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黑靈芝多糖用于制備丙烯酰胺損傷條件下哺乳動物肝、脾或腎臟組織保護藥物的應用.pdf

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靈芝 多糖 用于 制備 丙烯酰胺 損傷 條件下 哺乳動物 腎臟 組織 保護 藥物 應用
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摘要
申請專利號:

CN201710826682.5

申請日:

20170914

公開號:

CN107714716A

公開日:

20180223

當前法律狀態:

有效性:

審查中

法律詳情:
IPC分類號: A61K31/715,A61P1/16,A61P1/14,A61P13/12 主分類號: A61K31/715,A61P1/16,A61P1/14,A61P13/12
申請人: 南昌大學
發明人: 陳奕,張路路,王洋玲,謝明勇
地址: 330031 江西省南昌市紅谷灘新區學府大道999號
優先權: 2017103246312
專利代理機構: 代理人:
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法律狀態
申請(專利)號:

CN201710826682.5

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法律狀態公告日:

法律狀態類型:

摘要

本發明基于實驗手段考察了黑靈芝多糖對丙烯酰胺致肝、脾、腎臟損傷的保護作用。具體來看,口服黑靈芝多糖可提升肝、脾、腎臟組織中的抗氧化酶活性、降低過氧化物MDA含量;同時可恢復因丙烯酰胺所致的肝臟谷草轉氨酶、谷丙轉氨酶升高現象;還可降低腎臟組織中尿素氮、肌酐水平,恢復腎小球濾過能力。此外,本發明還發現黑靈芝多糖對丙烯酰胺所造成的炎癥性損傷具有確切的緩解作用,并進一步確認其藥理作用是通過下調促炎細胞因子IL?1β、IL?6、TNF?α的表達量、同時上調抗炎細胞因子IL?10的表達量實現的。基于黑靈芝多糖的以上新性質,本發明確定了利用其制備由丙烯酰胺所致肝、脾、腎臟損傷保護藥物的新用途,其療效確切,具有良好的應用前景。

權利要求書

1.黑靈芝多糖用于制備丙烯酰胺損傷條件下哺乳動物肝、脾或腎臟組織保護藥物的應用。2.根據權利要求1所述的應用,其特征在于所述保護是緩解由丙烯酰胺所致的氧化性損傷。3.根據權利要求2所述的應用,其特征在于所述組織是肝臟組織;所述緩解由丙烯酰胺所致的氧化性損傷,是通過降低肝臟組織中抗氧化酶SOD、GSH-Px、CAT活性實現的。4.根據權利要求2所述的應用,其特征在于所述組織是腎臟組織;所述緩解由丙烯酰胺所致的氧化性損傷,是通過降低腎臟組織中抗氧化酶SOD、CAT活性實現的。5.根據權利要求2所述的應用,其特征在于所述組織是脾臟組織;所述緩解由丙烯酰胺所致的氧化性損傷,是通過降低脾臟組織中抗氧化酶SOD、GSH-Px活性實現的。6.根據權利要求1所述的應用,其特征在于所述藥物還降低丙烯酰胺損傷條件下哺乳動物肝臟組織中谷草轉氨酶、谷丙轉氨酶含量。7.根據權利要求1所述的應用,其特征在于所述藥物還降低丙烯酰胺損傷條件下哺乳動物腎臟組織中尿素氮、肌酐含量。8.根據權利要求1所述的應用,其特征在于所述保護是緩解由丙烯酰胺所致的炎癥性損傷。9.根據權利要求8所述的應用,其特征在于所述組織是肝臟組織;所述緩解由丙烯酰胺所致的炎癥性損傷,是通過降低細胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α的表達量、同時提升細胞因子IL-10的表達量實現的。10.根據權利要求1所述的應用,其特征在于所述藥物的劑型是口服劑。

說明書

技術領域

本發明涉及醫藥技術領域,進一步涉及物質的新的醫藥用途,具體涉及黑靈芝多糖用于制備丙烯酰胺損傷條件下哺乳動物肝、脾或腎臟組織保護藥物的應用。

背景技術

丙烯酰胺(acrylamide,AA)是人們廣泛接觸的一種重要工業化合物,最初作為合成聚丙烯酰胺的化學單體,廣泛應用于污水處理、造紙工業、醫藥、農藥和染料等多種行業,是環境中潛在的有毒污染物。現有技術研究表明,丙烯酰胺具有多種毒性,其中包括神經毒性、遺傳毒性、發育毒性、雄性生殖毒性等。丙烯酰胺可通過多種途徑被人體吸收,其中經消化道吸收最快,在體內各組織廣泛分布,包括肝臟、腎臟、脾臟、甲狀腺、睪丸、乳腺、骨髓等在內的器官均可檢出丙烯酰胺或其代謝產物。

