• / 11
  • 下載費用:30 金幣  

一種秀珍菇液態菌種的培養方法.pdf

摘要
申請專利號:

CN201310226775.6

申請日:

2013.06.07

公開號:

CN103283487B

公開日:

2014.10.01

當前法律狀態:

終止

有效性:

無權

法律詳情: 未繳年費專利權終止 IPC(主分類):A01G 1/04申請日:20130607授權公告日:20141001終止日期:20160607|||授權|||實質審查的生效IPC(主分類):A01G 1/04申請日:20130607|||公開
IPC分類號: A01G1/04 主分類號: A01G1/04
申請人: 天津寶地農業科技發展有限公司
發明人: 郭金體; 劉松松; 張莉莉
地址: 301802 天津市寶坻區九園工業園區第三大街六號路九號
優先權:
專利代理機構: 天津盛理知識產權代理有限公司 12209 代理人: 董一寧
PDF完整版下載: PDF下載
法律狀態
申請(專利)號:

CN201310226775.6

授權公告號:

|||103283487B||||||

法律狀態公告日:

2017.07.21|||2014.10.01|||2013.10.16|||2013.09.11

法律狀態類型:

專利權的終止|||授權|||實質審查的生效|||公開

摘要

本發明涉及一種秀珍菇液態菌種的培養方法,步驟如下:將秀珍菇母種接種到一級轉接斜面培養基上,22~27℃培養9~11天,得一級秀珍菇種子;將一級秀珍菇種子接入到二級擴大培養基中,按每0.2~0.4cm3的瓊脂斜面母種3塊~5塊加入到600-700ml二級擴大培養基中進行接種,于22~27℃培養8~10天,得二級秀珍菇種子液;將二級秀珍菇種子按接種量為0.109~0.127%接入到三級擴大培養基中,于22~27℃培養8~10天,得秀珍菇液態菌種。本發明培養方法工藝簡便、生產周期短、污染少,而且降低了成本、適宜于工廠化生產,同時,所制備得到的秀珍菇液態菌種萌發快速、純度較高。

權利要求書

權利要求書
1.   一種秀珍菇液態菌種的培養方法,其特征在于:步驟如下:
(1)秀珍菇母種的一級轉接
將秀珍菇母種接種到一級轉接斜面培養基上,22~27℃培養9~11天,得一級秀珍菇種子;
其中,一級轉接斜面培養基的配方為:每1000ml純凈水中加入馬鈴薯培養基 38~40g、瓊脂 <0.1g,121℃、0.11Mpa滅菌15min;
(2)秀珍菇菌種的二級擴大培養
將步驟(1)中的一級秀珍菇種子接入到二級擴大培養基中,按每0.2~0.4cm3的瓊脂斜面母種3塊~5塊加入到600?700ml二級擴大培養基中進行接種,于22~27℃培養8~10天,得二級秀珍菇種子液;
其中,二級擴大培養基的配方為:每1000ml純凈水中添加葡萄糖、蛋白胨、酵母膏,葡萄糖:蛋白胨:酵母膏的質量比為10:3:2,121℃、0.11Mpa滅菌25min;
(3)秀珍菇菌種的三級擴大培養
將步驟(2)中的二級秀珍菇種子按接種量為0.109~0.127%接入到三級擴大培養基中,于22~27℃培養8~10天,得秀珍菇液態菌種;
其中,三級擴大培養基的配方為:
自來水中加入葡萄糖、蛋白胨、酵母膏、磷酸二氫鉀、硫酸鎂、消泡劑,或自來水中加入葡萄糖、蛋白胨、酵母膏、磷酸二氫鉀、硫酸鎂、食用油,其中,自來水:葡萄糖:蛋白胨:酵母膏:磷酸二氫鉀:硫酸鎂:工業消泡劑的比例kg:kg:kg:kg:kg:kg:ml為:540~560:9~11:1.5~2.5:1~2:0.5~1.5:0.3~0.7:70~90;自來水:葡萄糖:蛋白胨:酵母膏:磷酸二氫鉀:硫酸鎂:食用油的比例kg:kg:kg:kg:kg:kg:ml為:540~560:9~11:1.5~2.5:1~2:0.5~1.5:0.3~0.7:400?500,然后高壓滅菌;
高壓滅菌的程序如下:第一階段:保溫溫度100℃,保溫時間70min;第二階段:保溫溫度112℃,保溫時間20min;第三階段:滅菌溫度121℃,保溫時間50min;第四階段:冷卻行程溫度30℃,時間40min左右。

