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一種抑制口腔致病菌的口腔噴霧劑及其應用.pdf

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一種 抑制 口腔 致病菌 噴霧 及其 應用
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摘要
申請專利號:

CN201710854115.0

申請日:

20170915

公開號:

CN107714649A

公開日:

20180223

當前法律狀態:

有效性:

審查中

法律詳情:
IPC分類號: A61K9/12,A61K47/38,A61K47/36,A61K47/44,A61K31/715,A61P31/04,A61P31/02,A61P1/02,A23L33/125,A23L33/15,A23L33/16,A23L33/12,C08B37/00 主分類號: A61K9/12,A61K47/38,A61K47/36,A61K47/44,A61K31/715,A61P31/04,A61P31/02,A61P1/02,A23L33/125,A23L33/15,A23L33/16,A23L33/12,C08B37/00
申請人: 劉銳
發明人: 劉銳
地址: 200065 上海市普陀區宜川路街道宜川六村71號604室
優先權: CN201710854115A
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法律狀態
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CN201710854115.0

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摘要

本發明涉及一種抑制口腔致病菌的口腔噴霧劑及其應用,所述的口腔噴霧劑含有以下重量百分比的組分:葉用萵苣多糖5%~10%,碳酸氫鈉1%~2%,苯甲酸鈉1%?2.5%,維生素C?1%?2.5%,薄荷油和檸檬油共5%?10%,羥丙基甲基纖維素、透明質酸和黃原膠共3%?6%,余量為水。經細菌涂敷噴涂實驗,顯示本發明的口腔噴霧劑能夠顯著抑制變異鏈球菌和遠緣鏈球菌的活性,表明該口腔噴霧劑能夠有效附著牙齒介質,發揮抑制口腔疾病致病菌的作用。

權利要求書

1.一種抑制口腔致病菌的口腔噴霧劑,其特征在于,所述的口腔噴霧劑含有以下重量百分比的組分:葉用萵苣多糖5%~10%,碳酸氫鈉1%~2%,苯甲酸鈉1%-2.5%,維生素C1%-2.5%,薄荷油和檸檬油共5%-10%,羥丙基甲基纖維素、透明質酸和黃原膠共3%-6%,余量為水;所述的葉用萵苣多糖其提取方法為:1)將葉用萵苣的葉片充分干燥粉碎,過60-80目篩;2)向葉用萵苣粉末加入30-60%乙醇回流提取1-2h,料液比為1:5-8,然后除去乙醇,于40-50℃恒溫干燥箱中烘干;3)將烘干后的葉用萵苣粉末加入到0.5-1%的醋酸水溶液中進行微波提取,料液比為1:5-8,功率300-400W,單次提取時間20-30s,提取次數2-3次,間隔5-10min;4)合并提取液,在40-50℃下旋轉蒸發濃縮至原體積的1/4-1/2,靜置過濾,向濾液中加入含15-20%硫酸鈉的體積分數30-60%的乙醇溶液,于40-50℃下振蕩1-2h,靜置,收集硫酸鈉相;5)向收集的硫酸鈉相中加入2-4倍體積的無水乙醇溶液沉淀多糖,于40-50℃下振蕩1-2h,靜置12-24h,5000-8000r/min離心5-10min,收集沉淀;6)再加入無水乙醇洗滌沉淀2次,于40-50℃恒溫干燥箱中烘干至恒重。2.根據權利要求1所述的口腔噴霧劑,其特征在于,所述的薄荷油和檸檬油比例為0.8-1.2。3.根據權利要求2所述的口腔噴霧劑,其特征在于,所述的薄荷油和檸檬油比例為1。4.根據權利要求1所述的口腔噴霧劑,其特征在于,所述的羥丙基甲基纖維素、透明質酸和黃原膠的比例為1:3:2。5.權利要求1-4任一權利要求所述的口腔噴霧劑的制備方法,其特征在于,包括以下步驟:提取葉用萵苣多糖,與碳酸氫鈉、苯甲酸鈉、維生素C和透明質酸共同溶解于水中,攪拌,待溶解充分后,加入薄荷油、檸檬油、羥丙基甲基纖維素和黃原膠,水浴加熱攪拌,加熱過程中補足水,直至所有成分完全溶解,趁熱過濾除菌。6.根據權利要求5所述的制備方法,其特征在于,所述水浴加熱的溫度為40-50℃。7.根據權利要求5所述的制備方法,其特征在于,所述過濾除菌使用的濾膜孔徑為0.22μm。8.權利要求1-4任一權利要求所述的口腔噴霧劑在制備防治口腔疾病的藥物或保健品中的應用。9.權利要求1-4任一權利要求所述的口腔噴霧劑在制備防治口腔致病菌的藥物或保健品中的應用。10.根據權利要求9所述的應用,其特征在于,所述的口腔致病菌是變異鏈球菌或遠緣鏈球菌。

