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風信子離體快速繁殖方法.pdf

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風信子 快速 繁殖 方法
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摘要
申請專利號:

CN201110404105.X

申請日:

20111207

公開號:

CN102511391B

公開日:

20131120

當前法律狀態:

有效性:

失效

法律詳情:
IPC分類號: A01H4/00 主分類號: A01H4/00
申請人: 上海交通大學
發明人: 馬曉紅,史益敏,董易,程鵬
地址: 200240 上海市閔行區東川路800號
優先權: CN201110404105A
專利代理機構: 上海漢聲知識產權代理有限公司 代理人: 郭國中
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法律狀態
申請(專利)號:

CN201110404105.X

授權公告號:

法律狀態公告日:

法律狀態類型:

摘要

本發明涉及一種生物技術領域內的風信子離體快速繁殖方法,所述方法包括如下步驟:(a)取露地種植2~3個月的風信子種球,消毒,剝除外層鱗片;(b)剝取小花花瓣,平放在MS固體培養基上進行不定芽的誘導生長培養,獲得帶有不定芽叢的組織塊;(c)縱分組織塊,在芽伸長培養基上進行芽伸長培養;(d)不定芽伸長至2~4cm時,切分后放入生根培養基中進行誘導生根培養,獲得風信子幼苗。本發明的方法利用風信子的幼嫩小花瓣片為外植體,直接再生大量不定芽,繼而得到再生苗,與使用鱗片作為外植體進行組織培養相比,本發明的方法再生效率增高,出芽率達到100%左右,平均每個外植體誘導再生的芽數量可達20個左右。

權利要求書

1.一種風信子離體快速繁殖方法,其特征在于,包括如下步驟:?(a)取露地種植2~3個月的風信子種球,消毒,剝除外層鱗片;(b)剝取小花花瓣,平放在MS固體培養基上進行不定芽的誘導生長培養,獲得帶有不定芽叢的組織塊;(c)縱分組織塊,在芽伸長培養基上進行芽伸長培養;(d)不定芽伸長至2~4cm時,切分后放入生根培養基中進行誘導生根培養,獲得風信子幼苗;步驟(b)中,所述MS固體培養基為MS?+?BA?2.0mg/L?+?NAA?1.0mg/L,pH?5.8,蔗糖30g/L,瓊脂5g/L;步驟(c)中,所述芽伸長培養基為MS?+?BA0.5mg/L?+?NAA1.0mg/L,pH5.8,蔗糖30g/L,瓊脂5g/L;步驟(d)中,所述生根培養基為:MS?+?NAA0.5mg/L+活性炭1.0g/L,pH?5.8,蔗糖30g/L,瓊脂5g/L。2.如權利要求1所述的風信子離體快速繁殖方法,其特征在在于,步驟(b)中,所述誘導生長培養的條件為:溫度25℃,光照:16光期/8暗期。3.如權利要求1所述的風信子離體快速繁殖方法,其特征在在于,步驟(c)中,所述芽伸長培養的條件為:溫度25℃,光照:16光期/8暗期。4.如權利要求1所述的風信子離體快速繁殖方法,其特征在在于,步驟(d)中,所述誘導生根培養的條件為:溫度25℃,光照:16光期/8暗期。

說明書

技術領域

本發明涉及一種生物技術領域內的快速繁殖方法,具體涉及一種風信子離體快速繁殖方法。

背景技術

風信子(Hyacinthus?orientalis?L.)是百合科風信子屬多年生草本植物,原產地中海和南非,是世界各地廣泛應用的極具觀賞性的春季球根花卉。我國于上世紀八十年代從荷蘭引進種植,但傳統的繁殖方法耗時較長,繁殖效率較低,同時種球的價格昂貴,不能滿足市場的需求,限制了風信子在國內的種植。因此,通過組織培養進行風信子的快速繁殖是有效的技術手段,有利于加大風信子在我國的推廣。

風信子鱗片是最為常用的快速繁殖的組培材料。研究表明,風信子葉片和子房也可以再生形成小苗。以鱗莖為外植體進行再生雖然取材相對較方便,但由于鱗莖帶菌嚴重,常常導致消毒不徹底,培養過程中反復污染現象非常嚴重,增大工作量,而且以鱗片為外植體再生效率并不十分理想。

