• / 8
  • 下載費用:30 金幣  

利用馬尾松種子獲取無菌苗的方法.pdf

摘要
申請專利號:

CN201310149982.6

申請日:

2013.04.26

公開號:

CN103210845B

公開日:

2015.01.07

當前法律狀態:

授權

有效性:

有權

法律詳情: 授權|||實質審查的生效IPC(主分類):A01H 4/00申請日:20130426|||公開
IPC分類號: A01H4/00 主分類號: A01H4/00
申請人: 廣西壯族自治區林業科學研究院
發明人: 譚健暉; 陳虎; 楊章旗
地址: 530002 廣西壯族自治區南寧市邕武路23號
優先權:
專利代理機構: 廣西南寧公平專利事務所有限責任公司 45104 代理人: 楊立華
PDF完整版下載: PDF下載
法律狀態
申請(專利)號:

CN201310149982.6

授權公告號:

103210845B||||||

法律狀態公告日:

2015.01.07|||2013.08.21|||2013.07.24

法律狀態類型:

授權|||實質審查的生效|||公開

摘要

本發明公開了一種利用馬尾松種子獲取無菌苗的方法,利用海綿良好的吸水和保水性能,將消毒后的馬尾松種子放入其中培養10-20天即可獲得生長健壯的無菌苗。應用本發明培養馬尾松無菌苗,出苗時間明顯縮短,苗木生長尤其是根系生長優于瓊脂培養;同時簡化了實驗步驟,提高了培養效率;此外,由于海綿可重復利用且不產生廢棄物,節約了育苗繁殖成本又保護了環境。本發明的無菌苗培育方法經濟高效且操作簡便,適用于馬尾松的離體培養和轉基因等生物技術的研究和生產,對馬尾松的良種繁育和生物技術研究有重要意義。

權利要求書

權利要求書
1.   一種利用馬尾松種子獲取無菌苗的方法,其特征在于以吸水海綿作為培養基。

2.   根據權利要求1所述的利用馬尾松種子獲取無菌苗的方法,其特征在于包括以下步驟:<1>培養基準備
剪取長╳寬為3?5cm╳1?2cm海綿,將海綿充分吸水,將吸足水的海綿放入組培瓶內,扭緊瓶蓋,于121℃滅菌鍋下滅菌20min;
<2>種子消毒
采用0.1%升汞對種子進行消毒8?10min,無菌水沖洗4?5次;
<3>接種
在無菌條件下將步驟<2>消毒好的種子接種到步驟<1>的海綿培養基中;
<4>培養
將步驟<3>的組培瓶置于23?25℃條件下暗培養10?20天。

3.   根據權利要求2所述的利用馬尾松種子獲取無菌苗的方法,其特征在于:步驟<1>中海綿平放在組培瓶底,步驟<3>中種子接種到海綿上表面。

4.   根據權利要求3所述的利用馬尾松種子獲取無菌苗的方法,其特征在于:步驟<1>中海綿折成直角貼瓶壁垂直放在組培瓶底,步驟<3>中種子接種到平行瓶底的海綿上表面。

5.   根據權利要求4所述的利用馬尾松種子獲取無菌苗的方法,其特征在于:所述海綿貼壁高度0.5?1.5cm。

6.   根據權利要求2所述的利用馬尾松種子獲取無菌苗的方法,其特征在于還包括以下步驟:
<5>誘導
將步驟<4>中生長健壯,高3?7cm的無菌苗取出用于葉、莖和芽的增殖誘導或愈傷組織誘導,將其余不發芽的種子清理,海綿洗凈曬干。

