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用于改善的陰道健康的益生菌乳桿菌屬菌株.pdf

摘要
申請專利號:

CN200580034031.8

申請日:

2005.10.05

公開號:

CN101048168B

公開日:

2015.01.07

當前法律狀態:

授權

有效性:

有權

法律詳情: 授權|||實質審查的生效|||公開
IPC分類號: A61K35/74; A23C9/123; A23L1/30; A23L1/03; C12N1/20; A61L15/36; A61P15/00; A61P15/02 主分類號: A61K35/74
申請人: 普羅比公司
發明人: G·莫林; S·阿爾尼; B·杰普森; A·瓦斯奎茨; A·伯格倫
地址: 瑞典隆德
優先權: 2004.10.05 SE 0402406-3
專利代理機構: 中國專利代理(香港)有限公司 72001 代理人: 權陸軍;梁謀
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法律狀態
申請(專利)號:

CN200580034031.8

授權公告號:

101048168B||||||

法律狀態公告日:

2015.01.07|||2007.11.28|||2007.10.03

法律狀態類型:

授權|||實質審查的生效|||公開

摘要

本發明涉及屬于乳桿菌屬的益生菌細菌菌株,或者其變種,所述菌株能夠在人陰道中建群。更具體地,益生菌細菌菌株屬于選自植物乳桿菌、卷曲乳桿菌和加氏乳桿菌的物種。還涉及其作為藥物,包含所述菌株的組合物,該組合物例如是食品或者藥物組合物,衛生產品,所述菌株的生物純的培養物和新的食物的用途。

權利要求書

權利要求書
1.  屬于乳桿菌屬的益生菌細菌菌株或者其變種,其能夠在人陰道建群,附帶條件是該細菌菌株不是保藏號DSM 15312的植物乳桿菌HEAL 9、保藏號DSM 15313的植物乳桿菌HEAL 19、保藏號DSM15316的植物乳桿菌HEAL 99、保藏號DSM 6595的植物乳桿菌299或者保藏號DSM 9843的植物乳桿菌299v。

2.  根據權利要求1的益生菌細菌菌株,其屬于選自植物乳桿菌、卷曲乳桿菌和加氏乳桿菌的物種或者其變種。

3.  根據權利要求1或2的益生菌細菌菌株,其具有甘露糖特異性粘附素或者其他粘附機制,其允許細菌結合到陰道、胃腸道、包括尿道的膀胱的內表面。

4.  根據權利要求1-3任一項的益生菌細菌菌株,其選自保藏號DSM 16735的卷曲乳桿菌VPC5、保藏號DSM 16736的卷曲乳桿菌VPC40、保藏號DSM 16738的卷曲乳桿菌VPC70、保藏號DSM 16739的卷曲乳桿菌VPC71、保藏號DSM 16740的卷曲乳桿菌VPC77、保藏號DSM 16741的卷曲乳桿菌VPC111、保藏號DSM 16742的卷曲乳桿菌VPC130和保藏號DSM 16743的卷曲乳桿菌VPC177,或者其變種。

5.  根據權利要求1-3任一項的益生菌細菌菌株,其是保藏號DSM16737的加氏乳桿菌VPG44,或者其變種。

6.  根據權利要求1-5任一項的益生菌細菌菌株,其是活的。

7.  根據權利要求1-5任一項的益生菌細菌菌株,其是滅活或者受抑制的。

8.  根據權利要求1-5任一項的益生菌細菌菌株,其是基因修飾的。

9.  根據權利要求1-5任一項的益生菌細菌菌株,其是被殺死的。

10.  根據權利要求1-9任一項的益生菌細菌菌株,其用作藥物。

11.  根據權利要求1-9任一項的細菌菌株的用途,其用于生產治療和/或預防細菌性陰道病、病毒性陰道病、酵母性陰道炎、陰道中的感染、諸如HIV和衣原體感染的性傳播疾病、危及孕婦中胎兒的感染、早產和泌尿道感染的藥物。

12.  選自保藏號DSM 15312的植物乳桿菌HEAL 9、保藏號DSM15313的植物乳桿菌HEAL 19、保藏號DSM 15316的植物乳桿菌HEAL99、保藏號DSM 6595的植物乳桿菌299、保藏號DSM 9843的植物乳桿菌299v的細菌菌株或者其變種的用途,其用于生產治療和/或預防細菌性陰道病、病毒性陰道病、酵母性陰道炎、陰道中的感染、諸如HIV和衣原體感染的性傳播疾病、危及孕婦中胎兒的感染、早產和泌尿道感染的藥物,附帶條件是保藏號DSM 9843的植物乳桿菌299v用于泌尿道感染。

13.  組合物,其包含根據權利要求1-9任一項的至少一種益生菌細菌菌株和/或保藏號DSM 15312的植物乳桿菌HEAL 9、保藏號DSM15313的植物乳桿菌HEAL 19、保藏號DSM 15316的植物乳桿菌HEAL99、保藏號DSM 6595的植物乳桿菌299、保藏號DSM 9843的植物乳桿菌299v的細菌菌株,或者其變種,和/或根據權利要求32的其片段或者級分。

14.  根據權利要求13的組合物,其包含載體材料。

15.  根據權利要求13或14的組合物,其是食品。

16.  根據權利要求13或14的組合物,其是食物補充劑。

17.  根據權利要求14-16任一項的組合物,其中所述載體材料選自燕麥片粥、乳酸發酵食物、抗性淀粉、飲食纖維、安茴酰牛扁堿、糖類、蛋白質和糖基化蛋白質。

18.  根據權利要求15或17的組合物,其中所述食品選自面包、干酪、酸乳酪、汁、健康條、涂抹料、餅干和谷類。

19.  根據權利要求13-18任一項的組合物,其中所述至少一種益生菌細菌菌株經被囊化或者包衣。

20.  根據權利要求13-18任一項的組合物,其中所述至少一種益生菌細菌菌株以一定量存在,當被消費時,所述量提供107到1012CFU,優選109到1010CFU的有效日劑量。

21.  根據權利要求13或14的組合物,其是用于治療和/或預防細菌性陰道病、病毒性陰道病、酵母性陰道炎、陰道中的感染、諸如HIV和衣原體感染的性傳播疾病、危及孕婦中胎兒的感染、早產和泌尿道感染的藥物組合物,附帶條件是保藏號DSM 9843的植物乳桿菌299v用于泌尿道感染。