發明內容

本發明的目的在于克服現有技術的不足,提供一種風信子離體快速繁殖方法。本發明的方法再生效率增高,污染率降低,通過調節培養基條件提高了誘導率,縮短了再生周期,此再生體系適用于多個風信子品種。

本發明是通過以下的技術方案實現的,本發明的風信子離體快速繁殖方法,包括如下步驟:取風信子小花花瓣作為外植體,進行再生培養,獲得風信子幼苗。

優選地,所述的風信子離體快速繁殖方法,包括如下步驟:

(a)取露地種植2~3個月的風信子種球,消毒,剝除外層鱗片;

(b)剝取小花花瓣,平放在MS固體培養基上進行不定芽的誘導生長培養,獲得帶有不定芽叢的組織塊;

(c)縱分組織塊,在芽伸長培養基上進行芽伸長培養;

(d)不定芽伸長至2~4cm時,切分后放入生根培養基中進行誘導生根培養,獲得風信子幼苗。

優選地,步驟(b)中,所述MS固體培養基為MS+BA?2.0mg/L+NAA?1.0mg/L,pH?5.8,蔗糖30g/L,瓊脂5g/L。

優選地,步驟(b)中,所述誘導生長培養的條件為:溫度25℃,光照:16光期/8暗期。

優選地,步驟(c)中,所述芽伸長培養基為MS+BA0.5mg/L+NAA1.0mg/L,pH5.8,蔗糖30g/L,瓊脂5g/L。

優選地,步驟(c)中,所述芽伸長培養的條件為:溫度25℃,光照:16光期/8暗期。

優選地,步驟(d)中,所述生根培養基為:MS+NAA0.5mg/L+活性炭1.0g/L,pH?5.8,蔗糖30g/L,瓊脂5g/L。

優選地,步驟(d)中,所述誘導生根培養的條件為:溫度25℃,光照:16光期/8暗期。

本發明具有如下的有益效果:本發明的方法利用風信子的幼嫩小花瓣片為外植體,直接再生大量不定芽,繼而得到再生苗,與使用鱗片作為外植體進行組織培養相比,本發明的方法再生效率增高,出芽率為100%左右,平均每個外植體誘導再生的芽數量可達20個左右,污染率降低,培養過程中不會出現反復污染的情況,通過調節培養基條件可提高誘導率并縮短再生周期。

具體實施方式

下面結合具體實施例對本發明進行詳細說明。以下實施例將有助于本領域的技術人員進一步理解本發明,但不以任何形式限制本發明。應當指出的是,對本領域的普通技術人員來說,在不脫離本發明構思的前提下,還可以做出若干變形和改進。這些都屬于本發明的保護范圍。

實施例1

選擇優良風信子品種吉普賽女王(Gipsy?Queen)于當年11月左右種植于大田中,次年1月中旬挖取種球;

取幼嫩小花瓣片為外植體進行芽誘導培養,培養基為MS+BA1.0mg/L+NAA0.5mg/L,pH?5.8,蔗糖30g/L,瓊脂5g/L。培養條件為:溫度25℃,光照:16光期/8暗期。出芽率可以達到70%,平均每個外植體誘導再生的芽數量為8個左右。

40天后花瓣片上出現大量芽叢,將芽叢切分后,放入芽伸長培養基中進行培養,培養基為MS+NAA0.5mg/L,pH5.8,蔗糖30g/L,瓊脂5g/L。培養條件同上。

30天后芽伸長到2-4cm,切分芽叢,放入生根培養基中培養,生根培養基為MS+NAA0.5mg/L,pH?5.8,蔗糖30g/L,瓊脂5g/L。培養條件同上。20天后生出3-4條根后得到再生苗。煉苗后移栽至小盆中或露地,適當遮蔭一周,再生苗可正常生長。培養過程中無反復污染情況。

實施例2

選擇優良風信子品種吉普賽女王(Gipsy?Queen)于當年11月左右種植于大田中,次年1月中旬挖取種球;

取幼嫩小花瓣片為外植體進行芽誘導培養,培養基為MS+BA2.0mg/L+NAA1.0mg/L,pH?5.8,蔗糖30g/L,瓊脂5g/L。培養條件為:溫度25℃,光照:16光期/8暗期。出芽率可以達到100%,平均每個外植體誘導再生的芽數量為20個左右。

