氫喹
啉-1(2H)-甲酸乙酯,具有以下化學結構:


化合物2,1,1,1-三氟-3-[2-{3-[(1,1,2,2-四氟乙基)氧基]苯
基}-5-{3-[(三氟甲基)氧基]苯基}-3,4-二氫喹啉-1(2H)-基]丙-2-醇,具有
以下結構:


在本申請中,提供評估體內血管舒縮反應的方法。此外,提供評
估藥物或測試化合物對體內血管舒縮反應的作用的方法。還可通過在
用去甲腎上腺素預收縮的家兔中央耳動脈(CEA)中,用膽堿能激動劑
誘發血管舒張評估測試化合物對由內皮介導的血管舒縮反應的作用。
測試化合物可以是舒張或收縮劑或者對血管舒縮緊張度或血管直徑
沒有直接作用,可包括托塞匹布和化合物2。

術語“舒張劑”、“舒張藥物”、“血管舒張劑”或其變體用于本文指
能夠增加阻力血管直徑的任何分子。例如,舒張劑或藥物包括但不限
于以下化合物:膽堿能激動劑例如乙酰膽堿、乙酰甲膽堿、醋克利定、
檳榔堿、毛果蕓香堿、西維美林、硝酸酯化合物(如硝普鹽、硝酸甘油)、
笑氣、異丙腎上腺素和相關的β-2腎上腺素受體激動劑、肼屈嗪、米
諾地爾、二氮嗪、及其它鉀通道開放劑、維拉帕米及其它鈣通道拮抗
劑、血管緊張素轉換酶(ACE)抑制劑例如卡托普利、血管緊張素受體
拮抗劑例如氯沙坦、α-2腎上腺素受體拮抗劑包括可樂定等、5-羥色胺
拮抗劑包括酮色林、組胺、神經節阻滯藥物例如六烴季銨、內皮素受
體拮抗劑、加壓素拮抗劑、磷酸二酯酶抑制劑、血管舒張肽例如緩激
肽和相關的肽、腎上腺髓質素、心房肽和腦鈉肽、降鈣素基因相關肽
等。

術語“收縮劑”、“收縮藥物”、“血管收縮劑”或其變體用于本文指
能夠減小阻力血管直徑的任何分子。例如,收縮劑包括但不限于以下
化合物:去甲腎上腺素、腎上腺素、苯腎上腺素、甲氧明、美芬丁胺、
間羥胺、甲氧胺福林、高劑量多巴胺、可卡因、苯丙胺和相關藥物、
5-羥色胺、加壓素和相關類似物、血管緊張素II和相關的肽、內皮素
肽、尿壓素II等。

為了檢驗在血管舒張劑或血管收縮劑的存在下體內的血管舒縮
反應,使家兔耳的中央動脈暴露于這些藥物。此處發現CEA,一種阻
力血管,在對血管舒張劑或血管收縮劑的反應中,能夠在管腔直徑方
面經歷大的變化。這與使用主動脈或其它彈性動脈相反,在對這些藥
物的反應中,所述主動脈或其它彈性動脈在管腔直徑方面經歷最小的
變化。

將一組6只家兔用氯胺酮(50mg/kg)/賽拉嗪(100mg/kg)混合物肌
內給藥麻醉,置于加溫墊上以維持體溫。將家兔耳廓刮干凈并用非處
方脫毛劑脫毛。用加溫的超聲凝膠涂在右耳CEA背側面約2cm區域
上。用23.5MHz超聲探頭(型號RMV?708)評估家兔CEA的基線直徑
和面積。將圖像記錄在Visualsonics?Vevo?600系統上,在此接著測量
CEA管腔直徑和面積。將管腔直徑和面積以均數和均數的標準誤
(SEM)表示。通過與輸注泵連接的27-號蝶形針狀輸注裝置將去甲腎上
腺素和乙酰膽堿注入對側左耳靜脈內。在輸注期間以約5分鐘間隔獲
得圖像。

為了確認乙酰膽堿誘發的血管舒張為NO依賴性,連續5天對第
二組6只家兔給予與TangTM-調味飲用水混合的一氧化氮合酶抑制劑
L-NAME(400μg/mL)(N=3)或單獨的TangTM-調味飲用水(N=3)。
L-NAME,N(G)-硝基-L-精氨酸-甲酯,是阻斷正常一氧化氮依賴性血
管舒張的精氨酸衍生物。然后在第6天使家兔CEA顯像。讓家兔恢
復約1周,然后以交叉方式對每組3只家兔給予相反的治療5天,然
后在第6天顯像。