22.  根據權利要求21的組合物,其中所述組合物經口、陰道或者直腸施用,或者滴注到膀胱中。

23.  根據權利要求21的組合物,其中所述組合物以經口和陰道,經口和直腸,或者經口、陰道和直腸的組合治療施用。

24.  根據權利要求21-23任一項的組合物,其中所述載體材料是至少一種藥學上可接受的載體。

25.  根據權利要求21-24任一項的組合物,其以片劑、吮吸片劑、甜味食品、口香糖、膠囊、有腸溶衣的片劑和膠囊、栓劑、微型灌腸劑、陰道用片劑、陰道用明膠膠囊、陰道用錠劑、乳膏、凝膠、軟膏、洗劑、棉塞、尿布、墊子、熔化條、避孕套、陰道栓劑、噴霧劑和臨床營養品的形式施用。

26.  根據權利要求21-25任一項的組合物,其經口施用,其中所述至少一種益生菌細菌菌株以提供107到1012CFU,優選109到1010CFU的有效日劑量的量存在。

27.  根據權利要求21-25任一項的組合物,其經陰道或者直腸施用,其中所述至少一種益生菌細菌菌株以提供103到1012CFU,優選105到109CFU的有效日劑量的量存在。

28.  根據權利要求21-27任一項的組合物,其中所述至少一種益生菌細菌菌株經被囊化或者包衣。

29.  根據權利要求13-27的組合物,其包含選自維生素、礦物質和益生素的添加劑。

30.  衛生產品,其包含根據權利要求13-14或者21-29任一項的組合物。

31.  根據權利要求30的衛生產品,其選自棉塞、衛生巾、月經墊、尿布、肥皂、洗發劑、凝膠、軟膏、乳膏、噴霧劑和洗劑。

32.  根據權利要求1-9任一項的至少一種益生菌細菌菌株和/或保藏號DSM 15312的植物乳桿菌HEAL 9、保藏號DSM 15313的植物乳桿菌HEAL 19、保藏號DSM 15316的植物乳桿菌HEAL 99、保藏號DSM 6595的植物乳桿菌299、保藏號DSM 9843的植物乳桿菌299v的細菌菌株,或者其變種,和/或根據權利要求35的其片段或者級分的生物培養物。

33.  新食物,其包含根據權利要求1-9任一項的至少一種益生菌細菌菌株和/或保藏號DSM 15312的植物乳桿菌HEAL 9、保藏號DSM15313的植物乳桿菌HEAL 19、保藏號DSM 15316的植物乳桿菌HEAL99、保藏號DSM 6595的植物乳桿菌299、保藏號DSM 9843的植物乳桿菌299v的細菌菌株,或者其變種,和/或根據權利要求35的其片段或者級分。

34.  食物補充劑,其包含根據權利要求1-9任一項的至少一種益生菌細菌菌株和/或保藏號DSM 15312的植物乳桿菌HEAL 9、保藏號DSM 15313的植物乳桿菌HEAL 19、保藏號DSM 15316的植物乳桿菌HEAL 99、保藏號DSM 6595的植物乳桿菌299、保藏號DSM 9843的植物乳桿菌299v的細菌菌株,或者其變種,和/或根據權利要求35的其片段或者級分。