2.   根據權利要求1所述的秀珍菇液態菌種的培養方法,其特征在于:所述步驟(1)中一級轉接斜面培養基的配方為:每1000ml純凈水中加入馬鈴薯培養基 39g、瓊脂 0.01~0.099g,121℃、0.11Mpa滅菌15min。

3.   根據權利要求1所述的秀珍菇液態菌種的培養方法,其特征在于:所述步驟(2)中二級擴大培養基的配方為:每1000ml純凈水中添加葡萄糖、蛋白胨、酵母膏,葡萄糖:蛋白胨:酵母膏的質量比為10:3:2,121℃、0.11Mpa滅菌25min。

4.   根據權利要求1所述的秀珍菇液態菌種的培養方法,其特征在于:所述步驟(3)中三級擴大培養基的配方為:
自來水中加入葡萄糖、蛋白胨、酵母膏、磷酸二氫鉀、硫酸鎂、消泡劑,或自來水中加入葡萄糖、蛋白胨、酵母膏、磷酸二氫鉀、硫酸鎂、食用油,其中,自來水:葡萄糖:蛋白胨:酵母膏:磷酸二氫鉀:硫酸鎂:工業消泡劑的比例kg:kg:kg:kg:kg:kg:ml為:550:10:2:1.5:1:0.5:80;自來水:葡萄糖:蛋白胨:酵母膏:磷酸二氫鉀:硫酸鎂:食用油的比例kg:kg:kg:kg:kg:kg:ml為:550:10:2:1.5:1:0.5:400~500。