說明書

技術領域

本發明涉及防治口腔疾病的藥物和保健品,具體地說,涉及一種抑制口腔致病菌的口腔噴霧劑及其應用。

背景技術

口腔疾病是一類發病率很高的疾病總稱,常見的有齲齒、口腔異味、牙痛、牙齦出血等。人的口腔中存在大量微生物,有致病菌、非致病菌和條件致病菌,具體種類相當繁雜。常見的細菌有葡萄球菌、鏈球菌、涎鏈球菌、奈瑟氏菌、范永氏球菌、棒狀桿菌、以色列放線菌、痰螺旋菌、痰弧菌屬、色柔氏螺旋體等,最主要的是鏈球菌、葡萄球菌和乳酸桿菌。口腔中有弱堿性唾液、食物殘渣等,為菌群的繁殖提供了合適條件。口腔中致病菌的存在和大量繁殖是導致大多數口腔疾病的重要原因。如厭氧鏈球菌中有一種變異鏈球菌,該菌能分解食物中的蔗糖產生高分子量、粘度大的不溶性葡聚糖,以致將口腔中其它菌群粘附于牙齒表面而形成菌斑,最終導致齲齒。

口香糖、口腔噴霧劑及漱口水是目前生活中常見的口腔保健品,能夠在一定程度上達到清新口氣、預防齲齒的效果。口腔噴霧劑便于攜帶,使用方便,不會產生廢棄物,在空氣中形成霧狀進入口腔,可以作用到口腔的各個部位,如上腭、咽喉部等處。專利文獻CN106511471A,公開了一種無花果口腔噴霧劑及其制備方法,該無花果口腔噴霧劑以1000mL計,由以下組分組成:無花果果實提取物凍干粉50g-150g、防腐劑2g-6g、吸收促進劑40g-80g和余量為去離子水,所述的吸收促進劑由風輪草皂苷和膽酸鹽組成,該無花果口腔噴霧劑,具有抑菌、消炎、止血、潤喉、脫臭等多種功效。專利文獻CN102198065A,公開了一種口腔噴霧劑及其制備方法,采用濃縮提煉的方式,先將羅漢果、金銀花、甘草、野菊花、薄荷和淡竹葉采用濃縮提取的方式,制備植物混合提取物,然后再與甜菊、柿子等其他組分混合制備口腔噴霧劑,該發明的口腔噴霧劑為一種全新植物配方,可滋潤口腔,令口氣清新,減輕口腔異味,無酒精等添加劑,無毒副作用。

葉用萵苣(var.ramosaHort.),俗稱生菜,屬菊科萵苣屬,為一年生或二年生草本,是日常餐桌常見綠葉菜之一。具有清熱安神、清肝利膽和養胃的功效,所含的萵苣素能夠陣痛催眠、降低膽固醇和輔助治療神經衰弱,甘露醇等成分能夠利尿和促進血液循環。

目前還未見提取葉用萵苣多糖,并用于制成口腔噴霧劑,有效防治口腔疾病的報道。

發明內容

本發明利用微波提取的方法從葉用萵苣中提取得到葉用萵苣多糖,將其與促進多糖溶解和粘附的組分組配成噴霧劑,進一步驗證了該噴霧劑防治口腔致病菌的效果,在此基礎上完成了本發明。

本發明提供了一種抑制口腔致病菌的口腔噴霧劑,所述的口腔噴霧劑含有以下重量百分比的組分:葉用萵苣多糖5%~10%,碳酸氫鈉1%~2%,苯甲酸鈉1%-2.5%,維生素C 1%-2.5%,薄荷油和檸檬油共5%-10%,羥丙基甲基纖維素、透明質酸和黃原膠共3%-6%,余量為水;所述的葉用萵苣多糖其提取方法為:

1)將葉用萵苣的葉片充分干燥粉碎,過60-80目篩;

2)向葉用萵苣粉末加入30-60%乙醇回流提取1-2h,料液比為1:5-8,然后除去乙醇,于40-50℃恒溫干燥箱中烘干;

3)將烘干后的葉用萵苣粉末加入到0.5-1%的醋酸水溶液中進行微波提取,料液比為1:5-8,功率300-400W,單次提取時間20-30s,提取次數2-3次,間隔5-10min;