35.  根據權利要求1-9任一項的益生菌細菌菌株的片段或者級分。

說明書

說明書用于改善的陰道健康的益生菌乳桿菌屬菌株
發明領域
本發明涉及屬于乳桿菌屬(Lactobacillus)的益生菌細菌菌株,或者其變種,其能夠在人陰道中建群。更具體地,益生菌細菌菌株屬于選自植物乳桿菌(Lactobacillus plantarum)、卷曲乳桿菌(Lactobacilluscrispatus)和加氏乳桿菌(Lactobacillus gasseri)的物種。本發明還涉及其作為藥物,包含所述菌株的組合物,該組合物例如是食品或者藥物組合物,衛生產品,所述菌株的生物純的培養物和新的食物的用途。
發明背景
通過陰道上皮與微生物菌群的相互作用維持健康的陰道,其中乳桿菌起了關鍵作用。乳桿菌屬物種通過葡萄糖代謝在陰道保持pH酸性;此外,與過氧化氫和細菌素樣產生一起,它們抑制病原體和其他不希望的微生物的生長。這有助于對導致泌尿道感染(UTI)的尿路病原體、細菌性陰道病和白色假絲酵母(Candida albicans)引起的酵母性陰道炎的成功保護(Reid G,Bruce AW.Urogenital infections in women:can probiotics help?Postgrad Med J 2003;79:428-432.)。
長期以來公認在陰道占優勢的乳桿菌屬物種是嗜酸乳桿菌(Lactobacillus acidophilus),但是基因型鑒定方法的使用已經證明健康陰道中最常見的乳桿菌物種實際上是卷曲乳桿菌、加氏乳桿菌、Lactobacillus iners和詹氏乳桿菌(Lactobacillus jensenii)。然而,單獨的研究證明從陰道回收的乳桿菌之間的差異表明諸如鼠李糖乳桿菌(Lactobacillus rhamnosus)、戊糖乳桿菌(Lactobacillus pentosus)、發酵乳桿菌(Lactobacillus fermentum)、植物乳桿菌和嗜酸乳桿菌的物種是占優勢的乳桿菌,這可能是由于樣品處理、陰道狀態或者分離的優選方法中的差異(Vásquez A,Jakobsson T,AhrnéS,Forsum U,Molin G.Vaginal Lactobacillus flora of healthy Swedish women.J.Clin.Mirobiol.2002;40:2746-9)。
世界衛生組織(World Health Organization)將益生菌定義為“當以足夠量施用時對宿主賦予健康益處的活的微生物”。抗生素抗性的發展和陰道感染治療中的失敗已經引起了對益生菌作為備選工具的漸增的興趣。就陰道感染復發的高發病率而言,對于陰道益生菌的需求是顯然的(Reid G,Bruce AW,Fraser N,Heinemann C,Owen J,Henning B.Oral probiotics can resolve urogenital infections.FEMSImmunol Med Microbiol 2001;30:49-52;Famularo G,Pieluigi M,Coccia R,Mastroiacovo P,De Simone C.Microecology,bacterial va-ginosis and probiotics:perspectives for bacteriotherapy.MedHypotheses 2001;56:421-30.)。特征是乳桿菌減少的陰道菌群的改變似乎是導致細菌性陰道炎綜合征的主要因素。規則地施用能夠在陰道建群的乳桿菌屬菌株可以是該問題的備選解決方案。
作為家庭治療法的酸乳酪治療多年來已用于預防或者減輕陰道病癥。然而,在酸乳酪中發現的乳桿菌德氏乳桿菌保加利亞變種(Lactobacillus delbreukii var.bulgaricus)不是通過益生菌進行陰道恢復的最佳候選物,因為它通常不在該環境中發現并且不良好地附著到陰道上皮細胞來進行成功的建群(Famularo G,Pieluigi M,Coccia R,Mastroiacovo P,De Simone C.Microecology,bacterial vaginosis andprobiotics:perspectives for bacteriotherapy.Med Hypotheses 2001;56:421-430)。這種陰道益生菌的最佳候選物是通常在陰道中發現并且具有抑制病原體的性質的物種。
正常的陰道菌群從直腸粘膜上升(Reid G,Bruce AW.Urogenitalinfections in women:can probiotics help?Postgrad Med J 2003;79:428-432),這意味著在穿過胃腸幸存下來的經口施用的微生物將在一定的時間以后出現在陰道中。該事實產生了這樣的可能性,即陰道益生菌可以經口施用于宿主,這簡化了意在預防陰道問題的長期施用。
在6個月期間對婦女施用嗜酸乳桿菌引起假絲酵母建群和感染都下降(Hilton E,Isenberg HD,Alperstein P,France K,Borenstein MT.Ingestion of yogurt containing Lactobacillus acidophilus as prophylaxisfor candidal vaginitis.Ann Internal Med 1992;116:353-357)。
發明概述
現在已經令人驚奇地發現屬于乳桿菌屬,更具體地,屬于選自植物乳桿菌、卷曲乳桿菌和加氏乳桿菌的物種的特定益生菌細菌菌株能夠當例如經口、直腸或者陰道施用時在人陰道建群并且保持或者改善陰道健康。
本發明的一方面涉及屬于乳桿菌屬的益生菌細菌菌株或者其變種,其能夠在人陰道建群,附帶條件是該細菌菌株不是保藏號DSM15312的植物乳桿菌HEAL 9、保藏號DSM 15313的植物乳桿菌HEAL19、保藏號DSM 15316的植物乳桿菌HEAL 99、保藏號DSM 6595的植物乳桿菌299或者保藏號DSM 9843的植物乳桿菌299v。
在一個實施方案中,所述細菌菌株屬于選自植物乳桿菌、卷曲乳桿菌和加氏乳桿菌的物種或者其變種,且在另一實施方案中,所述菌株具有甘露糖特異性粘附素或者其他粘附機制,其允許細菌結合到陰道、胃腸道、包括尿道的膀胱的內表面。