說明書

說明書利用馬尾松種子獲取無菌苗的方法
技術領域
本發明屬于馬尾松組織培養技術領域,尤其涉及一種利用馬尾松種子獲取無菌苗的方法。
背景技術
馬尾松(Pinus massoniana)是我國南方重要的脂材兩用樹種,它用途廣泛、經濟價值高,是我國林漿紙(板)、松脂和建筑等行業的主要原料樹種。除木材和松脂兩個大宗用途外,馬尾松全樹均可利用,花粉、針葉和樹皮富含抗氧化物質,可用作優良的抗衰老和抗氧化保健品;松籽含油30%,可制造油漆、肥皂和潤滑油;球果可提煉原油;松根可提取松焦油,還能培養珍貴的中藥材——茯苓。
經過30多年的遺傳改良研究,廣西建成了馬尾松優良種源—優良林分—采種母樹林—初級種子園—改良代種子園等多層次的良種基地,在推動馬尾松良種化進程方面發揮了重要作用。與其他用材樹種相比,馬尾松的無性繁殖難度較大,其中組織培養更加困難。但由于植物的組織培養具有繁殖系數大、苗木生長整齊等優點,攻克松樹組織培養技術一直是世界育種學者的目標。傳統的無菌苗培養多采用瓊脂粉(條)培養基,需要經過瓊脂粉(條)加熱溶解—滅菌—冷卻凝結三個步驟,操作較為繁瑣;另外,無菌苗培養由于存在種子發芽率和污染等多種問題,無菌苗的成苗率一般只能達到5~20%,使80~95%的培養基成為廢棄物難以回收再利用而造成浪費;同時,瓊脂的透氣性較差,苗木生長尤其是根系生長不夠好。因此,尋找一種簡單、經濟和快捷的方法培養無菌苗是進行馬尾松組織培養以及基因工程等研究亟待解決的首要問題。
發明內容
本發明要解決的技術問題是提供一種操作簡易、經濟高效的利用馬尾松種子獲取無菌苗的方法。
為解決上述技術問題,本發明采用如下技術方案:利用馬尾松種子獲取無菌苗的方法,以吸水海綿作為培養基。
上述利用馬尾松種子獲取無菌苗的方法,包括以下步驟:
<1>培養基準備
剪取長╳寬為3?5cm╳1?2cm海綿,將海綿充分吸水,將吸足水的海綿放入組培瓶內,扭緊瓶蓋,于121℃滅菌鍋下滅菌20min;
<2>種子消毒
采用0.1%升汞對種子進行消毒8?10min,無菌水沖洗4?5次;
<3>接種
在無菌條件下將步驟<2>消毒好的種子接種到步驟<1>的海綿培養基中;
<4>培養
將步驟<3>的組培瓶置于23?25℃條件下暗培養10?20天。
步驟<1>中海綿平放在組培瓶底,步驟<3>中種子接種到海綿上表面。
步驟<1>中海綿折成直角貼瓶壁垂直放在組培瓶底(海綿的含水率形成梯度變化,垂直貼壁的含水率低于水平放置),步驟<3>中種子接種到平行瓶底的海綿上表面。
海綿貼壁高度0.5?1.5cm。
上述利用馬尾松種子獲取無菌苗的方法,還包括以下步驟:
<5>誘導
將步驟<4>中生長健壯,高3?7cm的無菌苗取出用于葉、莖和芽的增殖誘導或愈傷組織誘導,將其余不發芽的種子清理,海綿洗凈曬干。
針對目前無菌苗培養采用瓊脂作為培養基存在的問題,發明人采用具有良好吸水和保水性能的海綿作為培養基建立了利用馬尾松種子獲取無菌苗的方法,將消毒后的馬尾松種子放入吸水海綿中培養10?20天即可獲得生長健壯的無菌苗。應用本發明培養馬尾松無菌苗,出苗時間明顯縮短,苗木生長尤其是根系生長優于瓊脂培養;同時簡化了實驗步驟,提高了培養效率;此外,由于海綿可重復利用且不產生廢棄物,節約了育苗繁殖成本又保護了環境。本發明的無菌苗培育方法經濟高效且操作簡便,適用于馬尾松的離體培養和轉基因等生物技術的研究和生產,對馬尾松的良種繁育和生物技術研究有重要意義。
附圖說明
圖1是本發明利用馬尾松種子獲取無菌苗的方法實施例1至3的參考狀態圖(海綿垂直)。
圖2是本發明利用馬尾松種子獲取無菌苗的方法實施例4至5的參考狀態圖(海綿平放)。
圖中:1組培瓶,2海綿,3種子。
具體實施方式
以下結合附圖和實施例進一步說明本發明。
實施例1
<1>培養基準備
剪取長╳寬約為3cm╳2cm海綿,將海綿置于自來水中充分吸水,用鑷子將吸足水的海綿放入組培瓶內,如圖1所示,海綿折成直角貼瓶壁(貼壁高度1cm)垂直放在組培瓶底,扭緊瓶蓋,于121℃滅菌鍋下滅菌20min;
<2>種子消毒
流水沖洗5h,0.5%高錳酸鉀溶液浸泡20min,流水沖凈,于超凈工作臺中采用0.1%升汞對種子進行消毒8min,無菌水沖洗5次;
<3>接種
將步驟<2>消毒好的種子在超凈工作臺上接種到步驟<1>的海綿培養基中平行瓶底的海綿上表面;