4)合并提取液,在40-50℃下旋轉蒸發濃縮至原體積的1/4-1/2,靜置過濾,向濾液中加入含15-20%硫酸鈉的體積分數30-60%的乙醇溶液,于40-50℃下振蕩1-2h,靜置,收集硫酸鈉相;

5)向收集的硫酸鈉相中加入2-4倍體積的無水乙醇溶液沉淀多糖,于40-50℃下振蕩1-2h,靜置12-24h,5000-8000r/min離心5-10min,收集沉淀;

6)再加入無水乙醇洗滌沉淀2次,于40-50℃恒溫干燥箱中烘干至恒重。

所述的薄荷油和檸檬油比例為0.8-1.2。

所述的薄荷油和檸檬油比例為1。

所述的羥丙基甲基纖維素、透明質酸和黃原膠的比例為1:3:2。

本發明還提供了所述的口腔噴霧劑的制備方法,包括以下步驟:提取葉用萵苣多糖,與碳酸氫鈉、苯甲酸鈉、維生素C和透明質酸共同溶解于水中,攪拌,待溶解充分后,加入薄荷油、檸檬油、羥丙基甲基纖維素和黃原膠,水浴加熱攪拌,加熱過程中補足水,直至所有成分完全溶解,趁熱過濾除菌。

所述水浴加熱的溫度為40-50℃。

所述過濾除菌使用的濾膜孔徑為0.22μm。

本發明還提供了所述的口腔噴霧劑在制備防治口腔疾病的藥物或保健品中的應用。

本發明還提供了所述的口腔噴霧劑在制備防治口腔致病菌的藥物或保健品中的應用。

所述的口腔致病菌是變異鏈球菌或遠緣鏈球菌。

本發明的有益效果在于:

1、本發明利用微波提取的方法從葉用萵苣中提取得到葉用萵苣多糖,將其作為活性成分制成口腔噴霧劑,經用雞蛋殼模擬牙齒進行細菌涂敷噴涂實驗,顯示本發明的口腔噴霧劑能夠顯著抑制變異鏈球菌和遠緣鏈球菌的活性,表明該口腔噴霧劑能夠有效附著牙齒介質,發揮抑制口腔疾病致病菌的作用。

2、本發明的噴霧劑選用了羥丙基甲基纖維素、透明質酸和黃原膠成分,能夠顯著提高抑菌成分的附著力。

3、本發明噴霧劑在添加了檸檬油后,顯示出抑菌效果的提高,這可能與檸檬油促進了噴霧劑中各成分溶解和在介質表明的附著力有關。

4、本發明噴霧劑的原料組成簡單,便于生產制備。

5、本發明噴霧劑的原料均無毒副作用,安全性好。

6、本發明制備的為噴霧劑型口腔藥物或保健品,使用方便,不產生廢棄物。

具體實施方式

下面通過具體實施例對本發明作進一步的詳細說明。

實施例1

1實驗材料

葉用萵苣品種前衛75,雞蛋:購于菜市。

試劑:碳酸氫鈉、苯甲酸鈉、羥丙基甲基纖維素、透明質酸、黃原膠,購于國藥集團化學試劑有限公司;維生素C,購于南京化學試劑股份有限公司;薄荷油、檸檬油,購于上海江萊生物科技有限公司。

設備:DU-640紫外/可見分光光度計:美國貝克曼公司;AUW320分析天平:日本島津;MA-2270EGC海爾微波爐:青島海爾微波制品有限公司;FW100型高速粉碎機:北京中興偉業儀器有限公司;RE52CS旋轉蒸發儀:上海亞榮生化儀器廠;DZF真空干燥箱:上海海向儀器設備廠;800型臺式離心機:上海手術儀器廠。

菌株:變異鏈球菌CGMCC12500,購于中國普通微生物菌種保藏管理中心;遠緣鏈球菌ATCC27351,購于北京北納創聯生物技術研究院。

培養基:TPY培養基、BHI培養基,購于青島海博生物技術有限公司。

2試驗方法

2.1口腔噴霧劑的配制

1)取新鮮葉用萵苣的葉片,于45℃恒溫干燥箱內充分干燥,粉碎機粉碎,過80目篩;

2)向葉用萵苣粉末加入50%乙醇回流提取1.5h,料液比1:6,然后除去乙醇,于45℃恒溫干燥箱中烘干;

3)將烘干后的葉用萵苣粉末加入到0.8%的醋酸水溶液中進行微波提取,料液比1:6,功率350W,單次提取時間25s,提取次數2次,間隔10min;