說明書

說明書一種秀珍菇液態菌種的培養方法
技術領域
本發明屬于食用菌菌種的制備技術領域,尤其是一種秀珍菇液態菌種的培養方法。
背景技術
秀珍菇,在真菌分類中隸屬于無隔擔子菌綱,傘菌目,側耳科,側耳屬。食用菌秀珍菇,是一種高蛋白的營養食品,秀珍菇菌肉肥嫩,味鮮爽口,有鮮甜海鮮味,并且營養豐富,蛋白質含量比雙胞蘑菇、香菇、草菇更高,接近肉類,比一般蔬菜高3~6倍,富含人體必需的八種氨基酸和多種維生素,特別是硒含量達0.4?0.5mg/kg。質地細嫩,纖維含量少,因此它鮮美可口,具有獨特的風味,美其名曰“味精菇”,附加值高。而且,秀珍菇的產出期在6?8月份,恰在其他食用菌菇產出的空檔季節,產品競爭優勢明顯,銷售市場十分廣闊,有著巨大的發展空間。
但是,目前秀珍菇液態菌種的培養方法大都工藝較為繁瑣,生產周期較長,污染較為嚴重、速度較慢,而且生產成本較高,同時,所制備得到的秀珍菇的純度較低,不適宜于工廠化生產。
通過檢索,發現如下兩篇與本發明申請相關的專利公開文獻:
1、利用鈷60輻射處理提高子實體產量和氨基酸總量的秀珍菇菌種生產方法(CN102499070A),包括以下工藝步驟:生產母種、生產原種、利用原種生產栽培種,其特征是:在生產母種時,其制作步驟為:備料,包括制作母種培養基,將母種培養基裝入試管中;從秀珍菇子實體中提純復壯后獲得母種,將母種菌絲體接入母種培養基上;菌絲體滿管后進行鈷60輻射誘變育種處理,輻射誘變時間為30?60分鐘、輻射劑量掌控為0.4KGY?0.6KGY。與已有技術比較,本發明可明顯提高秀珍菇子實體產量和各類氨基酸總量,包括硫氨基酸總量、支鏈氨基酸總量、兒童氨基酸總量、必需氨基酸總量、鮮味氨基酸總量、甜味氨基酸總量和氨基酸總量顯著提高。
2、一種平菇、秀珍菇菌種倍增循環繁殖方法(CN102771310A),涉及到一種平菇、秀珍菇菌種倍增循環繁殖方法。具體包括:設置有空氣對流窗口、有遮光物,空間大小約40~50m3/間的菌種培養室,在培養室構建多層結構的菌種培養床架,菌種倍增循環培養時是在床架里進行,培養期間匹配間歇定時器來控制氧氣泵給菌種間歇供氧以利菌絲快速萌發且吃料;生產用培養基質料是通過發酵而成,繁殖時根據重量比將生產用培養基質料和菌種混合后在培養床架里培養得第一批菌種,然后再根據重量比將第一批菌種與生產用培養基質料混合又通過管理培養得第二批菌種,接下來同樣按照上述方法將第二批菌種循環倍增培養出適合足夠自身安排的菌種量。
通過對比,本發明申請與上述專利公開文獻存在本質的不同。
發明內容
本發明的目的在于克服現有技術的不足,提供一種方法簡便、生產周期短、污染少、快速萌發、低碳環保、降低了生產成本、適宜于工廠化生產的秀珍菇液態菌種培養方法,該方法所制備得到的秀珍菇出菇整齊、純度較高,為綠色有機食品。
本發明實現目的的技術方案是:
一種秀珍菇液態菌種的培養方法,步驟如下:
(1)秀珍菇母種的一級轉接
將秀珍菇母種接種到一級轉接斜面培養基上,22~27℃培養9~11天,得一級秀珍菇種子;
其中,一級轉接斜面培養基的配方為:每1000ml純凈水中加入馬鈴薯培養基 38~40g、瓊脂 <0.1g,121℃、0.11Mpa滅菌15min;
(2)秀珍菇菌種的二級擴大培養
將步驟(1)中的一級秀珍菇種子接入到二級擴大培養基中,按每0.2~0.4cm3的瓊脂斜面母種3塊~5塊加入到600?700ml二級擴大培養基中進行接種,于22~27℃培養8~10天,得二級秀珍菇種子液;
其中,二級擴大培養基的配方為:每1000ml純凈水中添加葡萄糖、蛋白胨、酵母膏,葡萄糖:蛋白胨:酵母膏的質量比為10:3:2,121℃、0.11Mpa滅菌25min;
(3)秀珍菇菌種的三級擴大培養
將步驟(2)中的二級秀珍菇種子按接種量為0.109~0.127%接入到三級擴大培養基中,于22~27℃培養8~10天,得秀珍菇液態菌種;