<4>培養
將步驟<3>的組培瓶置于24℃條件下暗培養15天;
<5>誘導
將步驟<4>中生長健壯,高約5.5cm的無菌苗取出用于芽的增殖誘導,將其余不發芽或發霉的種子清理,海綿洗凈曬干可重復利用。
實施例2
<1>培養基準備
剪取長╳寬約為4.5cm╳2cm海綿,將海綿置于自來水中充分吸水,用鑷子將吸足水的海綿放入組培瓶內,海綿折成直角貼瓶壁(貼壁高度1.5cm)垂直放在組培瓶底,扭緊瓶蓋,于121℃滅菌鍋下滅菌20min;
<2>種子消毒
流水沖洗6h,0.3%高錳酸鉀溶液浸泡30min,流水沖凈,于超凈工作臺中采用0.1%升汞對種子進行消毒10min,無菌水沖洗4次;
<3>接種
將步驟<2>消毒好的種子在超凈工作臺上接種到步驟<1>的海綿培養基中平行瓶底的海綿上表面;
<4>培養
將步驟<3>的組培瓶置于25℃條件下暗培養18天;
<5>誘導
將步驟<4>中生長健壯,高約7cm的無菌苗取出用于芽的增殖誘導,將其余不發芽或發霉的種子清理,海綿洗凈曬干可重復利用。
實施例3
<1>培養基準備
剪取長╳寬約為2.8cm╳1.5cm海綿,將海綿置于自來水中充分吸水,用鑷子將吸足水的海綿放入組培瓶內,海綿折成直角貼瓶壁(貼壁高度0.8cm)垂直放在組培瓶底,扭緊瓶蓋,于121℃滅菌鍋下滅菌20min;
<2>種子消毒
流水沖洗5h,0.5%高錳酸鉀溶液浸泡15min,流水沖凈,于超凈工作臺中采用0.1%升汞對種子進行消毒9min,無菌水沖洗5次;
<3>接種
將步驟<2>消毒好的種子在超凈工作臺上接種到步驟<1>的海綿培養基中平行瓶底的海綿上表面;
<4>培養
將步驟<3>的組培瓶置于23℃條件下暗培養17天;
<5>誘導
將步驟<4>中生長健壯,高約6.8cm的無菌苗取出用于芽的增殖誘導,將其余不發芽或發霉的種子清理,海綿洗凈曬干可重復利用。
實施例4
<1>培養基準備
剪取長╳寬約為2.3cm╳1.5cm海綿,將海綿置于自來水中充分吸水,用鑷子將吸足水的海綿放入組培瓶內,如圖2所示,海綿平放在組培瓶底,扭緊瓶蓋,于121℃滅菌鍋下滅菌20min;
<2>種子消毒
流水沖洗5.5h,0.4%高錳酸鉀溶液浸泡18min,流水沖凈,于超凈工作臺中采用0.1%升汞對種子進行消毒11min,無菌水沖洗5次;
<3>接種
將步驟<2>消毒好的種子在超凈工作臺上接種到步驟<1>的海綿上表面;
<4>培養
將步驟<3>的組培瓶置于23℃條件下暗培養20天;
<5>誘導
將步驟<4>中生長健壯,高約6.0cm的無菌苗取出用于芽的增殖誘導,將其余不發芽或發霉的種子清理,海綿洗凈曬干可重復利用。
實施例5
<1>培養基準備
剪取長╳寬約為3.0cm╳1.7cm海綿,將海綿置于自來水中充分吸水,用鑷子將吸足水的海綿放入組培瓶內,海綿平放在組培瓶底,扭緊瓶蓋,于121℃滅菌鍋下滅菌20min;<2>種子消毒
流水沖洗4h,0.4%高錳酸鉀溶液浸泡20min,流水沖凈,于超凈工作臺中采用0.1%升汞對種子進行消毒9min,無菌水沖洗4次;
<3>接種
將步驟<2>消毒好的種子在超凈工作臺上接種到步驟<1>的海綿上表面;
<4>培養
將步驟<3>的組培瓶置于25℃條件下暗培養20天;
<5>誘導
將步驟<4>中生長健壯,高約5.8cm的無菌苗取出用于芽的增殖誘導,將其余不發芽或發霉的種子清理,海綿洗凈曬干可重復利用。
對照例
<1>培養基準備
稱取7g/升瓊脂條,將瓊脂條剪碎或用粉碎機打碎,加適量水邊攪拌邊加熱溶解,溶解完成用燒杯定容至1升,充分拌勻,趁熱倒入培養瓶中,每瓶30?40mL,扭緊瓶蓋,于121℃滅菌鍋下滅菌20min,自然冷卻至凝結;
<2>種子消毒
流水沖洗4.5h,0.2%高錳酸鉀溶液浸泡25min,流水沖凈,于超凈工作臺中用0.1%升汞對種子進行消毒9min,無菌水沖洗5次;
<3>接種
將步驟<2>消毒好的種子在超凈工作臺上接種到步驟<1>的瓊脂培養基中;
<4>培養
將步驟<3>的組培瓶放置于25℃條件下暗培養45天;
<5>誘導
將步驟<4>中生長健壯,高約5.6cm的無菌苗取出進行芽增殖誘導,將其余不發芽或發霉種子的培養瓶放入滅菌鍋中加熱使瓊脂溶解,將瓊脂倒入廢液盆中集中丟棄。
表1無菌苗培養效果比較表

