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一種食用菌單一型菌絲類母種的快速擴繁方法.pdf

摘要
申請專利號:

CN201110419351.2

申請日:

2011.12.15

公開號:

CN102523915B

公開日:

2015.01.14

當前法律狀態:

有效性:

法律詳情: 授權|||實質審查的生效號牌文件類型代碼:1604號牌文件序號:101322537383IPC(主分類):A01G 1/04專利申請號:2011104193512申請日:20111215|||公開
IPC分類號: A01G1/04 主分類號: A01G1/04
申請人: 濱州職業學院
發明人: 鄒向英; 趙洪斌; 蘇延友
地址: 256600 山東省濱州市黃河12路919號濱州職業學院
優先權:
專利代理機構: 濟南泉城專利商標事務所 37218 代理人: 張貴賓
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法律狀態
申請(專利)號:

CN201110419351.2

授權公告號:

102523915B||||||

法律狀態公告日:

2015.01.14|||2012.09.05|||2012.07.04

法律狀態類型:

授權|||實質審查的生效|||公開

摘要

本發明涉及生物領域,特別公開了一種食用菌單一型菌絲類母種的快速擴繁方法。該食用菌單一型菌絲類母種的快速擴繁方法,其特征在于:包括如下步驟:(1)制備無菌水和試管斜面;(2)制備母種菌絲懸液;(3)擴接;(4)培養。本發明食用菌單一型菌絲類母種的快速擴繁方法的有益效果是:所需設備簡單,操作方法簡易,成本低廉;接種速度快,5mL菌絲懸液可擴接100支母種,用時10~15min;可大幅度縮短食用菌單一型菌絲類母種擴繁時的發菌時間,菌齡短且一致,菌絲活力旺盛,尤其是珍稀食用菌更加明顯,為食用菌生產提供良好的基礎,能使母種快速擴繁,滿足食用菌大規模生產所需的優質、復壯母種。

權利要求書

1.一種食用菌單一型菌絲類母種的快速擴繁方法,其特征在于:包括如下步驟:(1)制備無菌水和試管斜面:a.在三角瓶中加入水,瓶口用牛皮紙扎口;b.培養基采用加富綜合馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基,其制備方法為:先將馬鈴薯洗凈去皮,再稱取200g切碎,加80g麥麩,加水1000?mL文火煮沸20~30?min后,用四層紗布過濾,再加入葡萄糖20g、磷酸二氫鉀2g、硫酸鎂0.5g和瓊脂20g,繼續加熱攪拌混勻至瓊脂融化,再補足水量至1000mL,在溫度不低于70℃時將培養基分裝至試管長度的1/4~1/5,試管口加梳棉塞,然后用牛皮紙在試管口棉塞外捆扎;c.將盛有水的三角瓶和盛有加富綜合馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基的試管立即裝入高壓鍋,0.11~0.12MPa高壓滅菌30?min,滅菌后5?min內將加富綜合馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基擺成頂端距試管口30~50mm的斜面,擺成斜面培養基長度130mm,將無菌水和加富綜合馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基冷卻后備用;(2)制備母種菌絲懸液:選用組織分離培養的優質健壯的母種,在無菌條件下,用無菌移液管或注射器在被擴母種試管內注入無菌水,用接種針拌碎生長有被擴母種的培養基,制成母種菌絲懸液;(3)擴接:在無菌條件下,用無菌移液管或注射器抽取母種菌絲懸液5mL,在每一支步驟(1)制備的盛有加富綜合馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基的擴接試管內注入0.05mL母種菌絲懸液擺平;(4)培養:將擴接試管放入恒溫培養箱內恒溫培養,食用菌單一型菌絲類母種6~8天菌絲即可長滿130mm的試管斜面培養基。

說明書

一種食用菌單一型菌絲類母種的快速擴繁方法

???????