作用于上述器官后,丙烯酰胺可影響氧化還原酶活性,同時促進活性氧自由基大量生成,導致廣泛的脂質過氧化現象,進而造成氧化性損傷;此外,丙烯酰胺可致肝功能異常,以谷草轉氨酶、谷丙轉氨酶評價其含量出現異常升高;同時,還可影響腎小球濾過功能,導致尿素氮、肌酐升高,出現腎功能不全失代償期的若干癥狀;另一方面,丙烯酰胺可導致廣泛的炎癥性損傷,并伴隨著淋巴細胞亞群及細胞因子表達水平的變化。

黑靈芝多糖是多孔菌科靈芝屬黑靈芝真菌菌絲體的次生代謝產物,存在于黑靈芝的菌絲體和子實體中。現有技術研究表明,黑靈芝多糖具有抗氧化作用和抗腫瘤活性,然而對于肝、脾、腎臟等器官,尤其是丙烯酰胺致損傷條件下的器官保護作用,現有技術中未見披露。

發明內容

本發明要解決的一個技術問題是提供黑靈芝多糖的一種新用途。

本發明要解決的另一技術問題是提供可對由丙烯酰胺所致的肝、脾或腎臟損傷起到保護作用的藥物。

本發明要解決的再一技術問題是對丙烯酰胺作用下的肝臟氧化性損傷實現治療作用。

本發明要解決的又一技術問題是對丙烯酰胺作用下的肝臟炎癥性損傷實現治療作用。

為實現以上技術目的,本發明采用以下技術方案:

本發明提供了黑靈芝多糖用于制備丙烯酰胺損傷條件下哺乳動物肝、脾或腎臟組織保護藥物的應用。

作為優選,所述保護是緩解由丙烯酰胺所致的氧化性損傷。

作為優選,所述組織是肝臟組織;所述緩解由丙烯酰胺所致的氧化性損傷,是通過降低肝臟組織中抗氧化酶SOD、GSH-Px、CAT活性實現的。

作為優選,所述組織是腎臟組織;所述緩解由丙烯酰胺所致的氧化性損傷,是通過降低腎臟組織中抗氧化酶SOD、CAT活性實現的。

作為優選,所述組織是脾臟組織;所述緩解由丙烯酰胺所致的氧化性損傷,是通過降低脾臟組織中抗氧化酶SOD、GSH-Px活性實現的。

作為優選,所述藥物還降低丙烯酰胺損傷條件下哺乳動物肝臟組織中谷草轉氨酶、谷丙轉氨酶含量。

作為優選,所述藥物還降低丙烯酰胺損傷條件下哺乳動物腎臟組織中尿素氮、肌酐含量。

作為優選,所述保護是緩解由丙烯酰胺所致的炎癥性損傷。

作為優選,所述組織是肝臟組織;所述緩解由丙烯酰胺所致的炎癥性損傷,是通過降低細胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α的表達量、同時提升細胞因子IL-10的表達量實現的。

作為優選,所述藥物的劑型是口服劑。

作為優選,所述藥物還降低丙烯酰胺損傷條件下哺乳動物肝、脾或腎臟組織中過氧化產物MDA的含量。

作為優選,所述藥物的有效計量為20mg/kg。

在以上技術方案中,所述“丙烯酰胺損傷條件下”,是指由丙烯酰胺作用于哺乳動物肝、脾或腎臟而導致其發生病理損傷的過程中。所述黑靈芝多糖是指以黑靈芝菌絲體或子實體為原料,經常規的靈芝多糖提取手段提取得到的多糖;其中所述常規提取手段,可以是以下步驟:干燥的黑靈芝子實體粉碎到適合的粒度,用95%乙醇室溫下攪拌48h脫脂,加入蒸餾水,100℃下提取2h,過濾,濃縮,過濾。濾液加入乙醇4℃下沉淀多糖(加入4倍于多糖水溶液的乙醇),醇沉后,4000×g下離心20min,Sevag法(氯仿:正丁醇=4:1)去除游離蛋白,透析,濃縮,凍干,得精多糖;當然,在以上技術思路的指引下,采用其他常規提取手段得到的黑靈芝多糖亦可用于本發明。