其中,三級擴大培養基的配方為:
自來水中加入葡萄糖、蛋白胨、酵母膏、磷酸二氫鉀、硫酸鎂、消泡劑,或自來水中加入葡萄糖、蛋白胨、酵母膏、磷酸二氫鉀、硫酸鎂、食用油,其中,自來水:葡萄糖:蛋白胨:酵母膏:磷酸二氫鉀:硫酸鎂:工業消泡劑的比例kg:kg:kg:kg:kg:kg:ml為:540~560:9~11:1.5~2.5:1~2:0.5~1.5:0.3~0.7:70~90;自來水:葡萄糖:蛋白胨:酵母膏:磷酸二氫鉀:硫酸鎂:食用油的比例kg:kg:kg:kg:kg:kg:ml為:540~560:9~11:1.5~2.5:1~2:0.5~1.5:0.3~0.7:400?500,然后高壓滅菌;
高壓滅菌的程序如下:第一階段:保溫溫度100℃,保溫時間70min;第二階段:保溫溫度112℃,保溫時間20min;第三階段:滅菌溫度121℃,保溫時間50min;第四階段:冷卻行程溫度30℃,時間40min左右。
而且,所述步驟(1)中一級轉接斜面培養基的配方為:每1000ml純凈水中加入馬鈴薯培養基 39g、瓊脂 0.01~0.099g,121℃、0.11Mpa滅菌15min。
而且,所述步驟(2)中二級擴大培養基的配方為:每1000ml純凈水中添加葡萄糖、蛋白胨、酵母膏,葡萄糖:蛋白胨:酵母膏的質量比為10:3:2,121℃、0.11Mpa滅菌25min。
而且,所述步驟(3)中三級擴大培養基的配方為:
自來水中加入葡萄糖、蛋白胨、酵母膏、磷酸二氫鉀、硫酸鎂、消泡劑,或自來水中加入葡萄糖、蛋白胨、酵母膏、磷酸二氫鉀、硫酸鎂、食用油,其中,自來水:葡萄糖:蛋白胨:酵母膏:磷酸二氫鉀:硫酸鎂:工業消泡劑的比例kg:kg:kg:kg:kg:kg:ml為:550:10:2:1.5:1:0.5:80;自來水:葡萄糖:蛋白胨:酵母膏:磷酸二氫鉀:硫酸鎂:食用油的比例kg:kg:kg:kg:kg:kg:ml為:550:10:2:1.5:1:0.5:400~500。
本發明的優點和有益效果為:液態菌種培養周期短,走菌快,污染少
1、本發明培養方法工藝簡便、生產周期短、污染少,而且降低了成本、適宜于工廠化生產,同時,所制備得到的秀珍菇液態菌種萌發快速、純度較高。
2、本發明方法培養得到的秀珍菇液態菌種接種后,所制備得到的秀珍菇純度較高,出菇整齊,口感潤滑、美味營養,食用方便,為綠色有機食品,包裝后可以進行市場銷售。
3、本發明培養方法在秀珍菇菌包和指導栽培的過程中不添加任何化學物質,完全符合國家環保標準,該方法低碳、綠色環保、有利于綠色食品行業的成長,有利于提高當地農民的收入,有利于促進當地經濟的發展。
具體實施方式
下面通過具體實施例對本發明作進一步詳述,以下實施例只是描述性的,不是限定性的,不能以此限定本發明的保護范圍。
如無特殊說明,本發明中所使用的試劑為常規試劑;如無特殊說明,所使用的方法為常規方法。
本發明中所使用的秀珍菇母種購買于天津寶地農業科技發展有限公司。
一種秀珍菇液態菌種的培養方法,步驟如下:
(一)母種的擴大培養(一級試管轉接)
1、實驗儀器
玻璃試管(18mm×180mm或20mm×200mm)、接種針、酒精(75%)。
2、試管培養基工藝參數及制作
①培養基工藝參數
一級轉接斜面培養基的配方為:39g PDA(馬鈴薯培養基)、瓊脂(不足0.1g)、純凈水1000ml,121℃、0.11Mpa滅菌15min;
②培養基的制作
1)計算:首先要計算出1000mL的PDA需用多少四角瓶與試管,一般情況下,試管添加量大概為8—9mL,四角瓶為38—40mL左右。
2)儀器要求:把需要的試管、四角瓶、三角瓶等清洗干凈,瓶壁上無水珠備用;
3)稱量:稱取39gPDA(馬鈴薯培養基)于一張白紙上面,再加入定量的瓊脂(不足0.1g),倒入1000ml的燒杯中;