4)合并提取液,在45℃下旋轉蒸發濃縮至原體積的1/2,靜置過濾,向濾液中加入含15%硫酸鈉的體積分數50%的乙醇溶液,于45℃下振蕩1.5h,靜置,收集硫酸鈉相;

5)向收集的硫酸鈉相中加入3倍體積的無水乙醇溶液沉淀多糖,于45℃下振蕩1.5h,靜置18h,6000r/min離心8min,收集沉淀;

6)再加入無水乙醇洗滌沉淀2次,于45℃恒溫干燥箱中烘干至恒重;

7)按照表1中各成分的用量,配制不同組分組成的口腔噴霧劑。制備方法:稱取提取葉用萵苣多糖至干凈燒杯中,加入碳酸氫鈉、苯甲酸鈉、維生素C、透明質酸和適量純水,不斷攪拌,至所有成分溶解充分后,加入薄荷油、檸檬油、羥丙基甲基纖維素(或羧甲基纖維素鈉)和黃原膠,于45℃水浴鍋中加熱攪拌,加熱過程中補足水至100ml,直至所有成分完全溶解,趁熱用0.22μm孔徑的濾膜除菌器過濾除菌。

表1口腔噴霧劑的組分組成

2.2口腔噴霧劑的抑菌試驗

2.2.1菌懸液制備

變異鏈球菌接種于TPY培養基,遠緣鏈球菌接種于BHI培養基,厭氧培養18h,挑取瓊脂表面的單個菌落混懸于相應液體培養基中培養,至菌液濃度1*105CFU/mL,將菌液等體積混合,即細菌原液。

2.2.2細菌涂布及消毒

用微量移液器吸取2ml菌液,用未脫脂無菌棉簽蘸取細菌懸液在經煮沸徹底消毒且無炸裂的雞蛋表面均勻涂抹直至菌液被涂完,隨后不同組別分別使用以上噴霧劑1-8噴霧消毒,噴嘴距雞蛋表面10cm左右,以每秒1次的頻率,將單個雞蛋分4個方向正面噴涂,單面噴涂2次,控制噴涂壓力一致。以不含葉用萵苣多糖制備的噴霧劑作為陽性對照,該陽性對照噴霧劑中其他各組分及含量與噴霧劑1的相同。每組做三個平行實驗。

2.2.3細菌取樣培養

噴涂10min后取樣,每個雞蛋加注100ml無菌生理鹽水,用振蕩器以恒定低功率慢速振蕩1min,再用微量移液器吸取10μl液體,接種于培養平板,厭氧培養48h后,進行CFU計數,計算抑菌率。抑菌率計算公式為:[(陽性對照組菌落數—處理組菌落數)/陽性對照組菌落數]*100%。

2.2.4統計分析

采用SPSS13.0軟件進行單因素方差分析,p<0.05為差異具有統計學意義。3實驗結果

對以上噴霧劑1-8噴涂后10min取樣進行CFU計數,統計結果見表2-3。分析結果發現,噴霧劑1-4對變異鏈球菌和遠緣鏈球菌表現出顯著的抑制作用,抑菌率達到70.0%及以上。噴霧劑5-8的抑菌率明顯低于噴霧劑1-4的的抑菌率,與噴霧劑1-4的抑菌率兩兩比較,差異均具有統計學意義(p<0.05)。實驗表明噴霧劑中黏附劑的選擇對于抑菌效果來說具有顯著的影響,同時,添加檸檬油可顯著提高抑菌效果。

表2各口腔噴霧劑處理的CFU計數結果

組別 菌落數(CFU/ml) 抑菌率(%) 噴霧劑1 78±13 79.8 噴霧劑2 101±25 73.9 噴霧劑3 116±32 70.0 噴霧劑4 96±27 75.2 噴霧劑5 203±35 47.5 噴霧劑6 186±40 51.9 噴霧劑7 189±36 51.2 噴霧劑8 214±33 44.7 陽性對照 387±58 -

*變異鏈球菌。

表3各口腔噴霧劑處理的CFU計數結果

組別 菌落數(CFU/ml) 抑菌率(%) 噴霧劑1 99±13 84.8 噴霧劑2 146±25 77.6 噴霧劑3 160±32 75.4 噴霧劑4 123±27 81.1 噴霧劑4 317±35 51.3 噴霧劑5 224±40 65.6 噴霧劑6 215±36 68.0 噴霧劑4 293±33 55.0 陽性對照 651±58 -

*遠緣鏈球菌。

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