本發明提供了黑靈芝多糖用于制備丙烯酰胺損傷條件下哺乳動物肝、脾或腎臟組織保護藥物的應用。在該技術方案中,首先利用灌藥的方式造模,以所得的丙烯酰胺染毒模型動物為實驗對象,分別考察了口服黑靈芝多糖對其肝、脾、腎臟的干預作用。具體來看,黑靈芝多糖可顯著提升肝、脾、腎臟組織中的抗氧化酶活性,使其接近空白對照組的自然水平;同時以MDA含量評價其脂質過氧化現象亦得到明顯緩解。此外,黑靈芝多糖干預條件下因丙烯酰胺毒性所致的谷草轉氨酶、谷丙轉氨酶升高現象得到恢復;而腎臟組織中尿素氮、肌酐等含量也降低至自然水平,這表明肝功能和腎小球濾過能力得到了恢復。同時,本發明還發現黑靈芝多糖對丙烯酰胺所造成的炎癥性損傷具有確切的緩解作用,并進一步確認其藥理作用是通過下調促炎細胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α的表達量、同時上調抗炎細胞因子IL-10的表達量實現的。

基于黑靈芝多糖的以上新性質,本發明確定了利用其制備由丙烯酰胺所致肝、脾、腎臟損傷保護藥物的新用途,其療效全面優于常規的丙烯酰胺毒性損傷保護藥物N-乙酰半胱氨酸,且安全無毒副作用,具有良好的應用前景。

附圖說明

圖1是本發明具體實施方式中實驗分組情況及流程圖。

圖2黑靈芝多糖對AA染毒模型大鼠肝組織形態學變化的影響;圖中CON為空白對照組,AA為AA染毒模型組(20mg/kg濃度的AA水溶液灌胃處理組);NAC為N-乙酰半胱氨酸陽性對照組(對AA染毒模型動物以200mg/kg的N-乙酰半胱氨酸灌胃處理組)。

圖3黑靈芝多糖對AA染毒模型大鼠脾組織形態學變化的影響;圖中CON為空白對照組,AA為AA染毒模型組(20mg/kg濃度的AA水溶液灌胃造模);NAC為N-乙酰半胱氨酸陽性對照組(對AA染毒模型動物以200mg/kg的N-乙酰半胱氨酸灌胃處理組)。

圖4黑靈芝多糖對AA染毒模型大鼠腎組織形態學變化的影響;圖中CON為空白對照組,AA為AA染毒模型組(20mg/kg濃度的AA水溶液灌胃處理組);NAC為N-乙酰半胱氨酸陽性對照組(對AA染毒模型動物以200mg/kg的N-乙酰半胱氨酸灌胃處理組)。

圖5是本發明具體實施方式中不同實驗組之間肝臟組織抗氧化酶SOD、CAT、GSH-Px活性對比圖。

圖6是本發明具體實施方式中不同實驗組之間肝臟組織過氧化產物MDA含量對比圖。

圖7是本發明具體實施方式中不同實驗組之間腎臟組織抗氧化酶SOD、CAT活性對比圖。

圖8是本發明具體實施方式中不同實驗組之間腎臟組織過氧化產物MDA含量對比圖。

圖9是本發明具體實施方式中不同實驗組之間脾臟組織抗氧化酶GSH-Px、SOD活性對比圖。

圖10是本發明具體實施方式中不同實驗組之間脾臟組織過氧化產物MDA含量對比圖。

圖11是本發明具體實施方式中不同實驗組之間肝臟谷草轉氨酶、谷丙轉氨酶含量對比圖。

圖12是本發明具體實施方式中不同實驗組之間腎臟尿素氮、肌酐含量對比圖。

圖13是本發明具體實施方式中不同實驗組之間肝臟組織促炎細胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α的含量對比圖。