4)溶解:打開電飯煲,加入純凈水,然后量取1000ml純凈水,倒入燒杯中,邊加入邊攪拌,把燒杯放到電飯煲中加熱,邊攪拌邊加熱;1h后,等煮制的PDA溶液澄清透明后,方可制作培養基進行分裝;
5)分裝:先倒出一部分溶液,剩余的繼續加熱,先分裝到四角瓶中,瓶口用漏斗分裝,加入一定量時,把四角瓶水平放置,看培養基是否覆蓋整個平面,不得溢出,其他四角瓶以此為標準,進行分裝,速度要快,防止培養基凝固,試管也是同樣分裝,剩余的培養基倒入500ml三角瓶里,留做平皿使用;
6)包扎:把試管、三角瓶、四角瓶塞上棉塞包扎好;
7)滅菌:把所有滅菌的容器放到高壓鍋內滅菌,滅菌時間與溫度為121度15分鐘;
8)滅菌結束:關閉開關,切斷電源,等壓力降至0 Mpa時,打開手動放氣閥,排出鍋內蒸汽;
9)斜面制作:取出滅菌完的溶液;把四角瓶水平放置,試管棉塞處略高些,底部放到桌面上,使培養基溶液液面為試管的2/3處為最佳,把試管擺放整齊,三角瓶稍冷卻后,手掌握住瓶底不燙手為佳,無菌操作倒入到平皿(25ml)內,倒完把平皿放置在一起,最上層用三角瓶(內加溫水)壓住,使其自然冷卻;
10)將秀珍菇母種接種到一級轉接斜面培養基上,
11)實驗結束:制作結束后,整理實驗臺。
3、注意事項
①分裝培養基時,速度要迅速,防止培養基凝固,不易分裝;
②如果培養基粘瓶口處,要立即用紗布擦拭干凈,再塞上棉塞,防止被污染;
③做PDA時,一定要加入少量瓊脂,如果不加防止做好的培養基凝固度不良,易破碎,對下面的工序也會有所影響;
④做好PDA斜面,如果放置幾天后,試管與四角瓶瓶壁上有過多的冷凝水,不宜使用;等試管與四角瓶無冷凝水時,方可使用;
⑤基本上每月做一次PDA,每周轉接兩次母種,要計算一下所需使用量;
⑥做試管時,建議用10ml的吸管把溶液移到試管里,會避免有溶液粘到試管口處,容易被污染。
(二)菌種二級擴大培養(液體三角瓶接種)
1、實驗儀器
(三角瓶)1000ml、燒杯(1000ml)
2、液體三角瓶培養基的制作滅菌及接種
①培養基工藝參數
二級擴大培養基的配方為:二級擴大培養基的配方為:每1000ml純凈水中添加葡萄糖、蛋白胨、酵母膏,葡萄糖:蛋白胨:酵母膏的質量比為10:3:2,121℃、0.11Mpa滅菌25min;
②液體三角瓶培養基的制作
1)稱料:電子天平分別稱取葡萄糖50g,蛋白胨15g,酵母膏10g,關閉電子天平,水平放置在工作臺上;
2)量水:用量杯量取1000ml自來水(用活性炭過濾),倒入到1000ml的燒杯中;打開電飯鍋,加入少量水,把量好的燒杯放到電飯鍋里加熱,目的使原料溶解;
3)溶解:把加熱好的溫水倒入到量杯中,量杯里為所加原料,用勺子攪拌至完全溶解;另外量取4000ml自來水加入到大桶里備用;
4)攪拌:把完全溶解的原料加入到桶里,攪拌至均勻;
5)分裝:把所需的三角瓶清洗干凈,加入磁鐵,每個瓶里放一個磁鐵,量取配好的溶液600ml,倒入三角瓶里;分裝三角瓶后,塞上棉塞,棉塞不得過緊或過松,塞上拔出時有砰的聲音為佳,里層包一層白紙,外層包一層玻璃紙,用橡皮筋扎緊;
6)滅菌:把所需滅菌的三角瓶放到滅菌槽內,三角瓶上面用3?5層報紙蓋住,最上層用玻璃紙覆蓋,檢查滅菌鍋里水是否達到水位線,不足的話加入水至水位線,旋緊滅菌蓋,檢驗放氣閥是否關緊,插上電源;打開滅菌鍋開關,設定滅菌時間與溫度(121℃、25min),按計時工作鍵進行工作;一定要把手動放氣閥關閉,放氣閥連接的橡膠管口,一定要插到水桶液面下;
7)結束:滅菌結束后,關閉滅菌鍋開關,切斷電源;等壓力降至0mpa打開手動放氣閥,放出滅菌鍋內的蒸汽;打開滅菌鍋,取滅菌后的三角瓶,待用;把滅菌鍋的鍋蓋合上。
③液體三角瓶的接種
1)要求:穿好工作服,更換工作鞋,一定要通過風淋室進入;
2)準備工作:整理水平操作臺,打開無菌風15min左右,打開無菌燈;
