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一種用于尿多酸肽制備工藝的病毒滅活的方法.pdf

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一種 用于 尿多酸肽 制備 工藝 病毒 方法
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摘要
申請專利號:

CN201710911624.2

申請日:

20170929

公開號:

CN107693543A

公開日:

20180216

當前法律狀態:

有效性:

審查中

法律詳情:
IPC分類號: A61K35/22,A61L2/18,A61L101/06 主分類號: A61K35/22,A61L2/18,A61L101/06
申請人: 泰凌生物制藥江蘇有限公司
發明人: 張磊
地址: 225300 江蘇省蘇州市藥城大道825號
優先權: CN201710911624A
專利代理機構: 北京同恒源知識產權代理有限公司 代理人: 劉憲池
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法律狀態
申請(專利)號:

CN201710911624.2

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法律狀態公告日:

法律狀態類型:

摘要

本發明公開了一種用于尿多酸肽制備工藝的病毒滅活的方法,其特征在于,包括以下步驟:a.收集尿液;b.在收集的尿液中加入pH調節劑;c.pH值調節至生產工藝要求2.0?4.0;d.選擇對病毒滅活較差的pH條件下,將所述尿液調整其pH4.0±0.1,在4℃和25℃保溫24h,進行兩種不同溫度條件下的低pH值病毒滅活。本發明通過控制原料尿液的低pH值殺滅病毒的方法簡便可行,降低原料尿液中的病原微生物的污染,減少尿多酸肽制品中病毒感染的風險。

權利要求書

1.一種用于尿多酸肽制備工藝的病毒滅活的方法,其特征在于,包括以下步驟:a.收集尿液;b.在收集的尿液中加入pH調節劑;c.PH值調節至生產工藝要2.0-4.0;d.選擇對病毒滅活較差的pH條件下,將所述尿液調整其pH值為4.0±0.1,在4℃和25℃保溫24h,進行上述兩種不同溫度條件下的低pH值病毒滅活。2.根據權利要求1所述用于尿多酸肽制備工藝的病毒滅活的方法,其特征在于:所述步驟a中尿液為男性尿液。3.根據權利要求2所述用于尿多酸肽制備工藝的病毒滅活的方法,其特征在于:所述步驟b中pH調節劑為鹽酸。

說明書

技術領域

本發明屬于尿多酸肽制備工藝技術領域,具體涉及一種用于尿多酸肽制備過程中原料尿液中進行病毒滅活的方法。

背景技術

人尿液中含有無機鹽、尿素、尿素、肌酐、氨基酸、蛋白質、有機化合物等多種成分,是人體的代謝產物。從人體尿液中提取并純化的制得有尿多酸肽、尿激酶、烏司他丁、絨促性素、尿促性素等產品。

尿多酸肽是從男性尿液中提取純化制得的含多種有機酸和分子量小于6000D多肽等組成,其主要成分由馬尿酸、苯乙酰谷氨酰胺和多肽等,其性狀為深棕色澄明液體,具有特殊臭味。尿多酸肽是從男性尿液中提取的有效成分,是屬于多組分生化藥品,國家食品藥品監督管理總局不斷關注生化藥品的安全性,出臺了《生物組織提取制品和真核細胞表達制品的病毒安全性評價技術審評一般原則》、《血液制品去除/滅活病毒技術方法及驗證指導原則》和《多組分生化藥注射劑基本技術要求》一系列安全要求,尿多酸肽在制備的過程中應有特定的去除或者滅活病毒的方法。目前關于病毒滅活的傳統的方法有并不包括如下幾種。

巴斯德消毒法(60℃10小時):此法的理論依據主要是通過對溫度與時間的選擇,使病毒結構的破壞速率遠遠大于蛋白質結構的破壞速率。液態加熱60℃,處理10h,可有效地滅活產品中各種病毒。

干熱滅活法(80℃72h或100℃30min):其原理與巴斯德消毒法原理一樣。S/D處理法(1%Ttitonx100+0.3%TNBP 4小時以上或1%Ttiton80+0.3%TNBP 24℃ 6小時以上):其原理是有機溶劑可使類脂從病毒表面脫落,使病毒結構被破壞從而失去感染活性。

膜過濾法:納米膜過濾病毒去除技術是使用15-45nm之間的濾膜對產品進行過濾,利用篩分原理,在納米膜過濾中,大于濾膜孔徑的病毒或其他的病原體被截留在薄膜上,尺寸較小的蛋白產品則能通過濾膜繼續存留在產品中。

照射法:通過阿爾法射線和紫外線照射處理。這種物理方法處理多組分生化藥制品不會殘留有現在危害的物質于制品中。

所述的幾種滅活方法,并不適用于尿多酸肽肽生產過程中的原料尿液病毒滅活的方法。

專利申請99122050.1公開了一種尿多酸肽組合物的制備方法,將新鮮尿酸化,過濾除去酸化尿中的大顆粒;超濾除去酸化尿中分子量較大的有機物質,將超濾后的酸化尿加入吸附柱內,吸附其中的有效成分;用軟水洗滌未被吸附劑吸附但殘留在吸附劑中的無機物及親水性有機物用醇洗脫吸附在吸附柱上的有效成分;收集有色流出液,濃縮后,干燥得到干品;加水溶解,用堿調整pH至中性,低溫靜置析出濃縮過程中形成的雜質,經除熱源、除病毒等工藝進一步純化。