圖14是本發明具體實施方式中不同實驗組之間肝臟組織抗炎細胞因子IL-10的含量對比圖。

具體實施方式

以下將對本發明的具體實施方式進行詳細描述。為了避免過多不必要的細節,在以下實施例中對屬于公知的結構或功能將不進行詳細描述。

以下實施例中所使用的近似性語言可用于定量表述,表明在不改變基本功能的情況下可允許數量有一定的變動。因此,用“大約”、“左右”等語言所修正的數值不限于該準確數值本身。在一些實施例中,“大約”表示允許其修正的數值在正負百分之十(10%)的范圍內變化,比如,“大約100”表示的可以是90到110之間的任何數值。此外,在“大約第一數值到第二數值”的表述中,大約同時修正第一和第二數值兩個數值。在某些情況下,近似性語言可能與測量儀器的精度有關。

除有定義外,以下實施例中所用的技術和科學術語具有與本發明所屬領域技術人員普遍理解的相同含義。

1、材料與方法

1.1材料與試劑

黑靈芝采自江西贛州贛南靈芝基地,黑靈芝多糖由本實驗室自制,黑靈芝多糖的分離純化采用標準程序對黑靈芝多糖進行分離。干燥的黑靈芝子實體粉碎到適合的粒度,用95%乙醇室溫下攪拌48h脫脂,加入蒸餾水,100℃下提取2h,過濾,濃縮,過濾。濾液加入乙醇4℃下沉淀多糖(加入4倍于多糖水溶液的乙醇),醇沉后,4000×g下離心20min,Sevag法(氯仿:正丁醇=4:1)去除游離蛋白,透析,濃縮,凍干,得精多糖。

超氧化物歧化酶測定試劑盒(SOD)、過氧化氫酶(CAT)測定試劑盒、谷胱甘肽過氧化物酶測定試劑盒(GSH-Px)、丙二醛測定試劑盒(MDA)及BCA蛋白濃度測定試劑盒均購買于碧云天生物技術研究或者南京建成生物工程研究所。大鼠IL-6和IL-10ELISA試劑盒購自于武漢博士德公司,IL-Iβ、TNF-α、IL-6、IL-10ELISA試劑盒購自于南京建成生物工程研究所。谷草轉氨酶(AST)試劑盒、谷丙轉氨酶(ALT)試劑盒、尿素氮(BUN)試劑盒、肌酐(CR)試劑盒、均購買于南京建成生物工程研究所。

實驗動物:清潔級大鼠Sprague Dawley(SD)雄性大鼠,體重160-180g(資格證號),購自于湖南斯萊克景達實驗動物有限公司。

1.2主要儀器設備

高速臺式離心機德國Sigma公司;全波長掃描式多功能讀數儀(多功能酶標儀)美國Thermo公司;超純水儀美國Millipore公司;生化培養箱上海森信實驗儀器公司。

2、實驗方法

2.1動物實驗設計

健康成年雄性SD大鼠56只,體重(160±180)g,大鼠在12h:12h明暗循環的動物房內適應性飼養1周。然后將小鼠隨機分為7組,每組8只,灌胃給藥:1組為正常對照組,給同體積生理鹽水;2組為AA染毒模型組,AA水溶液(20mg/kg bw);3組為陽性對照組(N-乙酰半胱氨酸組,N-acetyl-L-cysteine,NAC:200mg/kg bw);4-6組為毒性抑制組,分別在染毒AA水溶液中同時添加黑靈芝多糖低劑量(50mg/kg bw)、中劑量(100mg/kg bw)、高劑量(200mg/kg bw);7組為高劑量多糖組(200mg/kg bw)。正常對照組給予等體積的生理鹽水,2-6組在給予相應藥物半小時候后,口腔灌胃AA水溶液,每天一次,連續30d,最后一次給藥24h后處死動物,進行各相關指標的測定。動物實驗流程如圖1所示。

動物實驗過程中選用的N-乙酰半胱氨酸是一種常用的抗氧化劑,N-乙酰半胱氨酸已經有大量文獻報道,能夠有效的減弱丙烯酰胺所導致的機體損傷,提高機體內的抗氧化防御能力等,因此本實驗選用N-乙酰半胱氨酸作為陽性對照組是合適的。

2.2大鼠處理及樣品的收集

大鼠處理及血清的制備:最后一次給藥24h后,用4%的水合氯醛(1ml/100g)進行麻醉,用摘眼球取血法取大鼠外周血,放置室溫待血清分層后,以4000r/min,4℃冷凍離心10min,吸取上層血清部分,4℃條件下備用。