3)消毒:先用自來水擦試工作臺,再用75%的酒精倒到脫脂棉上,擦拭工作臺,包括接種使用的接種針、酒精燈、燈架等;換用另一塊脫脂棉,倒上酒精,擦拭三角瓶各個部位,用酒精進行消毒試管(四角瓶、平皿);擦完后放到無菌操作臺上備用;
4)選用優良原種:要確保原種無雜菌,菌絲爬滿整個斜面,按照母種的先后日期,記錄原種的日期與編號;
5)酒精消毒:倒入一杯75%的酒精溶液,把接種針插到玻璃杯內消毒,由于酒精易揮發,使用完一次后,用紙包裝好,重復使用兩次倒掉;用75%的酒精消毒雙手與手臂;打開酒精燈,燈帽放置旁邊,點燃酒精燈,酒精燈放置在操作臺中間位置;
6)接種:打開三角瓶包裝紙,靠近酒精燈火焰,把棉塞拔出,灼燒三角瓶的瓶口周圍,灼燒兩圈,然后灼燒棉塞,立即塞上棉塞,四角瓶或試管也同樣操作;右手拿接種針,先垂直灼燒接種針旋轉,然后水平放置,灼燒頂端至微紅,然后整支接種針重復灼燒4次,不得過快或過慢,恰到好處;
7)試管消毒操作:用左手和手掌托起試管,瓶塞對準火焰處,右手拿接種針,拔掉棉塞,然后灼燒試管瓶口旋轉兩圈,把接種針插入試管內,接種針不得碰到菌絲表面;
8)預冷及取點:先將接種針在試管中間位置冷卻,取出一小塊菌絲,用接種針取出;灼燒試管瓶口與棉塞,立即塞上棉塞,然后拔下三角瓶棉塞,灼燒三角瓶瓶口與棉塞,把菌塊迅速敲下去,再灼燒瓶口與棉塞,每個三角瓶里取三個生長點,按每0.3cm3的瓊脂斜面母種3塊~5塊加入到600?700ml二級擴大培養基中進行接種;接種完三角瓶,立即用紙與玻璃紙蓋上,用橡皮筋包扎好,記錄接種日期;
9)實驗結束:整理水平操作臺,關閉無菌風與燈。
3、注意事項
1)液體三角瓶培養基制作注意事項
a.必須確保電子天平的精確度,這樣稱量的原料精確無誤;
b.電飯煲里加入的水是純凈水,防止鍋底有雜質粘到鍋底;
c.做三角瓶時,要清洗三角瓶與磁鐵,壞的磁鐵單獨放在一起,防止再次使用;
d.棉塞重復使用兩三次后,要更換新的棉塞;
e.一切做完后,要注意整理實驗臺。
2)液體三角瓶接種的注意事項
a.在接種過程中,保持四角瓶(試管)與桌面平行,管口略向下傾斜,不得遠離酒精燈火焰;
b.接種前一定要確保所用接種工具消毒徹底,防止接種過程中被污染;
c.接種的菌塊不易過大,所帶培養基較薄,易培養;
d.如果把菌塊敲到瓶口壁上,要及時用接種針取出,灼燒瓶口與棉塞,立即塞上棉塞;
e.接種完的三角瓶,要寫上日期與編號,以便做記錄;
f.接種完的三角瓶需放置24h后,方可放到磁力攪拌機上進行培養觀察,轉速要調慢些,三天后再上調;
g操作工作臺每周消毒清洗兩次;
h.接種針冷卻時,插入的接種針后端不得碰到菌絲表面,防止燒死菌絲。
(三)菌種三級擴大培養(液體發酵罐接種)
1、設備
液體發酵罐、水桶、過濾塞、大勺、攪拌棒、電子稱
2、配料工序衛生要求及操作規范
①衛生要求
1)配料室人員嚴格按照衛生要求進入;
2)隨時保持配料室環境衛生,防止微生物的滋生;
3)配料時戴口罩和手套。
②操作規范
1)接到生產通知后,嚴格按照配方的用量計算各種配料的數量;
2)領用的各種配料必須放置于墊板上,禁止直接放置在地板上;
3)稱量分裝:
a.按照稱量多少選擇電子稱量程;
b.去皮:將分裝配料的包裝袋去皮,保證其凈含量;
c.稱量:待數字顯示穩定后再移走。及時將掉落在電子稱上的配料清理干凈;
d.稱量好的原料應按用量分別放置在一定區域,并標示清楚名稱及數量。
3、液體發酵罐的制作滅菌及接種
①培養基配制工藝參數
三級擴大培養基的配方為:葡萄糖:10kg、酵母膏:1.5kg、硫酸鎂:0.5kg、蛋白胨:2kg、磷酸二氫鉀:1kg、消泡劑(食用油):400?500ml或工業消泡劑80ml。
②制作發酵罐工藝流程
1)稱料:用電子秤稱取所需原料,要確保電子秤精確,由于葡萄糖量較多,稱取時分裝兩個大桶,容易溶解,稱完的原料要密封保存,以備下次使用;
2)溶解:把稱好的原料加水溶解,用木棒攪拌均勻,無沉淀、細小顆粒為止;