在本發明的一個實施方案中,益生菌細菌菌株是保藏號DSM16735的卷曲乳桿菌VPC5,或者其變種。
在本發明的另一實施方案中,益生菌細菌菌株是保藏號DSM16736的卷曲乳桿菌VPC40,或者其變種。
在本發明的另一實施方案中,益生菌細菌菌株是保藏號DSM16738的卷曲乳桿菌VPC70,或者其變種。
在另一實施方案中,益生菌細菌菌株是保藏號DSM 16739的卷曲乳桿菌VPC71,或者其變種。
在另一實施方案中,益生菌細菌菌株是保藏號DSM 16740的卷曲乳桿菌VPC77,或者其變種。
在另一實施方案中,益生菌細菌菌株是保藏號DSM 16741的卷曲乳桿菌VPC111,或者其變種。
在另一實施方案中,益生菌細菌菌株是保藏號DSM 16742的卷曲乳桿菌VPC130,或者其變種。    
在另一實施方案中,益生菌細菌菌株是保藏號DSM 16743的卷曲乳桿菌VPC177,或者其變種。
在另一實施方案中,益生菌細菌菌株是保藏號DSM 16737的加氏乳桿菌VPG44,或者其變種。
在另一實施方案中,上述細菌菌株用作藥物。
本發明的第二方面涉及上述細菌菌株用于生產治療和/或預防細菌性陰道病、病毒性陰道病、酵母性陰道炎、陰道中的感染、諸如HIV和衣原體感染的性傳播疾病、危及孕婦中胎兒的感染、早產和泌尿道感染的藥物的用途。    
本發明的第三方面涉及選自保藏號DSM 15312的植物乳桿菌HEAL 9、保藏號DSM 15313的植物乳桿菌HEAL 19、保藏號DSM15316的植物乳桿菌HEAL 99、保藏號DSM 6595的植物乳桿菌299或者保藏號DSM 9843的植物乳桿菌299v的細菌菌株或者其變種的用途,其用于生產治療和/或預防細菌性陰道病、病毒性陰道病、酵母性陰道炎、陰道中的感染、諸如HIV和衣原體感染的性傳播疾病、危及孕婦中胎兒的感染、早產和泌尿道感染的藥物,附帶條件是保藏號DSM9843的植物乳桿菌299v用于泌尿道感染。
本發明的第四方面涉及組合物,其包含如上述的至少一種益生菌細菌菌株,和/或保藏號DSM 15312的植物乳桿菌HEAL 9、保藏號DSM15313的植物乳桿菌HEAL 19、保藏號DSM 15316的植物乳桿菌HEAL99、保藏號DSM 6595的植物乳桿菌299或者保藏號DSM 9843的植物乳桿菌299v,或者其變種,和/或其片段或者級分。在一個實施方案中,組合物包含載體材料。
本發明的另一實施方案是食品,優選包含選自燕麥片粥、乳酸發酵食物、抗性淀粉、飲食纖維、糖類、蛋白質和糖基化蛋白質的載體材料。在再一個實施方案中,所述食品選自面包、干酪、酸乳酪、汁、健康條(health bar)、涂抹料(spreads)、餅干和谷類,且在另一實施方案中,所述至少一種益生菌細菌菌株經被囊化或者包衣,并且優選以一定量存在,當被消費時,所述量提供107到1012CFU,優選109到1010CFU的有效日劑量。
在另一實施方案中,組合物是食物補充劑,優選包含選自燕麥片粥、乳酸發酵食物、抗性淀粉、飲食纖維、安茴酰牛扁堿(inulines)、糖類、蛋白質和糖基化蛋白質的載體材料。
在再一個實施方案中,組合物是用于治療和/或預防細菌性陰道病、病毒性陰道病、酵母性陰道炎、陰道中的感染、諸如HIV和衣原體感染的性傳播疾病、危及孕婦中胎兒的感染、早產和泌尿道感染的藥物組合物,附帶條件是保藏號DSM 9843的植物乳桿菌299v用于泌尿道感染。
在一個實施方案中,所述藥物組合物經口、陰道或者直腸施用,或者滴注到膀胱中,并且優選所述載體材料是至少一種藥學上可接受的載體。
在另一實施方案中,所述藥物組合物以經口和陰道,經口和直腸,或者經口、陰道和直腸的組合施用治療施用。
在另一實施方案中,所述藥物組合物以片劑、吮吸片劑、甜味食品、口香糖、膠囊、有腸溶衣的片劑和膠囊、栓劑、微型灌腸劑、陰道用片劑、陰道用明膠膠囊、陰道用錠劑、乳膏、凝膠、軟膏、洗劑、棉塞、尿布、墊子、熔化條(melting strip)、避孕套、陰道栓劑、噴霧劑和臨床營養品的形式施用。在組合物的再一個實施方案中,當經口施用時,所述至少一種益生菌細菌菌株以提供107到1012CFU,優選109到1010CFU的有效日劑量的量存在,并且當經陰道或者直腸施用時,所述至少一種益生菌細菌菌株以提供103到1012CFU,優選105到109CFU的有效日劑量的量存在。
在藥物組合物的一個實施方案中,所述至少一種益生菌細菌菌株經被囊化或者包衣,且在另一實施方案中,所述組合物包含選自維生素、礦物質和益生素的添加劑。
本發明的第五個方面涉及包含如上述的組合物的衛生產品。在一個實施方案中,所述衛生產品選自棉塞、衛生巾、月經墊、尿布、肥皂、洗發劑、凝膠、軟膏、乳膏、噴霧劑和洗劑。
本發明的第六個方面涉及如上述的至少一種益生菌細菌菌株,和/或保藏號DSM 15312的植物乳桿菌HEAL 9、保藏號DSM 15313的植物乳桿菌HEAL 19、保藏號DSM 15316的植物乳桿菌HEAL 99、保藏號DSM 6595的植物乳桿菌299、保藏號DSM 9843的植物乳桿菌299v,或者其變種,和/或其片段或者級分的生物培養物。
本發明的第七個方面涉及包含如上述的至少一種益生菌細菌菌株,和/或保藏號DSM 15312的植物乳桿菌HEAL 9、保藏號DSM 15313的植物乳桿菌HEAL 19、保藏號DSM 15316的植物乳桿菌HEAL 99、保藏號DSM 6595的植物乳桿菌299、保藏號DSM 9843的植物乳桿菌299v,或者其變種,和/或其片段或者級分的新的食物。
本發明的第八個方面涉及包含如上述的至少一種益生菌細菌菌株,和/或保藏號DSM 15312的植物乳桿菌HEAL 9、保藏號DSM 15313的植物乳桿菌HEAL 19、保藏號DSM 15316的植物乳桿菌HEAL 99、保藏號DSM 6595的植物乳桿菌299、保藏號DSM 9843的植物乳桿菌299v,或者其變種,和/或其片段或者級分的食物補充劑。
在一個實施方案中,所述益生菌細菌菌株是活的。在另一實施方案中,它是滅活或者受抑制的。在再一個實施方案中,它是基因修飾的,且在另一實施方案中,它是被殺死的。
本發明的第八個方面涉及如上述的益生菌細菌菌株的片段或者級分。

