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一種用于治療血友病的復方血友膠囊及其制備方法.pdf

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一種 用于 治療 血友病 復方 血友 膠囊 及其 制備 方法
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申請專利號:

CN201410130047.X

申請日:

20140401

公開號:

CN103933386A

公開日:

20140723

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有效性:

有效

法律詳情:
IPC分類號: A61K36/899,A61K9/48,A61P7/04,A61K35/50,A61K35/56 主分類號: A61K36/899,A61K9/48,A61P7/04,A61K35/50,A61K35/56
申請人: 陜西醫大血友病研究院
發明人: 劉陜西,劉義國
地址: 710032 陜西省西安市華清東路33號
優先權: CN201410130047A
專利代理機構: 西安恒泰知識產權代理事務所 代理人: 李鄭建
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CN201410130047.X

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摘要

本發明公開了一種用于治療血友病的復方血友膠囊及其制備方法,制得的該復方血友膠囊以每1000粒計由以下中藥原料組成:黃芪:117g,紫河車:35g,當歸:35g,生地黃:140g,白芍:70g,蒼術:70g,仙鶴草:70g,茜草:58g,白茅根:117g,川芎:53g,延胡索:58g,海馬:35g,甘草:35g。制備方法是以海馬、紫河車和延胡索三味粉碎成細粉,過篩,混勻;其余當歸等十味分別以12倍量水煎煮三次,每次1小時,濾過,合并濾液,濃縮至相對密度1.30~1.35(60℃)的清膏,加入上述細粉,混勻,干燥,粉碎,制粒,裝膠囊,共制成1000粒,即得。其組方合理,君、臣、佐、使配伍得當,共奏健脾益氣,滋補肝腎、養血攝血之功效,療效顯著,具有廣闊的臨床應用前景。

權利要求書

1.一種用于治療血友病的復方血友膠囊,其特征在于,制得的該復方血友膠囊以每1000粒計由以下中藥原料組成:黃芪:117g,紫河車:35g,當歸:35g,生地黃:140g,白芍:70g,蒼術:70g,仙鶴草:70g,茜草:58g,白茅根:117g,川芎:53g,延胡索:58g,海馬:35g,甘草:35g。2.權利要求1所述的用于治療血友病的復方血友膠囊的制備方法,其特征在于,以海馬、紫河車和延胡索三味粉碎成細粉,過篩,混勻;其余當歸等十味分別以12倍量水煎煮三次,每次1小時,濾過,合并濾液,在60℃下,濃縮至相對密度1.30~1.35的清膏,加入上述細粉,混勻,干燥,粉碎,制粒,裝膠囊,即得。

說明書

技術領域

本發明涉及一種中藥及其制備,特別是一種用于治療血友病的復方血友膠囊及其制備方法。

背景技術

血友病是一種以三高著稱(出血率高、死亡率高、致殘率高),嚴重危害世界各族人民健康,以遺傳為主的出血性疾病。

血友病是凝血因子Ⅷ/Ⅸ缺乏,因此提高患者自身凝血因子活性,進行病因學治療是其關鍵。本項目就探討提高血友病自身凝血因子活性,進行病因學治療。為治療該病,劉教授進行了大量文獻檢索,發現血友病患者80%有腰膝酸軟、關節腫痛、畸形、肌肉萎縮、面色不華、倦怠無力等癥狀,本病當屬祖國醫學的“血證”、“虛勞”等范疇。病因多因感受外邪、多食厚味、情志過激、勞倦過度等。血液生化于脾,藏受于肝,總統于心,輸布于肺,化精于腎,脈為血之府,血液生化之后,在脈中運行不息,環周不休,以充潤營養全身。各種原因致脈絡損傷或血液忘行時,就會引起血液溢出脈外而成血證。所以其病多與肝、脾、腎及氣血虧損有關,治療當以健脾益氣、滋補肝腎、養血攝血為主。對血證的治療可歸納為治火、治氣、治血三原則,應用涼血止血,收斂止血,活血止血。因血證之中以熱迫血行所致者最多,故以涼血止血藥為主。本病以先天不足,腎為先天之本,腎經虧虛;脾為后天之本,化源不足;肝主藏血,肝腎同源,其發病與三臟虛損密切相關。2004年,世界衛生組織(WHO)擬刪除FⅧ、FⅨ凝血因子制劑。但由于采用基因治療目前仍處在研究階段,別無它法,探討新療法勢在必行。

發明內容

本發明的目的在于,提供一種用于治療血友病的復方血友膠囊及其制備方法。

為了實現上述任務,本發明采取如下的技術解決方案:

一種用于治療血友病的復方血友膠囊,其特征在于,制得的該復方血友膠囊以每1000粒計,由以下中藥原料組成:黃芪:117g,紫河車:35g,當歸:35g,生地黃:140g,白芍:70g,蒼術:70g,仙鶴草:70g,茜草:58g,白茅根:117g,川芎:53g,延胡索:58g,海馬:35g,甘草:35g。

上述用于治療血友病的復方血友膠囊的制備方法,其特征在于,以海馬、紫河車和延胡索三味粉碎成細粉,過篩,混勻;其余當歸等十味分別以12倍量水煎煮三次,每次1小時,濾過,合并濾液,濃縮至相對密度1.30~1.35(60℃)的清膏,加入上述細粉,混勻,干燥,粉碎,制粒,裝膠囊,共制成1000粒,即得。

本發明的用于治療血友病的復方血友膠囊,由黃芪、當歸、川芎等十三味藥材組成,具有健脾益氣、滋補肝腎、養血攝血,應用于脾、肝、腎、氣血虛引起的血癥,具有提高各種凝血因子活性作用,主治西醫血友病、血管性血友病等凝血因子缺乏癥。

本發明的用于治療血友病的復方血友膠囊,其組方合理,君、臣、佐、使配伍得當,共奏健脾益氣,滋補肝腎、養血攝血之功效,經反復實踐、修改,臨床應用療效顯著,具有廣闊的臨床應用前景。

附圖說明

圖1是本發明的制備工藝流程圖。

以下結合附圖和實施例以及各實驗對本發明作進一步的詳細說明。

具體實施方式

一、用于治療血友病的復方血友膠囊處方組成、來源、理論依據以及使用背景

本發明的用于治療血友病的復方血友膠囊,其處方來源于申請人研發的煎劑經驗方,經臨床試驗表明,其具有健脾益氣、滋補肝腎、養血攝血,應用于脾、肝、腎、氣血虛引起的血癥,具有提高各種凝血因子活性作用,主治西醫血友病、血管性血友病等凝血因子缺乏癥。從2005年至今,隨機接診來自全國各地的血友病800余例,療效頗佳,總有效率達85%以上,且無不良反應,長期用(3個月以上)未見肝腎損害,是一個案例有效的中藥制劑。從長遠講可減輕廣大患者的經濟負擔,使大多數患者可長期服藥,以完成全部療程。由此可見,為了造福廣大患者,迫切需要將該組方制中成藥膠囊制劑。