30天后花瓣片上出現大量芽叢,將芽叢切分后,放入芽伸長培養基中進行培養,培養基為MS+BA0.5mg/L+NAA1.0mg/L,pH5.8,蔗糖30g/L,瓊脂5g/L。培養條件同上。

20天后待芽伸長到2-4cm,切分芽叢,放入生根培養基中培養,生根培養基為MS+NAA0.5mg/L+活性炭1.0g/L,pH?5.8,蔗糖30g/L,瓊脂5g/L。培養條件同上。10天后待生出3-4條根后得到再生苗。煉苗后移栽至小盆中或露地,適當遮蔭一周,再生苗可正常生長。培養過程中無反復污染情況。

實施例3

選擇優良風信子品種吉普賽女王(Gipsy?Queen)于當年11月左右種植于大田中,次年1月中旬挖取種球;

取幼嫩小花瓣片為外植體進行芽誘導培養,培養基為MS+BA3.0mg/L+NAA2.0mg/L,pH?5.8,蔗糖30g/L,瓊脂5g/L。培養條件為:溫度25℃,光照:16光期/8暗期。出芽率可以達到80%,平均每個外植體誘導再生的芽數量為12個左右。

35天后花瓣片上出現大量芽叢,將芽叢切分后,放入芽伸長培養基中進行培養,培養基為MS+NAA1.0mg/L,pH5.8,蔗糖30g/L,瓊脂5g/L。培養條件同上。

25天后待芽伸長到2-4cm,切分芽叢,放入生根培養基中培養,生根培養基為MS+NAA0.5mg/L+活性炭2.0g/L,pH?5.8,蔗糖30g/L,瓊脂5g/L。培養條件同上。12天后待生出3-4條根后得到再生苗。煉苗后移栽至小盆中或露地,適當遮蔭一周,再生苗可正常生長。培養過程中無反復污染情況。

實施例4

選擇優良風信子品種安娜瑪麗(Anna?Marie)于當年11月左右種植于大田中,次年1月中旬挖取種球;

取幼嫩小花瓣片為外植體進行芽誘導培養,培養基為MS+BA2.0mg/L+NAA1.0mg/L,pH?5.8,蔗糖30g/L,瓊脂5g/L。培養條件為:溫度25℃,光照:16光期/8暗期。出芽率可以達到100%,平均每個外植體誘導再生的芽數量為22個左右。

30天后花瓣片上出現大量芽叢,將芽叢切分后,放入芽伸長培養基中進行培養,培養基為MS+BA0.5mg/L+NAA1.0mg/L,pH5.8,蔗糖30g/L,瓊脂5g/L。培養條件同上。

20天后待芽伸長到2-4cm,切分芽叢,放入生根培養基中培養,生根培養基為MS+NAA0.5mg/L+活性炭1.0g/L,pH?5.8,蔗糖30g/L,瓊脂5g/L。培養條件同上。10天后待生出3-4條根后得到再生苗。煉苗后移栽至小盆中或露地,適當遮蔭一周,再生苗可正常生長。培養過程中無反復污染情況。

實施例5

選擇優良風信子品種星空(Sky?Jacket)于當年11月左右種植于大田中,次年1月中旬挖取種球;

取幼嫩小花瓣片為外植體進行芽誘導培養,培養基為MS+BA2.0mg/L+NAA1.0mg/L,pH?5.8,蔗糖30g/L,瓊脂5g/L。培養條件為:溫度25℃,光照:16光期/8暗期。出芽率可以達到100%,平均每個外植體誘導再生的芽數量為18個左右。

30天后花瓣片上出現大量芽叢,將芽叢切分后,放入芽伸長培養基中進行培養,培養基為MS+BA0.5mg/L+NAA1.0mg/L,pH5.8,蔗糖30g/L,瓊脂5g/L。培養條件同上。

20天后待芽伸長到2-4cm,切分芽叢,放入生根培養基中培養,生根培養基為MS+NAA0.5mg/L+活性炭1.0g/L,pH?5.8,蔗糖30g/L,瓊脂5g/L。培養條件同上。10天后待生出3-4條根后得到再生苗。煉苗后移栽至小盆中或露地,適當遮蔭一周,再生苗可正常生長。培養過程中無反復污染情況。

綜上所述,本發明的方法再生效率增高,污染率降低,通過調節培養基條件提高了誘導率,縮短了再生周期,此再生體系適用于多個風信子品種。

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