附圖簡述
圖1顯示了基于一些最優選的益生菌細菌菌株的RAPD分析的系統樹。
圖2A-I顯示了作為圖1的系統樹的基礎的一些最優選的益生菌細菌菌株的RAPD模式。    
圖3A顯示了攝入實施例3的四種不同的實驗產品后的log cfu/g糞便。
圖3B顯示了攝入實施例3的四種不同的實驗產品后,陰道流體中的log cfu/拭子。
圖4顯示了通過用限制酶Hind III(泳道2)、Cla I(泳道3)、Eco RI(泳道4)切割菌株卷曲乳桿菌VPC 177的染色體DNA得到的分離的DNA片段。分子量DNA標記用作標準(泳道1和5)。
圖5顯示了通過用限制酶Hind III(泳道2)、Cla I(泳道3)、Eco RI(泳道4)切割菌株卷曲乳桿菌VPC 5的染色體DNA得到的分離的DNA片段。分子量DNA標記用作標準(泳道1和5)。
圖6顯示了通過用限制酶Hind III(泳道2)、Cla I(泳道3)、Eco RI(泳道4)切割菌株卷曲乳桿菌VPC 40的染色體DNA得到的分離的DNA片段。分子量DNA標記用作標準(泳道1和5)。
圖7顯示了通過用限制酶Hind III(泳道2)、Cla I(泳道3)、Eco RI(泳道4)切割菌株卷曲乳桿菌VPC 71的染色體DNA得到的分離的DNA片段。分子量DNA標記用作標準(泳道1和5)。
圖8顯示了通過用限制酶Hind III(泳道2)、Cla I(泳道3)、Eco RI(泳道4)切割菌株卷曲乳桿菌VPC 111的染色體DNA得到的分離的DNA片段。分子量DNA標記用作標準(泳道1和5)。
圖9顯示了通過用限制酶Hind III(泳道2)、Cla I(泳道3)、Eco RI(泳道4)切割菌株卷曲乳桿菌VPC 130的染色體DNA得到的分離的DNA片段。分子量DNA標記用作標準(泳道1和5)。
圖10顯示了通過用限制酶Hind III(泳道2)、Cla I(泳道3)、Eco RI(泳道4)切割菌株加氏乳桿菌VPG 44的染色體DNA得到的分離的DNA片段。分子量DNA標記用作標準(泳道1和5)。
發明描述
本發明特別涉及包含植物乳桿菌或密切相關的乳桿菌屬物種的一種或多種菌株的組合物,所述菌株通過經口施用和腸確立能夠在陰道建群。所述組合物將例如保持陰道健康,減輕陰道病、酵母性陰道炎、泌尿道感染、性傳播疾病和可能危及孕婦中胎兒的感染。
健康的尿生殖微生物菌群包含>50種微生物物種。健康的尿生殖細胞被細菌生物膜覆蓋,其中主要是乳桿菌。通過陰道上皮和微生物菌群的相互作用維持健康的陰道。糞便菌群中的病原體是泌尿道感染和細菌性陰道病的來源。致病的一個因素是病原體能夠附著到上皮細胞。粘附素和受體位點參與該附著過程。例如,病原體大腸桿菌(E.coli)在上皮表面上具有甘露糖特異性附著。以前已經表明一些乳桿菌也具有甘露糖特異性粘附。通過利用該機制,一些益生菌乳桿菌也阻止病原體粘附到粘膜表面,如陰道和尿道粘膜并且從而防止感染。其他因素是通過葡萄糖代謝維持陰道中的低pH、產生過氧化氫和細菌素樣產生來抑制病原體和其他不想要的微生物的生長。
本發明特別涉及菌株保藏號DSM 16735的卷曲乳桿菌VPC5、保藏號DSM 16736的卷曲乳桿菌VPC40、保藏號DSM 16738的卷曲乳桿菌VPC70、保藏號DSM 16739的卷曲乳桿菌VPC71、保藏號DSM16740的卷曲乳桿菌VPC77、保藏號DSM 16741的卷曲乳桿菌VPC111、保藏號DSM 16742的卷曲乳桿菌VPC130、保藏號DSM 16743的卷曲乳桿菌VPC177和保藏號DSM 16737的加氏乳桿菌VPG44,它們在2004年9月17日保藏在德意志微生物保藏中心(DeutscheSammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH),并且被給予上面引用的編號,或者其變種。所述菌株具有在陰道建群的能力。
本發明還涉及細菌菌株保藏號DSM 15312的植物乳桿菌HEAL9、保藏號DSM 15313的植物乳桿菌HEAL 19、保藏號DSM 15316的植物乳桿菌HEAL 99,它們在2002年11月27日保藏在德意志微生物保藏中心,并且被給予上面引用的編號,或者其變種。
本發明還涉及1991年7月2日保藏的保藏號為DSM 6595的植物乳桿菌299和1995年3月16日保藏的保藏號為DSM 9843的植物乳桿菌299v或者其變種的用途,它們在德意志微生物保藏中心保藏并給予上面引用的編號。
關于本發明的細菌菌株,特別是那些已經保藏的細菌菌株使用的短語“其變種”定義為細菌,其
-通過使用Pearson積矩相關系數和利用算術平均值的未加權的配對算法(UPGMA;BioNumerics 2.5,Applied Maths,Kortrijk,比利時),屬于與所述益生菌細菌菌株具有至少80%的RAPD相似性的聚簇;和/或
-通過使用Pearson積矩相關系數和利用算術平均值的未加權的配對算法(UPGMA;BioNumerics 2.5,Applied Maths,Kortrijk,比利時),屬于與所述益生菌細菌菌株優選具有至少75%的限制性內切核酸酶分析相似性的聚簇;和/或
-能夠在人陰道建群;和/或
-具有甘露糖特異性粘附素或者其他粘附機制,其允許細菌結合到陰道、胃腸道、包括尿道的膀胱的內表面。
關于本發明在此處使用的短語“益生菌細菌菌株”指活的微生物,其當以足夠量施用時,對宿主賦予健康益處。此外,當經口服用細菌菌株時,細菌菌株必須穿過胃腸道存活并且,當細菌菌株被經陰道或者直腸服用時,細菌菌株必須分別在陰道和直腸建群。
關于本發明的細菌菌株在此處使用的短語“在人陰道建群”指與最初的總乳桿菌計數,即服用任何細菌菌株之前相比,在經口、直腸或者陰道服用所述細菌菌株后,陰道流體和/或糞便中存活的乳桿菌的計數(log cfu/拭子)至少增加。
                本發明實施方案詳述
通過REA進行基因型鑒定
菌株(保藏號DSM 16735的卷曲乳桿菌VPC5、保藏號DSM 16736的卷曲乳桿菌VPC40、保藏號DSM 16739的卷曲乳桿菌VPC71、保藏號DSM 16741的卷曲乳桿菌VPC111、保藏號DSM 16742的卷曲乳桿菌VPC130、保藏號DSM 16743的卷曲乳桿菌VPC177和保藏號DSM16737的加氏乳桿菌VPG44)通過根據Sthl M,Molin G,Persson A,AhrnéS & Sthl S,International Journal of Systematic Bacteriology,40:189-193,1990并由Johansson,M-L等人,International Journalof Systematic Bacteriology 45:670-675,1995進一步開發的限制性內切核酸酶分析(REA)方法檢查染色體DNA的切割模式。可以如下示意性描述REA:制備參與研究的菌株的染色體DNA并通過限制性內切核酸酶切割。用10單位Hind III、Cla I和EcoRI在37℃將0.75μg每種DNA單獨消化4小時;每種內切核酸酶分開使用。用浸沒的水平瓊脂糖板凝膠通過凝膠電泳根據大小分離切割的DNA片段。凝膠由150ml0.9%瓊脂糖(超純DNA級;低電滲;BioRad Laboratories,Richmond,美國)組成并澆鑄為板凝膠(150×235mm)。0.2μg高分子量DNA標記(High Molecular Weight DNA marker)(Bethesda ResearchLaboratories,MD,美國)與0.5μg DNA分子量標記VI(Roche,德國)一起用作標準。通過在Ficoll加樣緩沖液(2g Ficoll,8ml水,0.25%溴酚)中應用樣品DNA實現最小的帶變形和最大的銳度。    