(一)、處方組成

以每1000粒膠囊計,由以下中藥原料組成:黃芪:117g,紫河車:35g,當歸:35g,生地黃:140g,白芍:70g,蒼術:70g,仙鶴草:70g,茜草:58g,白茅根:117g,川芎:53g,延胡索:58g,海馬:35g,甘草:35g。

【性狀】本品為膠囊劑,內容物為黃棕色至棕褐色的顆粒,氣微、味苦。

【功能主治】健脾益氣、滋補肝腎、養血攝血,用于脾、肝、腎、氣血虛引起的血證,具有提高各種凝血因子活性的作用,治療西醫血友病、血管性血友病等凝血因子缺乏癥。

【規格】每粒裝0.3g。

【用法用量】口服,一日3次,一次4粒。

【不良反應】尚不明確。

【禁忌】尚不明確。

【注意事項】

1.孕婦禁服。

2.對本品過敏者禁用,過敏體質者慎用。

3.本品性狀發生改變時禁止使用。

4.請將本品放在兒童不能接觸的地方。

5.如正在使用其他藥品,使用本品前請咨詢醫師或藥師。

制備方法參見圖1,以海馬、紫河車和延胡索三味粉碎成細粉,過篩,混勻;其余當歸等十味分別以12倍量水煎煮三次,每次1小時,濾過,合并濾液,濃縮至相對密度1.30~1.35(60℃)的清膏,加入上述細粉,混勻,干燥,粉碎,制粒,裝膠囊,共制成1000粒,即得。

(二)制備工藝研究

根據臨床經驗,考慮到制劑成型和服用量等因素,海馬、紫河車、延胡索粉碎入藥,因此對出粉率進行考察。當歸、川芎、白芍、生地黃、蒼術、仙鶴草、茜草、白茅根和甘草水提取入藥。

1、出粉率的考察:按處方量稱取海馬30g、紫河車30g、延胡索50g,共三份,粉碎成細粉(80目),稱取細粉量,計算收粉率,結果見表1。

表1:實驗室粉碎出粉率考察

從表1可以看出,出粉率穩定。

2、煎煮工藝參數的確定

煎煮工藝研究中,以中藥飲片為原料,在此基礎上,進行以芍藥苷和干膏率為指標的正交試驗,考察因素為:加水量、煎煮時間和煎煮次數。因素水平見表2。

表2:水提取工藝正交試驗因素水平表

干膏率測定:煎煮液,過濾,記錄體積,精密吸取50ml,水浴蒸干,參照中國藥典之浸出物測定法恒重的方式,在105℃干燥6小時,在干燥器中放涼稱重,計算。

芍藥苷測定:從各濾液中吸取7.0ml置于10ml容量瓶中,用甲醇定容至刻度,混勻,進樣。色譜條件:乙腈—0.1%磷酸(14:86),檢測波長:230nm。

試驗方法:取方中水提取藥材65.5g,共九份,按照正交表進行試驗,結果見表3。

對表中的干膏數據進行直觀分析,從極差角度看,各因素對干膏率的影響依次為:B>A>C,即加水量>煎煮時間>煎煮次數。最優工藝為:煎煮3次,加水量8倍,煎煮1.0小時。對芍藥苷數據進行直觀分析,從極差角度看,各因素對芍藥苷含量的影響依次為:C>A>B,即煎煮次數>煎煮時間>加水量。最優工藝為:煎煮時間1.5小時,加水量12倍,煎煮次數3次。

方差分析:

根據正交試驗數據(表3),對實驗結果進行方差分析,結果見表4、表5。

表3:正交試驗結果

綜合評分=干膏率/干膏率的最大值×30+芍藥苷/芍藥苷的最大值×70。

表4:方差分析表

*F0.05(2,2)=19.00

綜上所述:結合大生產的成本需求,最佳的提取工藝為:煎煮時間1小時,加水量12倍,煎煮次數3次。

驗證實驗

取1.5個實驗處方量藥材飲片,三份,煎煮3次,每次加水12倍量,每次煎煮1小時,煎煮液濾過,按確定的干膏率測定方法和芍藥苷測定方法,計算干膏率和芍藥苷得量,結果見表4,平均干膏率24.87%,說明優選工藝穩定,重復性好。

表5:驗證試驗

實驗編號 干膏率/% 芍藥苷量(mg) 1 24.95 276.84 2 22.79 306.38 3 23.88 225.27 平均值 23.87 269.50

本處方中的打粉藥材實際出粉率93.7%,打粉藥材共22g,共出細粉20.6g,提取出膏率23.87%,提取藥材131g,共出干膏31.3g,原一個處方共出干粉51.3g,膠囊裝量為0.3g每粒,即1000粒處方量,約為原湯劑處方的5.8倍。

(三)中試制備:

以上十三味,海馬、紫河車和延胡索三味粉碎成細粉,過篩,混勻;其余當歸等十味分別以12倍量水煎煮三次,每次1小時,濾過,合并濾液,濃縮至相對密度1.30~1.35(60℃)的清膏,加入上述細粉,混勻,干燥,粉碎,制粒,裝膠囊,共制成1000粒,即得。三批中試數據見表6。

表6:中試工藝參數總結

本處方為13味中藥材經過提取制成的膠囊劑,根據藥材所含不同成分,采取相應的提取方法,在提取工藝中對各工藝參數進行了考察,并確定了最佳提取工藝參數,按此條件進行了實驗,結果表明本工藝較穩定。

(四)理論依據(方義分析)

血友病是一種以三高著稱(出血率高、死亡率高、致殘率高),嚴重危害世界各族人民健康,以遺傳為主的出血性疾病。

方中的黃芪、紫河車為君藥:

黃芪:甘,微溫,入肺、脾經,功效:補氣升陽,固表止汗,托瘡排膿,利尿退腫;

紫河車:甘,咸,入心、肺、腎經,補益陰陽氣血。二者為君藥,健脾補腎,益氣養血。

當歸、生地、白芍、蒼術為臣藥:

當歸:苦、溫,入肝、心、脾經,功效:補血調經,活血止痛,潤腸通便;

生地:甘、苦、寒,入心肝腎經,功效:清熱、涼血、滋陰;

白芍:酸,微寒,入肝經,功效:柔肝止痛,養血斂陰;

蒼術:辛、苦、溫,入肝、胃經,功效:燥濕健脾。以上四藥協助君藥,健脾補肝、益氣養血、滋陰涼血。

仙鶴草、茜草、白茅根、川芎、元胡、海馬為佐藥:

仙鶴草:苦、涼,入肺、肝、脾經,功效為止血;

茜草:苦、寒,入肝經,功效:涼血、止血、祛瘀通淋;

白茅根:甘、寒,入肺、胃經,功效:涼血、止血,清熱利尿。

以上三藥具有涼血、止血、清熱之功效,協助君臣藥治療時清熱為主,血清則涼,可使血液不溢于脈外。

川芎:辛、溫,入肝、膽經,功效:活血通經、祛風止痛;

元胡:辛、苦、溫,入肝、肺經。以上二藥可防止君臣藥補氣過度,脈管滯澀不暢而血瘀,符合中醫補中有行之理論。

海馬:甘、溫,入腎經,功效:溫腎壯陽,化結消腫。上藥溫陽通脈,防止涼血太過,脈絡不通,同時補脾腎二本,以生精血。

甘草為使藥:

甘草:甘、平,入十二經,功效:補脾益氣,解毒緩急,止咳祛痰,通行二十經脈,和中之國老,引藥直達病所。

根據以上處方的方義分析,該合理,君臣佐使配伍得當,共奏健脾益氣,滋補肝腎、養血攝血之功效。

(五)質量研究的試驗資料及文獻資料

該方藥味成份復雜,其性質各不相同,現將有關的文獻資料及研究資料歸納總結如下:5.1文獻研究:

5.1.1當歸:

當歸主要含:

(1)揮發性成分:中性油組成,如:藁本內酯(Ligustilide)、正丁烯基內酯(n-Butyli-dene-phthalide)、2-甲基-十二烷-5-酮(2-methyl-dodecane-5-one)、苯乙酮(acetophenone)、對聚傘花素(P-cymene)、月桂烯(myrcene)、正丁基四氫化酜內酯(n-Butyli-tetrahydrophthalide)、正十二烷醇(dodecanol)等。酚性油組成,如:對-甲基苯甲醇(P-methyl-benzolcohol)、5-甲氧基-2,3-二甲苯酚(5-methoxyl-2,3-dicresol)、苯酚(phenol)、鄰甲苯酚(o-cresol)、對甲苯酚(P-cresol)、愈創木酚(guaiacol)、2,3-二甲苯酚(2,3-dierdsol)、對乙苯酚(p-ethylphe-nol)、間乙苯酚(o-ethylphenol)、4-乙基間苯二酚(4-ethylresorcinol)、2,4-二羥基苯乙酮(2,4-dihy-droacetophenone)等。酸性油組成,如:鄰苯二甲酸酐(phthalic?anhy-dride)、肉豆蔻酸(myristic?acid)、茴香酸(anisic?acid)等。

(2)有機酸:當歸根中含有阿魏酸(ferulic?acid)、丁二酸(succinic?acid)、煙酸(nicotinic?acid)、香草酸(vanillic?acid)、正二十四酸(n-tetracosanoic?acid)、棕櫚酸(palmitic?acid)。

(3)糖類:含有蔗糖(sucrose),果糖(fructose)和葡萄糖(glucose),并分離出有抗補體活性的阿拉伯半乳聚糖(arabigalactan),靜止后認為有a(1→4)多聚半乳多糖結合阿拉伯糖、半乳糖、鼠李糖構成的中性糖鏈,并與肽類結合。

(4)維生素。含有維生素B12(vitamine?B12)0.25~40ug/100g,維生素A(vitamine?A)0.0675%。(5)氨基酸、尿嘌呤等堿性成分及多種為人體必需的無機元素等。

藁本內酯(Ligustilde)的結構式為:

現代藥理研究表明:

(1)當歸具有抗炎鎮痛及抗損傷作用。當歸水浸膏口服可抑制大鼠被動皮膚過敏PCA反應及漏出色素量。當歸水煎液對多種致炎劑引起的急、慢性炎癥均有顯著的抑制作用,摘除雙側腎上腺后其抗炎作用仍然存在;并能降低大鼠炎癥組織PGE2的釋放量,降低豚鼠補體旁路溶血活性,但不能拮抗組織胺的致炎作用。

(2)本品水提物能降低血管通透性,小鼠口服185.9mg(生藥)/kg對血管通透性的ID50與口服乙酰水楊酸鈉201.1mg/kg作用相當,即其作用為后者1.1倍,且亦似乙酰水楊酸鈉能一直血小板中致炎物質如5-HT的釋放,從而產生消炎作用。.

(3)本品水提物及乙酰水楊酸鈉對腹腔注入醋酸引起扭體反應的ID50分別為65.9(生藥)mg/kg及114.3mg/kg,說明本品陣痛作用強度呀為乙酰水楊酸鈉的1.7倍,當歸口服或局部應用于不同原因引起的家兔急性浮腫,顯示抗浮腫作用。

(4)抗菌作用:當歸在試管內對大腸桿菌、傷寒及副傷寒、痢疾桿菌、霍亂弧菌、變形桿菌、甲型及乙型溶血性鏈球菌、白喉桿菌有輕度抑制作用。其揮發油對金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、福氏痢疾桿菌、綠膿桿菌等感染小鼠預防性給藥或感染后治療,均有較好抑制作用。

(5)抗輻射損傷作用:預防性給予當歸多糖對受輻射照射小鼠的造血組織有一定的輻射防護作用;當歸多糖對受照小鼠的造血細胞亦有輻射防護作用。

(6)抗氧化和清除自由基的作用。其中所含阿魏酸通過直接消除自由基、抑制氧化反應和自由基反應,以及與生物膜磷脂結合保護膜脂質等多種機理拮抗自由基對組織的損害。根據有效成分性質及藥理作用,本制劑以水提取入藥。

5.1.2白芍

白芍干燥根中提取的有效成分是白芍總苷(total?glucosides?of?paeonia,TGP),包括芍藥苷(paeoniflorin),經基芍藥苷(hudroxy-paeoni-florin)、芍藥花苷(paeonin)、芍藥內醋苷(albi-florin)、苯甲酞芍藥苷(benzoylpaeoniflorin)等。其中芍藥苷的含量占總苷的90%以上。

芍藥苷(Paeoniflorin)的結構式為:

現代藥理研究表明:

(一)杭炎作用:實驗表明,白芍總苷可以抑制大鼠角叉菜膠性足腫脹、弗氏完全佐劑引起的大鼠足爪腫脹以及大鼠佐劑性關節炎。進一步的研究發現,切除松果腺的大鼠給予白芍總苷,可使松果腺切除引發的足爪過度腫脹得以抑制。另外,白芍總苷可以對抗D一半乳糖胺或四氯化碳所致的小鼠肝損傷,如血清谷丙轉氨酶升高、血清白蛋白下降及肝糖原含量下降,并可明顯改善形態學上肝細胞的變性和壞死,而且對乙醇誘導的血清轉氨酶的升高亦有抑制作用。

(二)免疫調節作用:在不同的病理狀態下,白芍總苷對異常的免疫功能具有雙向調節機制。在小鼠的實驗中,對環磷酞胺降低的遲發型超敏反應有恢復作用,而對環磷酞胺增高的遲發型超敏反應則有抑制作用。在佐劑型關節炎大鼠模型、系統性紅斑狼瘡小鼠模型和多種肝損傷模型上,白芍總苷可在不同程度上調節機體的免疫功能紊亂,包括對免疫應答的多個環節產生作用,而且作用特點呈功能和濃度濟叨量依賴性的雙向免疫調節。以水提取入藥。

5.1.3黃芪:

黃芪含單糖、多糖、皂苷、黃酮、氨基酸、微量元素、蛋白質、核黃素、葉酸、維生素P、有機酸、香豆素、β-谷甾醇、胡蘿卜素、羽扇豆醇、正十六醇、膽酸、甜菜堿等多種成分。