結論:從表1可見,應用本方法處理的實施例1至5,萌發率為20~25%,苗高為5.5~7.0cm,培養時間為15~20天,生長健壯;對照例中,萌發率只有15%,苗高為5.6cm,培養時間為45天,生長較弱,實施例與對照的萌發率和苗高大體相近,實施例略高;在培養時間和生長狀況上本發明實施例均優于對照例。
其中實施例1~3和實施例4~5的萌發率、苗芽高和生長狀況3個方面沒有顯著的差異,但在培養時間上實施例1~3優于實施例4~5。所以實施例1~3中的海綿折成直角貼瓶壁的方法具有一定的優勢。
實施例1~5的培養時間平均為18天,明顯優于對照例的45天,培養時間縮短30天左右,具有明顯優勢。實施例1~5的生長狀況優于對照例,原因在于海綿的透氣性好于瓊脂,導致在海綿培養基上生長的無菌苗根系發達,苗木生長健壯。由于植物組織培養需在24h控溫23?25℃,8h人工光照條件下進行,培養時間縮短30天不僅能有效節約生產成本還能加快組培苗的生產周期,同時,實施例中的海綿可以重復利用且不產生廢棄物,從而保護了環境。

關 鍵 詞:
利用 馬尾松 種子 獲取 菌苗 方法
  專利查詢網所有資源均是用戶自行上傳分享,僅供網友學習交流,未經上傳用戶書面授權,請勿作他用。
關于本文
本文標題:利用馬尾松種子獲取無菌苗的方法.pdf
鏈接地址:http://www.rgyfuv.icu/p-6419243.html
關于我們 - 網站聲明 - 網站地圖 - 資源地圖 - 友情鏈接 - 網站客服客服 - 聯系我們

[email protected] 2017-2018 zhuanlichaxun.net網站版權所有
經營許可證編號:粵ICP備17046363號-1 
 


收起
展開
山东11选5中奖结果走势图