凝膠在40V的恒定電壓、在約6-8℃下電泳18小時。在電泳期間緩沖液(89mM Tris,23mM H3P04,2mM EDTA鈉,pH 8.3)再循環。之后,將凝膠用溴化乙錠(2μg/m1)染色20分鐘并用蒸餾水脫色,在302nm下用紫外透射儀(UVP Inc.,San Gabriel,美國)顯色并拍照。這種進行凝膠電泳的方法得到良好分布并且相對良好分離的帶,所述帶低至1.2×106分子量。
分析結果在圖4-10中給出。
實施例1
志愿者和菌株
沒有陰道感染或者任何腸疾病的不同年齡的10名健康婦女參與該研究。該研究受試者通過問卷提供了關于她們的年齡、月經周期和健康行為的信息。采集第一次樣品前一周,志愿者經歷清除(washout)期,期間她們避免所有類型的含有益生菌的配方。
用于研究的細菌菌株在表1中給出。它們依據質量從一組23種乳桿菌中選擇,所述質量為諸如在實驗室培養后的活菌計數、燕麥片粥發酵和抵抗冷凍和解凍的能力。
12種最有抗性的菌株被選擇用來施用于志愿者;在表1中給出了細菌濃度和培養物的溫育時間。施用在10天期間進行。從LCM(攜帶乳桿菌的培養基)中的新鮮培養物制備細菌菌株(Efthymiou C,HansenCA.An antigenic analysis of Lactobacillus acidophilus.J Infect Dis 1962;110:258-267)。通過離心收獲總體積100ml中等價于約109個細菌濃度的每種培養物的細胞并用Millipore-H2O洗滌一次。然后將沉淀溶解在20ml燕麥乳(Beneviva,芬蘭)和80ml越桔湯(Ekstrms,瑞典)中,其是施用于受試者的飲料。
表1.為了施用所選的細菌乳桿菌(L.)菌株細菌物種  菌株數目 來源(人)  施用濃度   (×109) 溫育時間    (d)卷曲乳桿菌卷曲乳桿菌卷曲乳桿菌卷曲乳桿菌卷曲乳桿菌卷曲乳桿菌卷曲乳桿菌卷曲乳桿菌加氏乳桿菌植物乳桿菌植物乳桿菌植物乳桿菌  VPC77  VPC111  VPC130  VPC5  VPC40  VPC70  VPC71  VPC177  VPG44  HEAL19  HEAL9  HEAL99  陰道  陰道  陰道  陰道  陰道  陰道  陰道  陰道  陰道  腸粘膜  腸粘膜  腸粘膜    1.1    1.0    2.7    1.2    1.3    1.6    1.1    1.6    1.1    1.3    2.2    1.2    2    2    2    2    2    2    2    2    1    1    1    1
樣品收集
志愿者遞送糞便和陰道流體樣品,其在遞送到實驗室后在瓊脂板上培養3小時。在處理開始時(T0)、施用后10天(T1)和施用結束后7天(T2)采樣。
通過蓋子插入陰道拭子(Copan amies瓊脂凝膠拭子;Copaninnovation,意大利)服用陰道樣品以防止細菌污染。將陰道拭子在9ml無菌磷酸緩沖鹽水(PBS)pH 7.2中攪拌并連續稀釋。將1g糞便在9mlPBS中攪拌并連續稀釋。將陰道樣品的每種稀釋液和糞便樣品的最后三次稀釋液的等分試樣鋪平板在Rogosa瓊脂(Oxoid AB,Sollentuna,瑞典)上并在BBL Gas Pack系統中在37℃下厭氧溫育3天。
溫育后隨機挑取來自糞便和陰道樣品的6個菌落。此外,搜索具有典型的形態學外觀的菌落并當發現時額外挑取。
菌株分型
用隨機擴增多態DNA(RAPD)以及施用的菌株一起將總共338個分離物分組。它們在Rogosa瓊脂(Oxoid)上再次培養以驗證它們沒有被污染。
用于PCR擴增的引物是具有序列3′-ACG CGC CCT-5′的9聚體(Scandinavian Gene Synthesis AB,Kping,瑞典)。如Quednau M,AhrnéS,Pettersson AC,Molin G.Identification of clinically importantspecies of Enterococcus with in 1 day with Random AmplifiedPolymorphic DNA(RAPD)Curr.Microbiol.1998;36:332-6以前所述進行下面的PCR擴增和瓊脂糖凝膠電泳。在含有具有1.5mM MgCl2的PCR緩沖液(Roche Diagnostics GmbH,Mannheim,德國)、0.2mM每種核苷酸(Roche)和2.5單位Taq DNA聚合酶(Roche)的50μl總反應體積中使用1μl PCR模板。根據下面的溫度特征進行PCR擴增:94℃45秒,30℃120秒,72℃60秒,四個循環,接著是94℃5秒,36℃30秒(每個循環延長1秒),72℃30秒,共26個循環。PCR期間(session)以72℃10分鐘結束,接著冷卻到4℃。產物通過瓊脂糖凝膠電泳顯現并通過Hewlett Packard ScanJet 5300C將RAPD-凝膠的照相底片(photonegative)以300dpi的分辨率掃描到計算機中。然后通過GelCompar 4.2(Applied Maths,Kortrijk,比利時),以Pearson積矩相關系數(r)和利用算術平均值的未加權配對組方法(UPGMA)分析凝膠圖像并將其分組。
菌株鑒定
REA-限制性內切核酸酶分析
從RAPD分組選擇36個分離物以及所施用的菌株并通過REA(限制性內切核酸酶分析)進一步進行鑒定,以便確保在受試者的糞便和陰道樣品中存在外源菌株。
如以前描述的程序(Ulrich RL,Hughes TA.A rapid procedure forisolating chromosomal DNA from Lactobacillus species and other gram-positive bacteria.Lett Appl Microbiol 2001;32:52-56)進行染色體DNA的制備。根據Johansson等人(Johansson ML,Quednau M,AhrnéS,Molin,G.Classification of Lactobacillus plantarum by restrictionendonuclease analysis of total chromosomal DNA using conventionalagarose gel electrophoresis.Int J Syst Bacteriol 1995;45:670-5)的較早方案進行凝膠電泳。