其黃酮主要為黃酮類、異黃酮類、二氫黃酮類,主要有山奈素、槲皮素、異鼠李素、鼠李檸檬素、熊竹素。

在黃芪及其同屬近緣植物中共分離出四十余種三萜皂苷,其結構為四環三萜及五環三萜類,苷的糖多為葡萄糖、半乳糖、鼠李糖,多接于苷元3,6位。有些苷的某些羥基乙酰化。在膜莢黃芪中有乙酰黃芪苷Ⅰ(AcetylastragalosideⅠ)、黃芪苷(Astragaloside)Ⅰ~Ⅷ、異黃芪苷(Isoastragaloside)Ⅰ~Ⅱ、黃芪皂苷甲、乙、丙(Astragalus?saponinⅠ、Ⅱ、Ⅲ)、環黃芪醇和大豆皂苷Ⅰ;蒙古黃芪中有黃芪苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ和大豆皂苷Ⅰ。黃芪的有機酸主要有香草酸、阿魏酸、異阿魏酸、對羥苯基丙烯酸、咖啡酸、綠原酸及棕櫚酸。以水提取入藥。

黃芪甲苷的結構式為:

黃芪能提高人體免疫力、具有抗疲勞、抗衰老作用,并且有擴張血管和擴張冠脈作用。

5.1.4川芎:

為傘形科植物川芎Ligusticum?chuanxiong?Hort.的干燥根莖。

化學成分:川芎含有揮發油、生物堿、酚性物質、有機酸、苯酞內酯及其他等成分。本制劑以水提取入藥。

藥理作用:

(1)對心、腦血管系統的作用:

對心臟的作用:川芎嗪對離體豚鼠灌流心臟產生劑量依賴性抑制心肌收縮和增加冠脈流量。川芎嗪對麻醉兔心肌缺血再灌注所致心肌損傷和心肌頓抑有保護作用。

對腦血管的作用:川芎嗪能顯著增加缺血大鼠血漿中NO含量,降低MMS總量和組織中MDA的含量,降低血比黏度,對大鼠缺血性再灌注損傷具有保護作用。

對冠脈循環的作用:川芎水提物及生物堿能擴張冠脈,增加冠脈流量,改善心肌缺氧狀況。給麻醉犬iv川芎嗪后,冠脈及腦血流量增多,冠脈、腦血管、外周阻力降低。川芎嗪也能顯著增加清醒小鼠的冠脈流量。

對外周血管及血壓的作用:川芎總生物堿、川芎嗪能降低麻醉犬的外周血管阻力。川芎生物堿、酚性部分和川芎嗪能抑制氯化鉀和腎上腺素對家兔離體胸主動脈條的收縮作用。川芎浸膏、水浸液、乙醇水浸液、乙醇浸出液和生物堿對麻醉犬、貓、兔不論im或iv均有顯著而持久的降壓作用。水浸液給高血壓犬或大鼠ig,也有明顯的降壓作用。

(2)對血小板聚集、血栓形成和血液粘滯度的影響川芎嗪能延長體外ADP誘導的血小板聚集時間,對已聚集的血小板有解聚作用,還有提高紅細胞和血小板表面電荷,降低血粘度,改善血液流變的作用。阿魏酸能抑制血小板TXA2的釋放,對其活性有直接的拮抗作用,還能升高血小板內cAMP含量,抑制血小板集。

(3)延緩慢性腎損害的作用:川芎嗪能夠顯著增加腎血流量,減輕兔腎熱缺血模型的腎組織損傷,還能提高膜性腎炎家兔腎組織的SOD活性,減輕腎組織細胞的脂質過氧化損傷。

(4)對平滑肌的作用:家兔離體妊娠子宮實驗證明,川芎浸膏能增強子宮收縮,形成痙攣,大劑量反而使子宮麻痹,收縮停止。

5.1.5甘草

系豆科植物甘草Glycyrrhiza?uralensis?Fisch.、脹果甘草G.inflata?Bat、或光果甘草G.glabra?L.的根及根莖。

化學成分:根和根莖主含三萜皂甙。其中主要的一種,谷稱甘草甜素(glycyrrhizin)的,系甘草的甜味成分,是1分子的18β-甘草次酸(18β-glycyrrhetic?acid)和2分子的葡萄醛酸(glucuronic?acid)結合生成的甘草酸(glycyrrhizic?acid)的鉀鹽和鈣鹽。其他的三萜皂甙有:烏拉爾甘草皂甙(uralsaponin)A、B和甘草皂甙(licoricesaponin)A3、B2、C2、D3、E2、F3、G2、H2、J2、K2。又含黃酮素類化合物:甘草甙元(liquiritigenin),甘草甙(liquiritin),異甘草甙元(isoliquiritigenin),異甘草甙(isoliquiritin),新甘草甙(neoliquiritin),親異甘草甙(neoisoliquiritin),甘草西定(licoricidin),甘草利酮(licoricone),刺芒柄花素(formononetin),5-O-甲基甘草本定(5-O-methyllicoricidin),甘草甙元-4'-芹糖葡萄糖甙[liquiritigenin-4'-qpiofur-anosyl(1→2)glucopyranoside,apioliquiritin],甘草甙元-7,4'-二葡萄糖甙(liquiritigenin-7,4'-diglucoside),新西蘭牡荊甙Ⅱ(viceninⅡ)即是6,8-二-葡萄糖基芹菜素、芒柄花甙(ononin),異甘草黃酮醇(isolicoflanonol),異甘草甙元-4'-芹糖葡萄甙。還含香豆精類化合物:甘草香豆精(glycycoum-arim),甘草酚(glycyrol),異甘草酚(isoglycyrol)甘草香豆精-7-甲醚(glycyrin),新甘草酚(neoglycyrol),甘草吡喃香豆精(licopyranocoumarin),甘草香豆酮(licocoumarione)等。又含生物堿:5,6,7,8-四氫-4-甲基喹啉(5,6,7,8-teTCMLIBahydro-4-methylquinoline),5,6,7,8-四氫-2,4-二甲基喹啉(5,6,7,8-teTCMLIBahydro-2,4-dimethylquinoline),3-甲基-6,7,8-三氫吡咯并[1,2-a]嘧啶-3-酮(3-methyl-6,7,8-TCMLIBihydropyrrolo[1,2-]pyrimidin-3-one)。還含甘草苯并呋喃(licobenzofuran),又名甘草新木脂素(liconeolignan),β-谷甾醇(β-sitosterol),正二十三烷(n-TCMLIBicosane),正二十六烷(n-hexacos-ane),正二十七烷(n-heptacosane)等。另含甘草葡聚糖GBW(glucan?GBW),三種中性的具網狀內皮活性的甘草多糖(glycyrrigan)UA、UB、UC,多種具免疫興奮作用的多糖(polysaccharide)GR-2a、GR-2Ⅱb、GR-2ⅡC和多糖GPS等。本制劑以水提取入藥。

藥理作用:

(1)對消化系統的作用

除去甘草甜素的浸膏及甘草中黃酮甙類對大鼠實驗性潰瘍有明顯保護作用。

(2)腎上腺皮質激素樣作用甘草浸膏、甘草甜素及甘草次酸對健康人及動物都有促進鈉,水潴留的作用;小劑量甘草甜素(每只100ug)能使大鼠胸腺萎縮及腎上腺重量增加,產生糖皮質激素可的松樣作用。大劑量時則糖皮質激素樣作用不明顯,只呈現鹽皮質激素樣作用。

(3)解毒作用

甘草浸膏及甘草甜素對某些藥物中毒、食物中毒、體內代謝產物中毒都有一定的解毒能力。解毒作用的有效成分為甘草甜素,解毒機制為甘草甜素對毒物有吸附作用,甘草甜素水解產物葡萄糖醛酸能與毒物結合,以及甘草甜素有腎上腺皮質激素樣作用,增強肝臟的解毒能力等方面因素綜合作用的結果。④止咳平喘作用甘草次酸有明顯的中樞性鎮咳作用,大劑量的甘草次酸可使小鼠呼吸抑制。此外甘草甜素、甘草次酸鹽尚有抗炎癥及抗過敏、抗肝損傷、抗促癌、抗菌、抗艾滋病毒(甘草甜素)作用。

5.1.6地黃

玄參科植物地黃Rehmannia?glutinosa?Libosch.的新鮮或干燥塊根。具有滋陰清熱;涼血補血之功效。

地黃的化學成分以甙類為主,其中又以環烯醚萜甙類為主。從鮮地黃分得的環烯醚萜甙有:益母草甙(leonuride),桃葉珊瑚甙(aucubin),梓醇(catalpol)等,以梓醇的含量最高。又含糖類:D-葡萄糖(D-glucose),D-半乳糖(D-gluctose),水蘇糖(stachyose),毛蕊花糖(verbascose),以水蘇糖的含量最高,達64.9%。還含人體必需的氨基酸以及葡萄糖胺(glucosamine)胡蘿卜甙(daucosterol),1-乙基-β-D-galacetoside),腺甙(adenoside)及無機元素等。

梓醇和地黃苷結構式分別為:

地黃多糖可促進正常小鼠骨髓造血干細胞的增殖,刺激其造血功能。并對放射損傷有一定的保護和促進恢復作用。地黃低聚糖也能增強小鼠的造血干細胞。地黃多糖b有明顯的免疫調節活性,能使Lewis肝癌細胞內P53基因的表達明顯增加,從而對地黃多糖的抗腫瘤機理從基因水平上找到了依據。鮮地黃汁、鮮地黃及干地黃水煎液均有拮抗阿司匹林誘導的小鼠凝血時間延長,其中鮮地黃汁的作用明顯強于干地黃。地黃水提取液有明顯降壓作用,對寒冷情況下的血壓則有穩定作用。從而顯示地黃對血壓具有雙向調節作用。另外,地黃低聚糖不僅可以調節實驗性糖尿病紊亂,亦可調節生理性高血糖狀態。地黃水提液還可抑制胃酸分泌和抗潰瘍,有鎮定作用等。本制劑中地黃以水煎入藥。

5.1.7延胡索

為罌粟科植物延胡索Corydalis?yanhusuo?W.T.Wang的干燥塊莖。含叔胺、季胺類生物堿。如延胡索甲素、乙素等。此外,延胡索中尚含有大量淀粉,少量黏液質、樹脂、揮發油,另含無機微量元素。還含有多糖、羥鏈霉素、豆甾醇、谷甾醇、油酸、亞油酸、亞麻酸、延胡索酸等。

藥理作用:

(1)鎮痛作用:延胡索以及其生物堿在鎮痛方面的作用延胡索甲素,乙素,丑素對小鼠,大鼠,兔均具有鎮痛作用,以乙素效果最為明顯。

(2)鎮靜,催眠與麻醉作用。

(3)抗潰瘍作用:

脫氫延胡索堿是延胡索中治療冠心病的主要有效成分,具有擴張冠狀血管,提高冠脈血流量,改善心肌營養性血流量,增強心肌耐缺氧能力以及保護心肌缺血,壞死等作用。

延胡索有效成分(延胡索乙素)藥理作用明確且水溶性好,故采用水煎煮入藥。

5.1.8海馬

含有谷氨酸(glutamic?acid),天冬氨酸(aspartic?acid),甘氨酸(glycine),脯氨酸(proline),丙氨酸(alanine),亮氨酸(leucine)等17種氨基酸;鈣(Ca),磷(P),鈉(Na),鉀(K),鎂(Mg),鐵(Fe),鍶(Sr),硅(Si)等19種無機元素。另外還含有硬脂酸(stearic?acid),膽甾醇(cholesterol)。此外還推測含有膽甾二醇(cholesterdiol)。本制劑以打粉入藥。

現代藥理研究表明:

1.性激素樣作用:海馬的乙醇提取物,可延長正常雌小鼠的動情期,對去勢鼠則可出現動情期,并使子宮及卵巢(正常小鼠)重量增加。海馬(品種未注明)提取液表現雄性激素樣作用,其效力較蛇床子、淫羊藿弱,但比蛤蚧強。

2、延緩衰老作用:海馬能延長小鼠(NiH雄性小鼠)缺氧和存活時間,延長小鼠的游泳時間,顯示了較好的抗應激力,增強體質和對外界不良刺激的抵抗力,增強動物的記憶力。海馬對MAO-B(單胺氧化酶B)活性、過氧化脂質均有顯著影響。海馬配人參的制劑經藥理實驗表明,小鼠游泳持續時間明顯延長,并能對抗氫化考的松引起小鼠胸腺萎縮的不良影響,表現出此制劑的補益作用。

5.1.9紫河車:

為健康人類的胎盤,胎盤含蛋白質、糖、鈣、維生素、免疫因子、女性激素、助孕酮、類固醇激素、促性腺激素、促腎上腺皮質激素等。胎盤含有與血液凝固有關的成分,其中有類似凝血因子Ⅷ的纖維蛋白穩定因子,尿激酶抑制物(能抑制尿激酶活化纖維蛋白溶酶元的作用)和纖維蛋白溶酶元活化物。本制劑以粉末入藥。

5.1.10蒼術:

為北蒼術Atractylodes?chinensis(DC.)Koidz.的干燥根莖。根莖含揮發油1.5%,主含α-桉葉醇、β-桉葉醇和蒼術呋喃烴,還含β-芹子烯,左旋的α甜沒藥萜醇(α-bisabolol),茅術醇,欖香醇,蒼術酮,芹子二烯酮等。又含聚乙炔化合物:蒼術呋喃烴醇(atractyoldinol),乙酰基蒼術呋喃烴醇(acetylα-tractylodinol)等水溶性成分。還含鈷、鉻、銅、錳、鉬、鎳、錫鍶釩鋅、鐵磷、鋁鋯、鈦、鎂、鈣等無機元素。本制劑以以水提取入藥。

α-桉葉醇和β-桉葉醇的結構式如下:

藥理作用:

1、抗缺氧作用:用氰化鉀所致小鼠缺氧模型證明,蒼術丙酮提取物750mg/kg灌胃能明顯提高小鼠存活時間,降低相對死亡率。蒼術的抗缺氧主要活性成分為β-桉葉醇。

2、對心血管的作用:蒼術對蟾蜍心臟有輕度抑制作用,對蟾蜍后肢血管有輕微擴張作用。蒼術浸膏小劑量靜脈注射,可使家兔血壓輕度上升,大劑量則使血壓下降。

3、中樞抑制作用:蒼術揮發油少量對蛙有鎮靜作用,同時使脊髓反射亢進;較大量則呈抑制作用,終至呼吸麻痹而死。其抑制成分主要是β-桉葉醇和茅蒼術醇。茅蒼術及其所含β-桉葉醇還有抗電擊所致小鼠痙攣作用。

4、對肝臟的影響:蒼術水煎劑每天10g生藥/kg連續給小鼠灌胃7天,能明顯促進肝蛋白的合成。生藥及其所含蒼術醇、蒼術酮、B-桉葉醇對四氯化碳誘發的一級培養鼠肝細胞損害均有顯著的預防作用。

5.1.11仙鶴草:

為薔薇科植物龍牙草Agrimonia?pilosa?Ledeb.的干燥地上部分。

化學成分:仙鶴草全草含仙鶴草素(Agrimon-ins),已知的有仙鶴草甲素(Agrimonin?A)、仙鶴草乙素(Agrimonin?B)、仙鶴草丙素、仙鶴草丁素、仙鶴草戊素、仙鶴草己素等6種

尚含木犀草素-7-葡萄糖甙(Luteolin-7-glucoside)、芹菜素-7-葡萄糖甙(Apigenin-7-glucoside)、槲皮素(Quercetin)、大波斯菊甙(Cosmosiin)、金絲桃甙(Hyperoside)、蘆丁(Rutin)、兒茶素(Catechin);鞣花酸(Ellagic?acid)、沒食子酸(Gallic?acid)、咖啡酸(Caffeic?acid);仙鶴草內酯(Agrimonolide)、香豆素(Coumarin)、歐芹酚甲醚(Osthole)、仙鶴草醇(Agri-monol)、鶴草酚(Agrimophol)及鞣質、甾醇、皂甙和揮發油等。本制劑以水提取入藥。

藥理作用:

1.止血作用現代藥理研究結果對仙鶴草能否止血尚無定論,曾有報告,小鼠靜脈注射仙鶴草素后,出血時間縮短45%.給104只兔分別靜脈注射仙鶴草鈉鹽2mg/kg,可使血小板數量增加,血清鈣含量增加及凝血時間縮短.以仙鶴草制成粉劑,用于外傷出血、內臟手術時出血或滲血,有肯定療效.亦有報告認為,該品浸劑及仙鶴草注射液,不論體外或體內實驗,均無促進血凝作用.該品所含仙鶴草素A、B、C及另一種酚性松脂酸,均無促血凝作用。

2、對心血管系統的作用

該品浸劑和仙鶴草素對離體蛙心,均有強心作用;能增加蛙和蟾蜍的心率和收縮強度,而水提取部分的醇提取物對離體蛙心則有抑制作用,仙鶴草乙醇浸膏給麻醉兔、犬靜脈注射,可使血壓上升,而其水提取部分的醇提取物則使家兔的血壓下降;給兔和蛙后肢血管灌流,低濃度使血管收縮,高濃度則使血管擴張。仙鶴草浸劑及水提取物給兔耳血管灌流,低濃度時無影響,高濃度時則呈擴張反應,并能對抗腎上腺素的縮血管作用。

水提取物及酸水提取物對電刺激齒髓的家兔痛覺有抑制作用,仙鶴草素能降低小鼠和兔紅細胞的脆性,略有降低大鼠基礎代謝的作用,其醇溶性浸出物能興奮呼吸中樞,對骨骼肌也有興奮作用,能使已疲勞的骨骼肌恢復興奮。

此外,尚有降血糖作用。

5.1.12茜草:

為茜草科植物茜草Rubia?cordifolia?L.的干燥根及根莖。

化學成分:根含蒽醌甙茜草酸(Rubierythrinic?acid)、水解生成甙元茜素(Alizarin)及葡萄糖.尚含紫色素(紫茜素,Purpurin)、偽紫色素(偽紫茜素,Pseudopurpurin)、茜草色素(Munjistin)。本制劑以水提取入藥。

藥理作用:

1、止血作用:實驗證明:該品有輕度止血作用,茜草根溫浸液能縮短家兔出血和凝血時間,炒炭后作用更顯著。

2.止咳、祛痰作用:茜草根煎劑給小鼠灌胃,有止咳、祛痰作用。

3.對平滑肌的作用:對離體兔回腸,茜草根煎劑能對抗乙酰膽堿的收縮作用.根的水提取物對離體豚鼠子宮有興奮作用,產婦口服亦有加強子宮收縮的作用.在小鼠離體小腸試驗中,紫茜素、茜素無明顯解痙作用。

4、其他作用:茜草制劑能治療膀胱結石.其對由鎂和胺構成的結石有一定的溶媒作用,但對膀胱結石實際上并無多大作用,機制可能是興奮膀胱肌肉,從而幫助結石的排除.對大鼠的實驗性腎或膀胱結石的形成,也有某些抑制作用。

5.1.13白茅根:

為禾本科植物白茅Imperata?cylindrical(L.)Beauv.var.major(Nees)C.E.Hubb.的干燥根莖。

化學成分:根莖含蘆竹素(arundoin),印白茅素(cylindrin),薏苡素(coixol),羊齒烯醇(fernenol),西米杜鵑醇(simiarenol),異山柑子萜醇(isoarborinol),白頭翁素(anemonin);還含甾醇類:豆甾醇(stigmasterol),β-谷甾醇(β-sitosterol),菜油甾醇(camposterol),糖類,多量蔗糖(sucros),葡萄糖(glucose)及少量果糖(fructose),木糖(sylose);簡單酸類:枸櫞酸(cittic?acid)草酸(oxalic?acid)及蘋果酸(malic?acid)。

本制劑以水提取入藥。

藥理作用:止血作用:研究表明:白茅根可加速凝血過程的第二階段,即促進凝血酶原的形成,因而有止血作用.有人認為,白茅根的止血作用在于能縮短出血及凝血時間。

其他作用:白茅根水浸液有降低血管通透性的作用。

5.1.14質量標準研究:

鑒別:儀器與試藥:本項下所用批號20130201,20130202,20130203。所用化學試劑為分析純,薄層所用硅膠G為青島海洋化工廠生產。當歸對照藥材(120927-200613)、延胡索對照藥材(120928-200604)、川芎對照藥材(120918-200809)、芍藥苷對照品(110736-200833)均購自中國藥品生物制品檢定所。KQ5200DE型數控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司),BS210S分析天平(Max210g,d=0.1mg)(北京賽多利斯天平有限公司)。