專利申請200410000753.9公開了一種制備方法:將新鮮人尿經酸化、過濾,樹脂柱吸附,洗化。脫后,經低pH值乙醇滅活,再減壓濃縮,過濾得到尿多酸肽組合物。

上述專利公開了尿多酸肽的制備過程,但對制備過程中原料男性尿液的病毒滅活技術沒有具體的研究與公開。

目前還尚未發現有關尿多酸肽在制備過程中原料尿液的有關病毒滅活技術的應用和報道。。

發明內容

本發明的目的是提供一種用于尿多酸肽制備工藝的病毒滅活的方法,解決了尿多酸肽生產過程中原料的病毒滅活的問題,降低了尿源中病毒感染的風險,并保證了病毒滅活的效果。

為實現上述發明目的,本發明采用了如下技術方案:

一種用于尿多酸肽制備工藝的病毒滅活的方法,其特征在于,包括以下步驟:

a.收集尿液;

b.在收集的尿液中加入pH調節劑;

c.PH值調節至生產工藝2.0-4.0;

d.選擇對病毒滅活較差的pH條件下,將所述尿液調整其pH值為4.0±0.1,

在4℃和25℃保溫24h,進行兩種不同溫度條件下的低pH值病毒滅活。

優選的,所述步驟a中尿液為男性尿液。

優選的,所述步驟b中pH調節劑為鹽酸。

本發明經蘇州良辰生物醫藥科技有限公司(編號:LCJS/BG201605-TLSW-001)檢定,添加偽狂犬病毒(PRV)、新德畢氏病毒(Sindbis)進行驗證,滅活效果顯著。

發明優點:

本發明通過控制原料尿液的低pH值殺滅病毒的方法簡便可行,降低原料尿液中的病原微生物的污染,減少尿多酸肽制品中病毒感染的風險。

附圖說明

圖1為低pH(pH4.0±0.1)值在溫度4℃條件下PRV滴度曲線圖

圖2為低pH(pH4.0±0.1)值在溫度25℃條件下PRV滴度曲線圖

圖3為低pH(pH4.0±0.1)值在溫度4℃條件下Sindbis滴度曲線圖

圖4為低pH(pH4.0±0.1)值在溫度25℃條件下Sindbis滴度曲線圖

具體實施方式

以下結合優選實施例對本發明的技術方案作進一步的說明,

采用本發明所述方法進行病毒滅活并驗證的具體實施步驟:收集男性尿液,分別加入偽狂犬病毒(PRV)、新德畢氏病毒(Sindbis),用2M鹽酸調節pH值至4.0±0.1(選擇對病毒滅活較差的pH4.0條件),分別在于4℃和25℃保溫,分別在零點、1h、2h、4h、8h、12h、18h和24h取樣測定病毒滴度。

在低pH值(Ph4.0±0.1),4℃和25℃條件下的PRV、Sindbis兩種指示病毒滴度平均下降值見下表1-4。

表1 低pH(pH4.0±0.1)4℃條件下三批次樣品中PRV滴度平均下降值

表2 低pH(pH4.0±0.1)25℃條件下三批次樣品中PRV滴度平均下降值

表3 低pH(pH4.0±0.1)4℃條件下三批次樣品中Sindbis滴度平均下降值

表4 低pH(pH4.0±0.1)25℃條件下三批次樣品中Sindbis滴度平均下降值

三批次低pH值樣品中2種指示病毒總體平均下降值見表5

表5 三批次低pH值樣品中2種指示病毒總體平均下降值

從表1到表5可以表明:

低pH(pH4.0±0.1)在4℃和25℃分別處理1h,PRV滴度均降至檢測限以下,滴度總體水平下降值≥4.0Logs。

低pH(pH4.0±0.1)在4℃處理24h,Sindbis滴度均下降5.33Logs,25℃處理4h,Sindbis滴度均降至檢測限以下,滴度總體水平下降值≥5.0Logs。

三批次樣品低pH處理后在模擬溫度4℃和25℃條件下的病毒滴度變化曲線見圖1~4

從圖1到圖4,三批次樣品低pH(pH4.0±0.1)值滅活動力曲線可以表明:

低pH(pH4.0±0.1)在4℃和25℃分別處理1h均能滅活PRV病毒滴度均降至檢測限以下,滴度總體水平下降值≥4.0Logs。

低pH(pH4.0±0.1)在4℃處理24h,能滅活Sindbis病毒,滴度均下降5.33Logs,25℃處理4h能滅活Sindbis滴度均降至檢測限以下。

在尿液中分別加入偽狂犬病毒(PRV)、新德畢氏病毒(Sindbis),低pH(Ph4.0±0.1)在4℃和25℃溫度下分別處理1h,PRV滴度均降至檢測限以下,滴度總體平均下降值均為≥4.0logs;低pH在4℃條件下處理12h-24h,Sindbis滴度總體平均下降值為4.67~5.33logs;在25℃處理4h,Sindbis滴度降至檢測限以下,滴度總體平均下降值≥5.0logs。

尿多酸肽制備過程中原料尿液的病毒滅活,采用的是生產工藝條件中對病毒滅活效果最差的條件,不是最優的具體實施方式。在其尿多酸肽制備工藝中原料尿液病毒滅活工藝pH值2.0-4.0;常溫,24h,在實施范圍內,其病毒滅活均有效。

需要指出的是,以上所述者僅為用以解釋本發明之較佳實施例,并非企圖據以對本發明作任何形式上之限制,是以,凡有在相同之發明精神下所作有關本發明之任何修飾或變更,皆仍應包括在本發明意圖保護之范疇。

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