解剖分離收集肝、脾、腎組織。并用生理鹽水清洗,放置于EP管中,放于-80℃備用。

用于制作肝、脾、腎組織切片:取適量組織,在冰冷生理鹽水中漂洗凈后,于2.5%戊二醛-多聚甲醛中固定;其余肝、脾、腎組織放置于EP管中,放于-80℃備用。

2.3肝、脾、腎組織切片材料的準備及形態學的觀察

按石蠟切片的常規制作方法:經固定-沖洗-脫水-透明-浸蠟-包埋-切片-固定-染色(脫蠟-染色-脫水)-封片-觀察記錄結果。光鏡下觀察組織形態學變化。

肝、脾、腎組織切片的制作:

(1)固定:大鼠解剖后,迅速取出肝、脾、腎組織,截取5cn左右的組織,注意不能人為損傷組織,并小心去除粘附的結締組織,將取出的肝、脾、腎組織立即投入裝有4%多聚甲醛的EP管中,固定5h后在橫切面切口,利于組織內部固定,后再固定24h。

(2)脫水:將組織依次從低濃度酒精投入到高濃度酒精。具體為85%酒精2h,95%酒精Ⅰ1.5h,95%酒精Ⅱ2h,100%酒精Ⅰ1.5h,100%酒精Ⅱ1h。

(3)透明、浸蠟:將組織置于二甲苯中25min使組織透明,后移入石蠟內,于60℃孵箱3h。

(4)包埋、切片:將石蠟加熱溶解后倒入長條紙盒內,浸蠟組織放于紙盒中央,應注意應切面朝下,位置正放,待石蠟變成固體狀;于切片機上切成3μm的切片后,放入溫水中,使切片平整無褶皺;將平整的切片小心移于載玻片上,放在40℃孵箱24h以烘干。

(5)石蠟切片脫蠟入水:將有切片的載玻片放入二甲苯Ⅰ(56℃)20min,二甲苯Ⅱ(56℃)20min,然后置于梯度酒精:100%酒精3min,95%酒精3min,85%酒精3min,70%酒精3min,自來水沖洗5min,蒸餾水漂洗5min。

(6)染色:將載玻片放入蘇木精溶液中5min,過蒸餾水;飽和碳酸鋰10~20s,自來水洗數秒;鹽酸酒精分化2~3s,自來水沖洗數秒。

(7)石蠟脫水、透明及封片:將載玻片放入梯度酒精以脫水:95%酒精Ⅰ3min,95%酒精Ⅱ3min,95%酒精Ⅲ3min,100%酒精Ⅰ3min,100%酒精Ⅱ3min,100%酒精Ⅲ3min,然后放入二甲苯以透明:二甲苯Ⅰ5min,二甲苯Ⅱ5min,二甲苯Ⅲ5min,中性樹脂膠封片。

(8)顯微鏡觀察組織病理變化。

2.4肝、脾、腎組織中氧化與損傷相關指標的測定

氧化損傷指標:超氧化物歧化酶(SOD)、過氧化氫酶(CAT)、丙二醛(MDA)和谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)活性。按試劑盒說明書上的操作步驟進行檢測和計算。

2.5肝組織中免疫指標的測定

用預冷的生理鹽水或者PBS(0.01M,pH7.0-7.4)沖洗組織,去除殘余血液,稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對應體積的PBS(一般按照1:9的重量體積比)加入組織勻漿器中,于冰上充分研磨,最后將勻漿液于4000×g離心15min,取上清檢測。上清液可分裝保存-80℃備用。免疫功能指標:IL-1β、IL-6、IL-10、TNF-α;均采用酶聯免疫吸附法(ELISA)試劑盒檢測。按照說明書上的操作步驟進行檢測和計算。

2.7肝損傷指標的測定

谷草轉氨酶(AST)試劑盒、谷丙轉氨酶(ALT)試劑盒。按說明書上的操作步驟進行檢測和計算。

2.7腎損傷指標的測定

尿素氮(BUN)試劑盒、肌酐(CR)試劑盒。按說明書上的操作步驟進行檢測和計算。

2.8統計學處理

實驗數據采用平均值±標準偏差(means±S.D)表示,組間均數比較采用SPSS 16.0統計軟件,Graph Pad Prism 6作圖,以單因素方差分析和Turkey’s多因素t檢驗進行。