用10單位的HindIII和EcoRI(Roche)在37℃下單獨消化DNA(0.75μg)4小時。使用大小為150×235mm的浸沒的水平0.9%瓊脂糖(高強度分析級瓊脂糖(High Strength Analytical Grade Agarose):低電滲,Bio-Rad Laboratories,CA,美國)板凝膠。0.2μg量的高分子量DNA標記(Gibco,Invitrogene Corporation,瑞典)以及0.5μg DNA分子量標記VI(Roche)用作標準。凝膠在40V恒定電壓在5℃下電泳18小時。之后,在302nm下用紫外透射儀(UVP Inc.,San Gabriel,CA,美國)顯現帶并拍照。
結果
在10天處理(T1)后和結束施用后1周(T2),從10名受試者中的8名回收了所施用的菌株的5種。在T1再分離的菌株為卷曲乳桿菌VPC177、加氏乳桿菌VPG44和植物乳桿菌HEAL 19;而在T1和T2均回收了植物乳桿菌HEAL 99和植物乳桿菌HEAL 9(表2)。
表2.在受試者(s)的陰道和糞便樣品中發現的再分離的菌株。括號內“d”指出菌株從隨機挑取的菌落再分離,即該菌株代表總的乳桿菌菌群的占優勢部分。菌株    受試者    數目取樣時間T1  T2卷曲乳桿菌VPC177加氏乳桿菌VPG44植物乳桿菌HEAL 19        植物乳桿菌HEAL 99/9       S7     S2    S10    S3    S4    S5    S6    S7    S8    S9    S10      S3    S4    S7    S9    S10糞便 糞便糞便(d)*糞便(d)糞便糞便(d);陰道糞便(d)糞便(d);陰道(d)糞便(d)糞便陰道(d)糞便(d)-糞便(d)糞便(d)糞便(d)  -   -  -  -  -  -  -  -  -  -  -    陰道(d)  陰道(d)  -  -  -
RAPD-隨機擴增多態DNA(RAPD)
還用如Johansson等人,1995 Randomly Amplified PolymorphicDNA(RAPD)for rapid typing of Lactobacillus plantarum strains.Lett.Appl.Microbiol.21:155-159描述的隨機擴增多態DNA(RAPD)的基于PCR的方法,用如下的改進分析最引入關注的細菌菌株。從來自MRS瓊脂板的純培養物的3-5個菌落制備粗細胞提取物。將純培養物的細胞用1ml無菌Milli-Q水洗滌兩次,并在Eppendorf管中用玻璃珠(直徑2mm),用Eppendorf混合器(5432;Eppendorf,Hamburg德國)破裂10分鐘。使用的引物具有序列5′-CCGCAGCCAA-3′和15μM的濃度。來自Qiagen的Taq mastermix用于PCR反應。通過使用BioNumerics 2.5(Applied Maths,Kortrijk,比利時),用Pearson積矩相關系數(r)和利用算術平均值的未加權配對組方法(UPGMA;Romersburg,1984)分析凝膠的帶模式。RAPD模式的計算機化聚簇分析與目視比較相結合。
通過對表1的8個卷曲乳桿菌菌株和1個加氏乳桿菌菌株使用上述RAPD方法,可以鑒定含有具有80%相似性的菌株的兩個聚簇(見圖1的系統樹)。在這種聚簇中的菌株被認為是相互的變種并且預測其具有相似的性質。聚簇之一含有菌株VPC 70、VPC 71和VPC 5,而另一個含有菌株VPC 177、VPC 40和VPC 111。例如,經口施用后在陰道中可以發現菌株VPC 177,并且因此相同的RAPD聚簇內的其他菌株也可能具有這種能力。
結論
實驗證明所選的植物乳桿菌菌株通過經口施用和腸確立在陰道內建群的出乎意料的能力。應該指出的是,用相對低劑量的益生菌在短時間內施用實現了該結果并且將植物乳桿菌與陰道的更典型的菌株,即更頻繁發生的物種和從陰道分離的菌株進行了比較。
實施例2
酵母凝集作用作為甘露糖附著的度量
在該實驗中,通過目測確定細菌凝集酵母細胞作為酵母細胞和細菌的可見的沉淀的能力。將洗滌的細菌以每毫升2×1010個細胞的濃度懸浮在PBS(pH 7.2)中。在顯微鏡載玻片上,將懸浮在PBS或者含有0.125%(重量/體積)的D-甘露糖的PBS中的2.5%(重量/體積)面包酵母(啤酒糖酵母(Saccharomyces cerevisiae))的溶液加入等體積的細菌溶液中。通過溫和搖動載玻片混合細菌和酵母溶液,并計算轉動數直到出現凝集的酵母和細菌細胞的沉淀。比較有和沒有甘露糖的溶液之間的該轉動數。如果在有或者沒有甘露糖的樣品之間,直到出現可見的沉淀時的轉動數相差超過10倍,那么將酵母凝集分類為甘露糖敏感的。
在實驗期間,表明卷曲乳桿菌VPC 177和VPC 70能夠以甘露糖敏感的方式凝集酵母。以前已經表明甘露糖敏感的酵母凝集與附著到人結腸癌細胞系HT-29的細胞的能力相關(Adlerberth,I.,Ahrné,S.,Johansson,M-L.,Molin,G.,Hanson,L-.,and Wold,A.E.(1996).Amannose-specific adherence mechanism in Lactobacillus plantarumconferring binding to the human colonic cell line HT-29,Appl.Environ.Microbiol.,62,2244-2251.),并且從而是促進腸中研究中的細菌的建群和持久性的因素。因此,非常可能的是,細菌的該特征對于陰道和泌尿道中的建群也是重要的,并且因此是與大腸桿菌的尿路致病(uropathogenic)細菌菌株競爭的機制。以前對保藏號DSM 6595的植物乳桿菌299和保藏號DSM 9843的植物乳桿菌299v也顯示了該特征,從而甘露糖特異性附著的機制。
實施例3
下面實驗的目的是研究4種乳桿菌屬菌株在腸和陰道中的確立,這通過研究經口攝入冷凍干燥的配方中的乳酸細菌后它在糞便和陰道流體中的存在來進行。
重要的是強調該實驗在人體內進行,因為體外研究和動物研究都不能反映施用于人時的存活程度。這些細菌當培養后直接施用時在腸中確立的能力在以前的研究中有記載(Moreno,Alejandra Vásquez2004 PhD thesis:Systematics of Lactobacillus spp.of probiotic potentialFood Technology;Lund University.)。在所述研究中,使用從過夜培養物得到的新鮮細菌細胞。然而,更方便的是使用實際產品中的凍干產品。因此,在該實驗中由于該原因而選擇凍干的制劑。