(一)??????技術領域

????本發明涉及生物領域,特別涉及一種食用菌單一型菌絲類母種的快速擴繁方法。

(二)??????背景技術

????食用菌的大規模生產,離不開母種的擴大繁殖。母種是食用菌生產的基礎,優質復壯的母種是食用菌高產栽培的先決條件。食用菌單一型菌絲類母種通常采用傳統的一點式接種方法,發菌時間偏長,既影響生產,又因菌齡長、菌絲弱,造成再次擴繁時菌種活性下降,特別是珍稀食用菌尤為嚴重,因此必須要改進母種的接種方法。

(三)??????發明內容

????本發明為了彌補現有技術的不足,提供了一種操作方法簡易、接種速度快、發菌時間短的食用菌單一型菌絲類母種的快速擴繁方法。

本發明是通過如下技術方案實現的:

一種食用菌單一型菌絲類母種的快速擴繁方法,其特征在于:包括如下步驟:

(1)制備無菌水和試管斜面:

a.在三角瓶中加入水,瓶口用牛皮紙扎口;

b.玻璃試管使用18×180mm或20×200mm,棉塞使用梳棉,要求干燥、潔凈,松緊適度;培養基采用加富綜合馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基,其制備方法為:先將馬鈴薯洗凈去皮,再稱取200g切碎,加80g麥麩,加水1000?mL文火煮沸20~30分鐘后,用四層紗布過濾,再加入葡萄糖20g、磷酸二氫鉀2g、硫酸鎂0.5g和瓊脂20g,繼續加熱攪拌混勻至瓊脂融化,再補足水量至1000mL,在溫度不低于70℃時將培養基分裝至試管長度的1/4~1/5,試管口加梳棉塞,然后用牛皮紙在試管口棉塞外捆扎;

c.將盛有水的三角瓶和盛有加富綜合馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基的試管立即裝入高壓鍋,0.11~0.12MPa高壓滅菌30?min,滅菌后在5?min內將加富綜合馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基擺成頂端距試管口30~50mm的斜面,擺成斜面培養基長度130mm,將無菌水和加富綜合馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基冷卻后備用;

(2)制備母種菌絲懸液:被擴母種最好是選用組織分離培養的優質健壯的母種,質量符合食用菌菌種通用技術要求NY/T?1742—2009標準,在無菌條件下,用無菌移液管或注射器在被擴母種試管內注入無菌水,用接種針拌碎生長有被擴母種的培養基,制成母種菌絲懸液;

(3)擴接:在無菌條件下,用無菌移液管或注射器抽取母種菌絲懸液5mL,在每一支步驟(1)制備的盛有加富綜合馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基的擴接試管內注入2滴(約0.05mL)母種菌絲懸液擺平;

(4)培養:將擴接試管放入恒溫培養箱內,按食用菌菌種通用技術要求(NY/T?1742—2009)恒溫培養,可比常規接種方法縮短一半發菌時間,珍稀食用菌單一型菌絲類母種一般6~8d菌絲即可長滿130mm的試管斜面培養基。

本發明食用菌單一型菌絲類母種的快速擴繁方法的有益效果是:所需設備簡單,操作方法簡易,成本低廉;接種速度快,5mL菌絲懸液可擴接100支母種,用時10~15?min;可大幅度縮短食用菌單一型菌絲類母種擴繁時的發菌時間,菌齡短且一致,菌絲活力旺盛,尤其是珍稀食用菌更加明顯,為食用菌生產提供良好的基礎,能使母種快速擴繁,滿足食用菌大規模生產所需的優質、復壯母種。

(四)??????具體實施方式

實施例1:黃傘母種的擴繁:

(1)制備無菌水和試管斜面:

a.在250mL三角瓶中加入100mL水,用牛皮紙扎口;

b.試管選用18×180mm,棉塞使用梳棉,干燥、潔凈,松緊適度;培養基采用加富綜合馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基,其制備方法為:先將馬鈴薯洗凈去皮,再稱取200g切碎,加80g麥麩,加水1000?mL文火煮沸20~30分鐘后,用四層紗布過濾,再加入葡萄糖20g、磷酸二氫鉀2g、硫酸鎂0.5g和瓊脂20g,繼續加熱攪拌混勻至瓊脂融化,再補足水量至1000mL,在溫度不低于70℃時將培養基分裝至試管長度的1/4~1/5;試管口加棉塞,松緊適度,以提起棉塞試管不脫落,拔出棉塞有輕微的聲音為適宜,然后7支試管為1組,用牛皮紙在試管口棉塞外捆扎在一起;

c.將盛有水的三角瓶和盛有加富綜合馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基的試管立即裝入高壓鍋,0.11~0.12MPa高壓滅菌30?min,滅菌后5?min內將加富綜合馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基擺成頂端距試管口30~50mm的斜面,擺成斜面培養基長度130mm,將無菌水和加富綜合馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基冷卻后備用;

(2)制備母種菌絲懸液:被擴母種采用組織分離的母種,菌絲白色至微黃色,長滿試管斜面12~14d,栽培生物學效率大于70%,在無菌條件下,用無菌注射器在發好菌的被擴黃傘母種試管內注入10mL無菌水,用接種針拌碎生長有被擴黃傘母種的培養基,制成母種菌絲懸液;

(3)擴接:在無菌條件下,用無菌注射器抽取母種菌絲懸液5mL,在每一支步驟(1)制備的盛有加富綜合馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基的擴接試管內注入2滴(約0.05mL)母種菌絲懸液擺平,5mL菌絲懸液可擴接100多支試管母種;

(4)培養:將擴接試管放入恒溫培養箱內,25℃恒溫培養6d即可,常規接種方法相同的試管菌絲發滿需12.3d。

實施例2:白靈菇母種的擴繁:

(1)制備無菌水和試管斜面:

a.在250mL三角瓶中加入100mL水,用牛皮紙扎口;

b.試管選用18×180mm,棉塞使用梳棉,干燥、潔凈,松緊適度;培養基采用加富綜合馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基,其制備方法為:先將馬鈴薯洗凈去皮,再稱取200g切碎,加80g麥麩,加水1000?mL文火煮沸20~30分鐘后,用四層紗布過濾,再加入葡萄糖20g、磷酸二氫鉀2g、硫酸鎂0.5g和瓊脂20g,繼續加熱攪拌混勻至瓊脂融化,再補足水量至1000mL,在溫度不低于70℃時將培養基分裝至試管長度的1/4~1/5;試管口加棉塞,松緊適度,以提起棉塞試管不脫落,拔出棉塞有輕微的聲音為適宜,然后7支試管為1組,用牛皮紙在試管口棉塞外捆扎在一起;

c.將盛有水的三角瓶和盛有加富綜合馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基的試管立即裝入高壓鍋,0.11~0.12MPa高壓滅菌30?min,滅菌后5?min內將加富綜合馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基擺成頂端距試管口30~50mm的斜面,擺成斜面培養基長度130mm,將無菌水和加富綜合馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基冷卻后備用;?

(2)制備母種菌絲懸液:被擴母種采用組織分離的母種,菌絲潔白、健壯、棉毛狀,表面均勻、舒展、平整,邊緣整齊,背面無色素,長滿試管斜面12~15d,栽培生物學效率大于30%,在無菌條件下,用無菌注射器在發好菌的被擴白靈菇母種試管內注入10mL無菌水,用接種針拌碎生長有被擴白靈菇母種的培養基,制成母種菌絲懸液;

(3)擴接:在無菌條件下,用無菌注射器抽取母種菌絲懸液5mL,在每一支步驟(1)制備的盛有加富綜合馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基的擴接試管內注入2滴(約0.05mL)母種菌絲懸液擺平,5mL菌絲懸液可擴接100多支試管母種;

(4)培養:將擴接試管放入恒溫培養箱內,25℃恒溫培養7d即可,相同的試管在常規接種方法下菌絲發滿需15d。

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一種 食用菌 單一 菌絲 類母種 快速 方法
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