3、結果與分析

3.1光鏡下觀察肝、腎、脾組織形態學變化

3.1.1黑靈芝多糖對AA染毒模型大鼠肝組織形態學變化的影響如圖2所示。

經檢測得,空白組對照組的大鼠肝組織形態正常,無異常狀態,肝小葉結構完整,無細胞破裂、自溶或壞死等。與空白組相比,AA染毒組中組織病理結果顯示肝組織出現嚴重病變。炎細胞浸潤現象嚴重,肝小葉排列素亂,而且肝細胞腫脹嚴重甚至出現成片壞死現象,胞漿稀松,肝細胞之間邊緣模糊的現象,以上病變特征表明造模實驗有效,實驗動物已處于丙烯酰胺致肝臟損傷狀態。陽性對照組(N-乙酰半胱氨酸組)和黑靈芝多糖處理組病理結果表明能夠對AA造成組織病變起到明顯的改善作用,其中黑靈芝多糖不同劑量組病理切片與模型組相比,肝組織病變情況得到很好地改善,具體表現為:肝細胞未見明顯病理癥狀,肝細胞排列正常,結構完整。結果表明黑靈芝多糖能夠有效改善AA造成肝損傷的組織損傷。

3.1.2黑靈芝多糖對AA染毒模型大鼠脾組織形態學變化的影響如圖3所示。

經檢測得,空白組對照組的大鼠脾組織形態正常,無異常狀態。與空白組相比,AA染毒組中組織病理結果顯示脾組織結構受損,出現細胞壞死癥狀,尤其是白髓中央出現壞死,脾小體萎縮的比較嚴重,以上病變特征表明造模實驗有效,實驗動物已處于丙烯酰胺致脾臟損傷狀態。陽性對照組(N-乙酰半胱氨酸組)和黑靈芝多糖處理組病理結果表明能夠對AA造成組織病變起到明顯的改善作用,其中黑靈芝多糖低高劑量組(50、200mg/kg body weight)病理切片與模型組相比,脾組織病變情況得到很好地改善。組織結構較完整,細胞形態無明顯變異。

3.1.3黑靈芝多糖對AA染毒模型大鼠腎組織形態學變化的影響如圖4所示。

經檢測得,空白組對照組可觀察到腎組織結構完整,腎小管及腎小球的結構清楚、正常及腫脹壞死脫落的上皮細胞,無異常狀態。與空白組相比,AA染毒組中組織病理結果顯示大鼠腎臟組織可觀察到典型的腎損傷,如腎小管擴張、小管上皮細胞崩潰脫落、細胞排列絮亂,以上病變特征表明造模實驗有效,實驗動物已處于丙烯酰胺致腎臟損傷狀態。陽性對照組(N-乙酰半胱氨酸組)和黑靈芝多糖處理組病理結果表明能夠對AA造成組織病變起到明顯的改善作用,腎臟損傷程度有所減輕,能夠降低腎小管上皮細胞的空泡數量及壞死明顯改善,細胞排列整齊,腎小球和腎小管基本能夠維持正常結構。

3.2黑靈芝多糖對AA染毒模型大鼠肝、腎、脾臟組織抗氧化酶活性(SOD、GSH-Px、CAT)和過氧化產物MDA含量的影響

黑靈芝多糖對AA染毒模型大鼠肝組織抗氧化酶活性(SOD、CAT、GSH-Px)的影響如圖5所示。

經檢測得,陽性對照組(N-乙酰半胱氨酸組)和黑靈芝多糖處理組結果比較得出,肝SOD、CAT、GSH-Px顯著性差異,與染毒模型組相比,陽性對照組和黑靈芝多糖處理組中SOD、CAT、GSH-Px的活力均有所升高,與染毒組相比,具有明顯的顯著性差異。而黑靈芝多糖單獨處理組(200mg/kg body weight)中抗氧化物酶:SOD、CAT、GSH-Px與正常組相比,無明顯的顯著性差異,可以說明,黑靈芝多糖單獨處理時,對機體內的抗氧化防御系統無損傷、對機體無毒害作用。

不同實驗組中肝臟組織過氧化產物MDA含量的對比情況見圖6。

結果發現,丙烯酰胺染毒組中,過氧化產物MDA的含量明顯高于正常對照組,且具有顯著性的差異,從陽性對照組(N-乙酰半胱氨酸組)和黑靈芝多糖處理組的結果發現,不同濃度的黑靈芝多糖均能夠明顯降低機體內MDA的含量,隨著黑靈芝多糖濃度的升高,機體內MDA含量逐漸降低,具有濃度依賴性。