3)裝桶:把完全溶解的原料,加入到發酵罐內,倒入時用木篩過濾,以防止不容物或其他雜質進入;
4)消泡劑:加入食用油400?500ml或加工業消泡劑80ml;
5)加水定量:加入自來水500?550kg定量;
6)密封:檢驗所有原料是否添加完全,水定量到位,封閉發酵罐進行滅菌;
7)復檢:發酵罐密封后,發酵罐下面的閥門要關閉,用鋁箔紙包裝好,發酵罐上面的出氣孔用繩子包扎緊,檢驗無誤后,推到蘑菇滅菌器內,把發酵罐的兩個氣閥分別連接滅菌器上(上進氣下出氣);
8)滅菌:檢驗是否連接正確,設定一定的工藝參數,工藝參數的設定如下:
第一階段:保溫溫度100℃,保溫時間70min;
第二階段:保溫溫度112℃,保溫時間20min;
第三階段:滅菌溫度121℃,保溫時間50min;
第四階段:冷卻行程溫度30℃,時間40min左右。
備注:整個滅菌流程控制在4個小時左右,在蒸汽正常的情況下,第一階段升溫需要40min左右;第二、第三階段需要20min左右。滅菌過程中未經允許不得更改任何工藝參數,滅菌過程中門不可開,滅菌結束后壓力將為零時方可打開。
9)結束:滅菌完全后,推出發酵罐,等發酵罐溫度降低到20℃左右方可接菌。
③接種液體發酵罐工藝流程
1)準備工作:打開無菌風(15min),先用打火機在無菌風旁邊點燃,確定無菌風的風向是否正常;
2)篩選菌種:選擇培養好的三角瓶,檢驗菌絲是否正常、有無懸浮物、泡沫等異常情況,并記錄原種的日期與編號;
3)三角瓶消毒:把三角瓶放置在托盤上,用75%的酒精溶液進行消毒,用脫脂棉擦洗瓶身;
4)發酵罐要求:檢驗發酵罐是否正常,如:桶溫、是否加食用油等;
5)無菌操作臺消毒:把發酵罐推到無菌風下方,用75%的酒精溶液消毒屏風四周; 
6)解壓:解開出氣孔的橡膠管,松動閥門,放出發酵罐內的氣壓;
7)消毒:用75%的酒精溶液消毒,噴灑發酵罐罐口四周,要均勻;用75%的酒精溶液消毒雙手與手臂,要使伸進無菌風內的手與手臂要完全消毒;
8)火焰消毒:另一位技術員點燃酒精噴燈,遞給操作員,酒精噴燈火焰要調大,然后灼燒桶蓋最外層兩圈,中間兩圈,最里層5?6圈,試大桶周圍完全消毒;熄滅酒精噴燈并遞給技術員;打開桶蓋,蓋子放置桶口旁邊,右手拿酒精噴燈灼燒管口與蓋子,左手拿三角瓶,右手拔下棉塞,用酒精噴燈灼燒瓶口,再次灼燒一下罐口與蓋子,遞出酒精噴燈;
9)接種:左手握住三角瓶底部,右手在三角瓶的上方,傾斜,離管口較近,緩慢倒入菌液,然后加快速度,最后稍慢些,倒完后遞出,另一人嗅其氣味是否正常;接完菌后再用酒精噴燈灼燒管口與蓋子,迅速扣緊蓋子,關閉無菌風; 
其中,將二級秀珍菇種子按接種量為0.109~0.127%接入到三級擴大培養基中,于22~27℃培養7~9天,得秀珍菇液態菌種;;
10)連接潔凈空氣:把接好的大桶推倒氣壓閥下,按接菌的先后順序排列,連接氣壓閥;連接氣壓閥時,先用75%的酒精噴灑氣壓閥接口與連接大桶的另一接口,后用酒精噴燈灼燒滅菌,最后迅速接上氣閥,打開壓力閥,調試氣壓為0.11MPa,4天后氣壓調至0.15MPa;
11)結束:操作結束后,記錄完成時間與三角瓶的時間和性狀,清洗實驗儀器。
4、注意事項
1)配料室注意事項
a.當天余下的配料應及時扎緊袋口,防止回潮;送回倉庫或者存放在干凈的墊板上;
b.定期(1周)對使用的電子稱進行校準。
c.做好用料記錄。
d.對于原料的配方要保密,不得告知任何人。
2)液體發酵罐制作注意事項
a.有些原料難熔解,如:硫酸鎂、磷酸二氫鉀等,加熱水易溶解,而蛋白胨也難溶解,但不能加熱水,邊加自來水邊用木棒攪拌,然后帶上橡膠手套進行細搓,直至均勻;
要確保發酵罐干凈,各個管口要清洗干凈;
b.如果更換任何一種原料,都要做好標識,以便做實驗觀察;
c.發酵罐如果滅菌不徹底,要進行二次滅菌,并做好標記;
d.不得漏加或多加某種原料,加完后要復檢;