在另一組,在第1周中連續4天對6只成年New?Zealand雄性家
兔(2.5-3.5kg)口服給予(用飼管強飼)Imwitor/Cremophor/Water溶媒。
每天給予總體積3mL/kg溶媒(10%Imwitor,20%Cremophor?RH40和
70%水,淡乳白色化合物溶液)。在第4天,口服給予溶媒或藥物后3
小時,將家兔麻醉,如上所述測量溶媒對CEA管腔的作用。在1周
后,讓家兔恢復3天,然后在第2周期間連續4天口服給予約30mg/kg
測試化合物例如托塞匹布或化合物2。在第2周的第4天,通過如上
所述先后輸注去甲腎上腺素和乙酰膽堿評估在對測試化合物反應中
家兔CEA直徑的變化。再次讓家兔恢復1周以允許藥物清除,然后
每天給予溶媒,如上所述評估在對測試化合物反應中CEA直徑變化。

可以經口、外周、胃腸外或局部給予測試化合物。測試化合物的
每次給藥量和治療持續時間可變化,取決于測試化合物的效能或性
質,這可以很容易由本領域技術人員決定。

本發明家兔CEA模型顯示對誘發血管收縮的去甲腎上腺素敏感,
和在去甲腎上腺素誘發預收縮的背景下對誘發血管舒張的乙酰膽堿
敏感。而且,顯示乙酰膽堿的作用為一氧化氮依賴性,如在接受
L-NAME預治療組中在對乙酰膽堿輸注反應中缺乏血管舒張所示。與
溶媒治療相比,每天給予托塞匹布導致基礎血管收縮緊張度增加和消
除乙酰膽堿誘發的血管舒張。化合物2不影響基礎血管緊張度或乙酰
膽堿誘發的血管舒張。

本領域技術人員將知道對本文所述方法的其它適合的變更或修
飾,將能夠使此類方法適合用于本申請的家兔的CEA。例如,病變家
兔的CEA可用于評估測試化合物對病理狀態下血管舒縮反應的作用。
因為疾病,病變家兔的血管可表現異常基線血管舒縮緊張度和/或可對
收縮或舒張刺激異常反應。這可有助于理解在一些病理狀態下由內皮
介導的血管舒縮反應。另外,病變家兔的CEA可能不需要用血管舒
張劑或血管收縮劑預治療。可通過估計化合物對CEA管腔基線直徑
或面積的作用評估測試化合物對血管舒縮反應的作用。這可用于識別
能夠直接收縮或舒張病變血管的藥物或化合物,可用于理解疾病對血
管的病理生理影響或治療疾病的血管作用。此外,正常和病變家兔的
CEA可用于直接(head-to-head)比較以理解測試化合物的作用。

實施例1.評估由乙酰膽堿和去甲腎上腺素誘發的血管舒縮反應

采集一系列5個CEA圖像(分開約5分鐘)分別用于基線管腔直徑
(mm)和面積(mm2)測量。將腎上腺素能激動劑去甲腎上腺素以每分鐘
約28μg緩慢輸注,在操作過程期間保持維持。與輸注去甲腎上腺素
聯合,將乙酰膽堿以約10、17、30和56μg/min的遞增劑量輸注給藥,
各15分鐘。在每次15分鐘輸注期間收集幾次圖像。在最終的乙酰膽
堿和同時進行的去甲腎上腺素輸注期后,停止所有輸注,讓血管恢復
至其原始大小。在最后一次測量后立即從未顯像的對側CEA采集約2
mL血液樣品。將所有樣品收集入裝有EDTA的管內,以約10,000rpm
離心6分鐘。將血漿保存在-80℃直至分析待測化合物的濃度。此外,
從未試驗過的家兔采集血液用于產生標準藥物濃度曲線。

在未用舒張劑、收縮劑或測試化合物進行任何治療的麻醉家兔
中,發現基線CEA管腔直徑和面積分別為約0.8-0.9mm和約0.6-0.7
mm2。基線CEA管腔直徑不受靜脈內鹽水輸注的影響。用于本文時,
短語基線CEA管腔直徑和面積或變體指在給予任何化合物之前首次
測量的CEA內腔的血管口徑。

在接受單獨的乙酰膽堿輸注的組內,在至多56μg/min劑量的麻
醉家兔中,基線CEA直徑和面積不變。這顯示乙酰膽堿對已擴張的
管腔無作用。

在輸注去甲腎上腺素的組內,CEA管腔直徑和面積分別減小至約
0.5mm和約0.2mm2。在具有預收縮CEA的家兔中接著輸注乙酰膽堿
使管腔恢復至基線直徑和面積。這些結果顯示家兔CEA模型可用于
估計范圍分別為約44或70%基線直徑或管腔面積的血管舒縮變化。