黑靈芝多糖對AA染毒模型大鼠腎臟組織抗氧化酶活性(SOD、CAT)的影響如圖7所示。不同實驗組中腎臟組織過氧化產物MDA含量的對比情況見圖8。

黑靈芝多糖對AA染毒模型大鼠脾臟組織抗氧化酶活性(SOD、GSH-Px)的影響如圖9所示。不同實驗組中脾臟組織過氧化產物MDA含量的對比情況見圖10。

結果發現,與其在肝臟組織中實驗結果相類似,黑靈芝多糖可顯著提升模型動物腎臟、脾臟中抗氧化酶的活性,同時降低其過氧化產物MDA的含量。

3.3黑靈芝多糖對AA染毒模型大鼠肝組織中谷草轉氨酶(AST)、谷丙轉氨酶(ALT)含量的影響

黑靈芝多糖對肝組織中谷草轉氨酶(AST)、谷丙轉氨酶(ALT)含量的影響如圖11所示。與染毒模型組相比,陽性對照組和不同濃度的黑靈芝多糖保護組檢測得AST、ALT含量均明顯的降低。

3.4黑靈芝多糖對AA染毒模型大鼠腎組織中尿素氮(BUN)、肌酐(CR)含量的影響

黑靈芝多糖對AA染毒模型大鼠腎組織尿素氮(BUN)、肌酐(CR)含量的影響如圖12所示。與染毒模型組相比,陽性對照組和不同濃度的黑靈芝多糖保護組檢測得BUN、CR含量均明顯的降低,具有顯著性差異。同時,從圖中可以發現,低濃度黑靈芝多糖組中BUN、CR的含量最低。

3.5黑靈芝多糖對AA染毒模型大鼠肝組織免疫因子的影響

黑靈芝多糖對AA染毒模型大鼠肝組織中促炎因子IL-1β、IL-6、TNF-α含量的影響如圖13所示。與染毒模型組相比,黑靈芝多糖對體內炎癥因子具有下調作用,使用不同濃度黑靈芝多糖處理的實驗組大鼠其體內肝組織中促炎細胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α含量均有所降低,尤其是對促炎細胞因子IL-1β、TNF-α的作用顯著。從圖13結果可以發現,口服不同濃度的黑靈芝多糖均可以有效的緩解丙烯酰胺所導致的炎癥臨床癥狀,黑靈芝多糖能夠抑制丙烯酰胺誘導的大鼠肝組織中促炎細胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α的表達,對其細胞因子的分泌的一直作用均具有顯著性。

黑靈芝多糖對AA染毒模型大鼠肝組織中抗炎因子IL-10含量的影響如圖14所示。黑靈芝多糖能夠抑制丙烯酰胺誘導的大鼠肝臟組織中抗炎細胞因子IL-10的表達,對其細胞因子的分泌的一直作用均具有顯著性。能夠上調抗炎細胞因子IL-10的表達。

4、實驗結論

黑靈芝多糖可顯著提升肝、脾、腎臟組織中的抗氧化酶活性,使其接近空白對照組的自然水平;同時以MDA含量評價其脂質過氧化現象亦得到明顯緩解。此外,黑靈芝多糖干預條件下因丙烯酰胺毒性所致的谷草轉氨酶、谷丙轉氨酶升高現象得到恢復;而腎臟組織中尿素氮、肌酐等含量也降低至自然水平,這表明肝功能和腎小球濾過能力得到了恢復。同時,本發明還發現黑靈芝多糖對丙烯酰胺所造成的炎癥性損傷具有確切的緩解作用,并進一步確認其藥理作用是通過下調促炎細胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α的表達量、同時上調抗炎細胞因子IL-10的表達量實現的。基于以上藥理作用,可利用黑靈芝多糖以口服給藥的方式對由丙烯酰胺所造成的肝、脾、腎臟損傷實現治療作用。

以上對本發明的實施例進行了詳細說明,但所述內容僅為本發明的較佳實施例,并不用以限制本發明。凡在本發明的申請范圍內所做的任何修改、等同替換和改進等,均應包含在本發明的保護范圍之內。

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本文標題:黑靈芝多糖用于制備丙烯酰胺損傷條件下哺乳動物肝、脾或腎臟組織保護藥物的應用.pdf
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