主要目的是研究在開放式研究中經口攝入菌株后,來自陰道的四種乳桿菌屬菌株在糞便和陰道流體中的存在。
因為陰道中的許多疾病,如泌尿道感染從直腸粘膜產生,所以有益的是看到糞便和陰道流體中健康乳桿菌的活菌計數都增加。如果本發明的健康細菌菌株除了陰道外還影響直腸,那么本發明的健康乳桿菌細菌將抑制直腸中不希望的細菌,從而避免陰道中發生來自直腸的疾病。
材料和方法
實驗設計
該實驗是開放研究并且用一組受試者進行。該實驗分成八個時間段:
1.14天的清除時間段(第1-14天)
2.在14天期間卷曲乳桿菌VPC 111的經口攝入時間段(第15-28天)。
3.14天的清除時間段(第29-42天)
4.在14天期間加氏乳桿菌VPG 44的經口攝入時間段(第43-56天)。
5.14天的清除時間段(第57-70天)
6.在14天期間卷曲乳桿菌VPC 177的經口攝入時間段(第71-84天)。
7.14天的清除時間段(第85-98天)
8.在14天期間植物乳桿菌HEAL 9的經口攝入時間段(第99-112天)。
受試者和募集
通過對Lund的Ideon and Chemical Centre(Lund University)的職員發送信息募集18-65歲的36名健康婦女。排除Probi AB,已知對該制劑中包括的任何成分不耐受或者變應性的,當前治療嚴重胃腸病癥和當前治療陰道病癥的職員。
實驗產品分別含有凍干的卷曲乳桿菌VPC177、卷曲乳桿菌VPC111、植物乳桿菌HEAL9和加氏乳桿菌VPG44。加入蔗糖、麥芽糖糊精(maltodextrine)和水解的明膠作為冷凍保護劑。
日攝入為經口2×1g凍干的乳桿菌(約1×109cfu/天)。在早晨和晚上服用劑量并且其與膳食結合攝入。產品以囊劑提供。
飲食規則
從第1天到第113天,受試者不被允許攝入含有益生菌細菌的產品。為每個受試者提供在研究時間段期間不允許消費的益生菌產品列表。這樣做是為了確保其他益生菌細菌不干擾該實驗。
伴隨藥療法
在病例報告表(CRF)和日志中指出所有伴隨藥療法。
在研究期間的排除標準是沒有連續服用>4劑(2天)或者在研究的每個攝入時間段期間沒有服用總共>8劑(4天)的受試者、沒有遵循飲食規則的受試者、在第1天和第112天之間對于嚴重的胃腸疾病而開始醫學治療過程的受試者(由主要研究人員判斷)和不希望繼續該研究的受試者。
在第15、29、43、57、71、85、99和113天上交糞便和陰道樣品。在服用第一劑周期實驗產品之前收集第15、43、71和99天的樣品。在不超過上交用于分析前18小時收集樣品,并且在該時間段期間將樣品在冰箱中保存。分析樣品中的乳桿菌。
通過蓋子插入陰道拭子(Copan amies瓊脂凝膠拭子;Copaninnovation,Brescia,意大利)收集陰道樣品以防止細菌污染。在不超過上交用于分析前3小時收集樣品,并在該時間段期間將其保存在冰箱中。
針對乳桿菌菌群,通過(根據Johansson等人,1998)的微生物學方法分析樣品。(Rogosa瓊脂,厭氧,37℃下3天)。根據Johansson等人,Lett.Appl.Microbiol.1995;21:155-159,用隨機擴增多態DNA分析(RAPD)鑒定不同的乳桿菌。
根據Wilcoxon符號秩檢驗計算統計學值,見表1和2。
結果
在36名婦女中,31名參加了1和2時間段(WO+VPC111),34名參加了3和4時間段(WO+VPG44),28名參加了5和6時間段(WO+VPC177),且31名參加了7和8時間段(HEAL 9)。25名婦女參加了所有研究時間段。
表1攝入實驗產品2周之前和之后,在糞便樣品中的乳桿菌(平均值(最小值-最大值))。檢測水平下的值設為3.0,且超出檢測水平的值設為9.0以使得能夠計算。實驗產品中的菌株糞便計數(cfu/g)總乳桿菌施用的實驗菌株VPC111攝入前攝入后  4.9(<3-7.3)6.2(<3->9)p=0.01 3.0(<3-4.6)3.0(<3) VPG44攝入前攝入后5.8(<3->9)6.1(3.8-8.7) 3.0(<3-4.2)3.3-(<3-5.9)VPC177攝入前攝入后  5.4(<3.0-9.0)7.0(<3.0-9.8)p=0.000 3.1(<3-4.5)3.3(<3-8.1) HEAL9攝入前攝入后  6.9(<3->9)7,2(4.0-9.4)  3.0(<3)5.8(<3-8.0)p=0.000
表2攝入實驗產品2周之前和之后,在陰道樣品中的乳桿菌(平均值(最小值-最大值))。對于陰道樣品,檢測水平下的值設為2.0以使得能夠計算。實驗產品中的菌株計數(log cfu/拭子)總乳桿菌施用的實驗菌株VPC111攝入前攝入后5.0(<2-8.2)4.9(<2-8.0)2.0(<2-4.6)2.3(<2-7.3)VPG44攝入前攝入后5.1(<2-8.8)5.2(<2-8.4)2.0(<2)2.0(<2)VPC177攝入前攝入后  4.7(<2-8.0)5.3(<2-8.2)p=0.03 2.2(<2-6.6)2.2(<2-7.2) HEAL9攝入前攝入后 5.4(<2-8.3)5.3(<2-8.5) 2.0(<2)2.1(<2-4.2)
卷曲乳桿菌的兩個菌株VPC111和VPC177導致糞便菌群中總乳桿菌顯著增加。此外,經口攝入VPC177后,在陰道流體中觀察到總乳桿菌的顯著增加。從而,非常有趣的是注意到經口攝入益生菌細菌卷曲乳桿菌VPC111和VPC177后,觀察到糞便中乳桿菌的總的增加。經口攝入卷曲乳桿菌VPC177后也觀察到陰道流體中總乳桿菌的顯著增加。從而,不必通過以栓劑或者陰道插入物的形式服用菌株來實現陰道或直腸中關于健康的乳桿菌方面的有益效果。現在已經表明經口攝入某些乳桿菌,如卷曲乳桿菌VPC111和VPC177引起糞便以及陰道流體中乳桿菌的總的增加。    
植物乳桿菌HEAL9對糞便和陰道菌群缺乏效果可能是由于總乳桿菌的高的初始濃度。可以推測攝入VPC177后的清除時間段不夠長(圖1和2)。然而,值得一提的是在31名婦女的27名中,根據Johansson等人,Lett.Appl.Microbiol.1995;21:155-159,通過隨機擴增多態DNA分析可以回收植物乳桿菌HEAL 9。在攝入后通過RAPD測試的婦女中也回收了其他實驗菌株。
總之,糞便和陰道流體中總的乳桿菌濃度的顯著增加表明乳桿菌是有活性的并且已經確立。因為在每個攝入時間段期間沒有提供其他益生菌材料,所以肯定是所服用的益生菌細菌菌株實現了所述效果。
從而,陰道乳桿菌菌株,即已經最初從陰道分離的菌株可以通過經口服用的凍干產品而穿過胃腸道存活并且能夠在陰道中再建群。卷曲乳桿菌VPC177尤其增加了陰道中乳桿菌的總濃度。這是非常令人驚奇的,因為已知由于非常高的敏感性,分離的陰道乳桿菌菌株的穩定性非常低。為了在陰道健康方面增加本發明的細菌菌株的有益效果,經口和陰道施用細菌菌株將有助于陰道更保持健康。

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