為了檢驗這些反應是否由一氧化氮介導,將一氧化氮合酶抑制劑
L-NAME在飲用水(400μg/mL)中給予用乙酰膽堿和去甲腎上腺素治
療的家兔。實施例1的結果顯示在去甲腎上腺素預收縮的CEA中乙
酰膽堿誘發的血管舒張呈劑量依賴性,用L-NAME治療抑制這種乙酰
膽堿誘發的血管舒張(圖1A和1B)。這表明預收縮CEA的血管舒張反
應由NO介導和家兔CEA可作為體內內皮功能的模型。

實施例2.評估測試化合物對血管舒張反應的作用

通過經口給予家兔溶媒4天接著經口給予這些化合物檢驗托塞匹
布和化合物2對血管舒縮緊張度的作用。如上所述測量被治療家兔的
CEA管腔。

在用約30mg/kg口服劑量化合物2治療4天的家兔中,被治療家
兔的基線CEA管腔直徑和面積與溶媒的那些類似(圖2A和B)。如圖
2顯示,溶媒對去甲腎上腺素預收縮CEA管腔直徑和面積中乙酰膽堿
誘發的血管舒張無作用。在給予去甲腎上腺素和乙酰膽堿后,在化合
物2治療的家兔中CEA管腔直徑和面積分別為約0.8mm和0.6mm2,
類似于溶媒組的那些(圖2A和2B)。在最后一次經口給予后4小時,
收集血液樣品以確定家兔中的化合物2濃度。在最后給予后4小時在
用化合物2治療的家兔中血漿濃度是2.58±0.67μM。這表明化合物2
不影響基線CEA管腔直徑和面積或者在去甲腎上腺素預收縮CEA管
腔和面積中乙酰膽堿誘發的血管舒張,盡管它在血漿中很豐富。

在給予去甲腎上腺素或乙酰膽堿之前給予30mg/kg口服劑量托
塞匹布4天的家兔中,與溶媒組的0.85mm相比,基線CEA管腔直
徑減小至約0.55mm,與溶媒組的0.65mm2相比,基線CEA管腔面
積減小至約0.3mm2(圖3A和3B)。在給予去甲腎上腺素后,與溶媒
組的0.8mm相比,在托塞匹布治療家兔中,通過CEA管腔直徑和面
積測量乙酰膽堿誘發的血管舒張反應減小至約0.45mm。(與溶媒組0.6
mm2相比,CEA管腔面積的相應改變是0.2mm2)。在最后給予后4小
時在用托塞匹布治療的家兔中血漿濃度為約1.01±0.54μM。這表明
托塞匹布引起可測量的基線血管收縮和托塞匹布抑制去甲腎上腺素
預收縮CEA管腔中乙酰膽堿誘發的血管舒張,并且其血漿水平低于
化合物2。

在實施例2中,結果顯示與溶媒治療的對照相比,每天1次經口
給予托塞匹布(30mg/kg)4天產生基礎血管收縮,抑制麻醉家兔的
去甲腎上腺素預收縮中央耳動脈的乙酰膽堿誘發的舒張。以相同方案
經口給予相同劑量的化合物2不產生基礎血管收縮,對去甲腎上腺素
預收縮后乙酰膽堿誘發的血管舒張無作用。在任一種化合物最后給予
后4小時取樣的血漿水平提示每種藥物以微摩爾濃度存在,化合物2
的血漿濃度超過托塞匹布約2.5倍。這兩種化合物的不同反應提示并
非所有CETP抑制劑都干擾基線和內皮依賴性血管舒縮反應。

至此,雖然在應用于其優選的實施方案時,已顯示、描述和指出
了本發明的基本新的特征,但是應理解,可在不脫離本發明精神的情
況下,由本領域技術人員對示例裝置的形式和細節及其操作進行各種
省略和取代和改變。例如,明確指出以基本相同的方式發揮基本相同
的功能以獲得相同結果的那些因素和/或方法步驟的所有組合在本發
明范圍內。此外,應認識到,作為設計選擇的一般情況,與本發明的
任何公開形式或實施方案相關顯示和/或描述的結構和/或因素和/或方
法步驟可以任何其它公開或描述或提示的形式或實施方案進行結合。
因此,本發明將只由本文所附權利要求的范圍所示來限定。

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評估 體內 血管 反應 動物 模型
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