e.由于發酵罐密封圈使用久易老化,所以清洗發酵罐時要檢查密封圈,如有發現,要及時反饋并及時更換密封圈。
f.一定要確保蓋子的旋緊性,螺絲旋緊到位,一定要對角旋緊,防止一邊松一邊緊,造成密封不良,防止未旋緊影響下道工序;
j.發酵罐所連接的橡膠管也要確保其完整性,無小氣孔,一旦發現及時更換。
3)安裝大桶注意事項
a.安裝細菌過濾器時,分清進氣孔與出氣孔,壓縮空氣從細菌過濾器(帶數字符號)的方向進入,然后連接細硅膠管,一定要安裝到位,并用扎帶扎緊。每個大桶安裝4個細菌過濾器。
b.硅膠管與大桶的每個連接點都要安裝到位,并用喉箍鎖緊。
c.要確保連接大桶的各個硅膠管的完好無缺,保證其密封性良好。
4)滅菌前注意事項
a.桶蓋上出氣孔連接的硅膠管要用夾子夾緊,并用尼龍繩扎緊。
b.大桶最下方的出氣孔要用鋁箔紙包裝好,保證其密封性。
c.推進大桶時一定要注意各個連接口不得碰到食用菌滅菌器,防止硅膠管因碰壁破裂。
d.推進大桶后,連接進氣閥(下排)與出氣閥(上排),細菌過濾器一定要放到大桶上方,防止出現倒吸現象,造成滅菌不徹底。
5)滅菌過程中注意事項
a.一定要確保系統的各個閥門(蒸汽、壓縮空氣、排氣、冷凝水)打開,保證其正常工作。
b.每小時對其進行巡檢,查看系統是否正常運轉。
c.滅菌過程中如出現異常及時反饋,并及時解決異常。
5)滅菌結束注意事項
a.系統出現報警時,說明滅菌已完成。
b.出爐時先拔下進氣閥,然后拔下出氣閥,防止出現倒吸現象。
c.推出時一定要小心,不可碰壁,防止硅膠管破裂。
d.推到放冷室冷卻,桶溫降至20℃左右方可接種。
E.如出現爆管、倒吸等現象,造成滅菌不徹底,進行二次滅菌(最好不要二次滅菌,成分易破壞)。
6)接種過程中注意事項
a.每周對無菌風機進行消毒兩次;
b.如果大桶管口槽內有水,要用脫脂棉擦拭干凈,后噴灑酒精消毒,再用噴燈灼燒滅菌;
c.如果更換培養原料或消泡劑,要做好標識,以便以后的觀察、對比;
d.接大桶前,要檢查大桶是否正常(如大桶的溫度、是否加食用油[消泡劑]、水位是否達到所需標準等);
e.接大桶時,菌液不得流到罐口外面,拔三角瓶棉塞時,不得離罐口太近,以減少污染;
f.接大桶時,從三角瓶上拔下的棉塞,不得放入托盤中,棉塞掉地上用到其他三角瓶,易造成污染。
本發明方法經發酵罐培養7?9天后培養得到的珍菇液態菌種,菌種達到一定的成熟穩定期(顏色淺黃、菌絲形態為小顆粒、羽絨,濃稠),可以用于接種,每包菌包接菌量為25?30ml,液態菌種培養周期短,走菌快,污染少。
使用本發明方法培養出的秀珍菇液態菌種培養的秀珍菇形秀小、白漂,口感柔嫩,美味爽口,營養豐富,蛋白質含量比雙孢蘑菇、香菇、草菇更高,質地細嫩,纖維含量少;據福建省農業科學院運動土壤肥料研究所測定,鮮菇中含蛋白質3.65?3.88%、粗脂肪1.13?1.18%、還原糖0.87?1.80%、糖分23.94?34.87%、木質素2.64%、纖維素12.85%、果膠0.14%,還含有纖維素、礦質無素等。它的蛋白質含量,接近于肉類,比一般蔬菜高3?6倍,秀珍菇含有17種以上氨基酸,更為可貴的是,它含有人體自身不能制造,而肉食中通常又缺乏的蘇氨酸、賴氨酸、亮氨酸等。

關 鍵 詞:
一種 秀珍菇 液態 菌種 培養 方法
  專利查詢網所有資源均是用戶自行上傳分享,僅供網友學習交流,未經上傳用戶書面授權,請勿作他用。
關于本文
本文標題:一種秀珍菇液態菌種的培養方法.pdf
鏈接地址:http://www.rgyfuv.icu/p-6419971.html
關于我們 - 網站聲明 - 網站地圖 - 資源地圖 - 友情鏈接 - 網站客服客服 - 聯系我們

[email protected] 2017-2018 zhuanlichaxun.net網站版權所有
經營許可證編號:粵ICP備17046363號-1 
 


收起
展開
山东11选5中奖结果走势图