(1)為方中當歸、川芎的鑒別:取本品內容物5g,加乙醚20mL,超聲處理20min,濾過,濾液蒸干,殘渣加乙醇1ml使溶解,作為供試品溶液。另取當歸對照藥材及川芎對照藥材粉末各1g,同法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法(中國藥典2010版一部附錄ⅥB)試驗,吸取上述溶液各10μl,分別點于同一硅膠G薄層板上,以正己烷—醋酸乙酯(4:1)為展開劑,展開,取出,晾干,置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中,在與對照藥材色譜相應的位置上,顯相同顏色的熒光斑點。此法專屬性及重復性好,空白無干擾,故收入質量標準正文。

(2)為方中延胡索的鑒別:取本品內容物5g,加甲醇50ml,超聲提取30min,濾過,濾液蒸干,殘渣加水10ml使溶解,加濃氨試液調至堿性,用乙醚振搖提取三次,每次10ml,合并乙醚液,蒸干,殘渣加甲醇1ml使溶解,作為供試品溶液。另取延胡索對照藥材1g,加甲醇10ml,同法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法(中國藥典2010版一部,附錄ⅥB)試驗,吸取上述溶液各5μL,分別點于同一硅膠G薄層板上,以甲苯—丙酮(9:2)為展開劑,展開,取出,晾干,置碘缸內熏3min,取出,置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中,在與對照藥材色譜相應的位置上,顯相同顏色的熒光斑點。本法專屬性及重復性好,空白無干擾,故納入質量標準正文。

另外本實驗還對白芍進行了薄層鑒別,具體方法如下:

取本品內容物3g,加乙醇10ml,振搖提取5min,濾過,濾液蒸干,殘渣乙醇1ml使溶解,作為供試品溶液。另取芍藥苷對照品適量,加甲醇制成1mg/ml的溶液。另取白芍對照藥材1g,同法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法(中國藥典2010版一部,附錄ⅥB),吸取上述溶液各10μL,分別點于同一硅膠G薄層板上,以三氯甲烷-醋酸乙酯-甲醇-甲酸(40:5:10:0.2)為展開劑,展開,取出,晾干,噴以5%香草醛濃硫酸溶液,105℃加熱至斑點顯色清晰,供試品中在與對照品色譜和對照藥材色譜相同的位置上,均未出現相同顏色的斑點。故不納入質量標準正文。

檢查:按中國藥典2010版一部附錄ⅠL膠囊劑項下規定進行檢查。結果見表1。

表1:三批樣品檢查結果

5.1.14參考文獻:

【1】干國平,劉焱文,川芎的化學成分及藥理研究進展,李秋怡【J】.時珍國醫國藥,2006,17(7)1298-1299。

【2】康軍,當歸化學成分及其藥理作用研究進展,【J】.中醫中藥,2005,2(23):120。

【3】柳永青,當歸的化學成分與生物活性【J】.航空航天醫藥,2009,20(11):127-128。

【4】國家藥典委員會編,中華人民共和國藥典,2005版,一部,北京,化學工業出版社。

【5】徐國鈞主編,中藥材粉末顯微鑒定,1986,北京,人民衛生出版社。

【6】康廷國主編,中藥鑒定學,2003,北京,中國中醫藥出版社。

【7】苗明三,李振國主編,中藥質量控制技術,[M],北京,人民衛生出版社,2000年。

【8】陰鍵,郭力弓主編,中藥現代研究與臨床應用,[M],北京,學苑出版社,1994年。

(六)復方血友膠囊穩定性試驗

按《中國藥典》2010版二部附錄ⅪⅩC和《中藥、天然藥物穩定性研究技術指導原則》(國食藥監注[2006]678號)中有關膠囊劑穩定性試驗的各項規定,采用室溫留樣觀察法,對復方血友膠囊臨床應用包裝的三個批號樣品進行穩定性考察試驗,以觀察其質量變化,現將試驗情況報告如下。

1、儀器與試藥:

儀器:UV-8三用紫外分析儀(無錫科達儀器廠),超聲波清洗機(昆山市超聲儀器有限公司,型號:KQ—100型),電子分析天平(北京賽多利斯天平有限公司,型號:BS210S,d=0.1mg)。

化學試劑與試藥:化學試劑為分析純,對照品均購自中國藥品生物制品檢驗所,硅膠G為青島海洋化工廠生產。

2、試驗方法與結果:

1.方法:室溫留樣觀察法。

2.留樣條件和留樣量:

留樣室:面積15m2,留樣量30瓶(批號:20130201,20130202,20130203);在常溫條件下放置6個月,分別于0個月、3個月和6個月各取樣一次,按穩定性考察項目進行檢測,樣品起始情況見樣品檢驗報告單。

3.檢測指標:性狀、鑒別、水分、崩解時限。

4.結果見表1~表3。

3、結論

采用室溫留樣觀察法,分別考察了6個月的復方血友膠囊上市包裝的三個批號樣品,經檢驗各項指標均符合注冊質量標準草案和《中華人民共和國藥典》2010年版一部附錄膠囊劑項下規定,表明本品穩定性良好。

表1:復方血友膠囊穩定性試驗報告(批號:20130201)

表2:復方血友膠囊穩定性試驗報告(批號:20130202)

表3:復方血友膠囊穩定性試驗報告(批號:20130203)

(七)復方血友膠囊小鼠急性毒性實驗資料及文獻資料

復方血友膠囊按40%的濃度及0.4ml/10g的給藥容量,24小時給昆明種小鼠灌胃2次,小鼠無一只死亡,也無明顯中毒反應,測得復方血友膠囊最大受試藥物量為32g/kg,相當生藥95.04g/kg,為臨床人擬用量的533倍。

實驗目的:24小時內給藥2次,觀察小鼠接受過量復方血友膠囊所產生的急性中毒反應,為多次反復給藥的毒性實驗設計劑量、分析毒性作用的靶器官、分析人體過量時可能出現的毒性反應、臨床劑量選擇和觀察指標的設計提供參考信息等。

7.1實驗條件

7.1.1動物品系:昆明種小鼠體重18-22g,♀♂各半,由第四軍醫大學實驗動物中心提供,合格證號:0022491,許可證號:SCXK(軍)2012-007。

7.1.2飼養管理:實驗動物購回后適應性喂養2-3天后方可使用,實驗動物分組后標記樣品名稱、實驗動物種類、性別及組別。凈化室溫度保持在20-25℃;相對濕度保持在45-70%。保持門窗密閉,使用空氣凈化系統,送新風全口開啟,送風機隔日換機一次,人流、物流和廢棄物按照規定的方向運行,不得逆轉。飼料和墊料由鈷60照射處理,每天清掃地面、籠具架和墻壁,并用紫外線消毒一次,實驗前后認真洗手和用75%酒精棉球消毒。試驗結束后,對處死動物的尸體、垃圾應袋裝后及時清理和焚燒。

7.1.3受試藥物:

7.1.3.1.名稱:復方血友膠囊。

7.1.3.2.來源:西安新城醫大醫院

7.1.3.3.批號:20130201

7.1.3.4.規格含量:每粒0.3g,含生藥0.89,每g含生藥2.97g。

7.1.3.5.臨床用量:每日3次,每次4粒,人日用量為0.06g/kg(體重按60kg計)。

7.1.4藥液制備:實驗時取復方血友膠囊藥粉,用去離子水作溶劑,配成40%復方血友膠囊懸液。

7.2.實驗方法

7.2.1預試:取昆明種小鼠4只,給藥前禁食12小時,按40%的最大給藥濃度,按0.4ml/10g的最大給藥體積,24小時內灌藥2次,給藥后觀察小鼠一般情況。見給藥后,4只小鼠大便正常,無死亡,活動自如,進食、飲水正常,也無明顯中毒反應,提示本品難以測出LD50,故選擇最大受試藥物量實驗。

7.2.2最大受試藥物量實驗及給藥組,每組各20只小鼠(♀♂各半),給藥前禁食12小時,給藥組以40%濃度的復方血友膠囊懸液,按0.4ml/10g,24小時內2次灌胃給藥,對照組給與同體積去離子水,連續觀察14天,詳細記錄小鼠行為活動、狀態、飲食、大小便及毛色、分泌物等。

7.3.實驗結果

給藥后,小鼠大便正常呈濕潤顆粒狀,無死亡,活動自如,進食、飲水均正常,皮毛光潔,口、鼻、眼及肛門清潔無分泌物,連續觀察兩周,體重有增加,給藥前體重、第7日、第14日體重見表1,給藥組體重與對照組體重無顯著性差異。解剖所見:胸腔,腹腔未見異常液體,腸管未見脹氣,心、肝、脾、肺、腎等重要臟器未見顏色、形態異常,沒有出血點或其它病理改變,胃粘膜顏色紅潤,無出血點或潰瘍,尸檢無異常。

表1:急毒小鼠體重n=20

注:給藥組與對照組比較P>0.05。

7.4、實驗結論

給昆明種小鼠灌胃未測出LD50,24小時內給藥2次,觀察14天,小鼠死亡。其最大受試藥物量為32g/kg,相當生藥95.04g/kg,約為臨床人擬用量的533倍。在此劑量下未觀察到的急性毒性反應。

7.5參考資料:

中藥、天然藥物研究技術指導原則,國家食品藥品監督管理局,二00五年七月。

8、治療血友病(脾肝腎氣血虛證)臨床總結報告

血友病是一種以三高著稱(出血率高、死亡率高、致殘率高),而嚴重危害世界各民族健康,缺醫少藥的出血性疾病,目前西醫僅有出血時應用血液制品止血的替代療法,該療法不但容易并發肝炎、艾滋病毒,而且更大的危害是易并發凝血因子抗體,加重出血[1]。因此,2004年世界衛生組織(WHO)擬刪除FⅧ、FⅨ凝血因子制劑。基因治療目前仍處在研究階段,別無它法,探討新療法勢在必行。

申請人研究發現,血友病85%患者有腰膝酸軟、關節腫痛;筋腱攣縮,伸屈受限;倦怠無力,肌肉萎縮,反復出血,面色不華等癥候。認為上述證候屬中醫脾肝腎氣血虛證,屬“血癥”、“虛勞”范疇。其病因與外傷勞倦,情志過激,辛辣好酒等有關。依據中醫脾為后天之本,生化之源,統血攝血;腎為先天之本,主骨生髓;肝藏血,肝腎同源發病機理,前瞻性擬定了具有健脾益氣,滋肝補腎,養血攝血功效的處方。

8.1資料與方法

8.1.1臨床資料

2006年1月~2006年9月本院隨機收住來自全國各地的血友病(脾肝腎氣血虛證)患者65例,男64例(98.46%),女1例(1.33%)。中位年齡12.6(0.8~56)歲。有遺傳史者18例(27.69%),遺傳史不明者47例(72.31%)。中醫證候及舌脈象表現見表1。

65例中,血友病A56例(86.15%)、血友病B9例(14.85%),其中重型18例(27.69%)、中型30例(46.15%)、輕型17例(26.15%)、無亞臨床型。

8.1.2診斷標準

采用張之南主編的血液病診斷及療效標準,以Ⅷ因子活性(FⅧ∶C)、FⅨ∶C、FⅪ∶C測定為主,結合遺傳史,自發或外傷后出血不止等臨床表現,并可排除獲得性凝血因子缺乏癥及血管性血友病,進行診斷。并進一步按FⅧ∶C、FⅨ∶C的高低,區分為重型(<1%)、中型(≥2%~<5%)、輕型(≥5%~<25%)和亞臨床型(≥25~<50%)。

8.1.3納入標準

對隨機收住,在不用濃縮Ⅷ、Ⅸ因子及血漿等血液制品的條件下,采用以復方血友膠囊中藥為主,出血時聯用止血合劑治療18天,檢驗資料完整的病例,納入觀察統計對象。

8.1.4、排除標準

對隨機收住的患者,全部進行血、尿常規、肝腎功、心電圖、FⅧ∶C、FⅨ∶C、FⅪ∶C檢查。對個別年齡較大、女性患者以及皮膚、粘膜出血為主而關節、肌肉出血較少者,通過Ⅷ因子抗原(FⅧ∶Ag)、血管性血友病因子抗原(vWF∶Ag)、出血時間等檢查,排除獲得性Ⅷ因子減少癥及血管性血友病(vWD)。

8.1.5治療方法

隨機收住的65例血友病(脾肝腎氣血虛證)患者,在未用濃縮Ⅷ、Ⅸ因子及血漿等血液制品的條件下,服用復方血友膠囊,治療18天,復查效果。出血者臨時聯用止血合劑250ml,靜滴,每日1~2瓶。出院后繼續服用2~6個月,每3個月復查凝血因子,隨訪長期療效。

8.6凝血因子活性檢測方法:

用一期法檢測FⅧ∶C、FⅨ∶C、FⅪ∶C。三種凝血因子缺乏血漿及基質血漿均購自美國飛世爾科學公司。

8.7療效判斷標準:

(1)觀察治療前后臨床主要證候和舌脈象變化;

(2)觀察治療前后FⅧ、FⅨ變化。

為了排除檢驗誤差,并結合長期療效觀察,暫訂血友病A(B)治療18天后,復查FⅧ∶C(FⅨ∶C)較治療前提高0.3%以上者為有效,<0.3%者為效果不明顯。

8.8不良反應:

治療前和治療18天后分別檢測臨床表現、心電圖、肝腎功、血糖、血、尿常規以及電解質指標的變化,判斷藥物不良反應。

8.9統計學分析:

以SPSS11.0統計軟件進行統計學分析,組間比較采用配對t檢驗和X2檢驗及秩和檢驗。

8.10結果:

1、臨床證候及舌脈象變化(表1)。

65例血友病(脾肝腎氣血虛證)治療18天后,除肌肉萎縮變化不明顯外,其余證候及舌脈象均顯著好轉,恢復正常者均值56.2例(86.46±7.06%),與治療前22.7例(34.92±7.89%)相比,有顯著性差異,p<0.01。

2、治療前后凝血因子活性的變化(表2)。

血友病A56例,治療18天后與治療前相比,FⅧ:C、FⅨ:C、FⅪ:C均有顯著性差異(p<0.01)。血友病B9例,治療18天后與治療前相比,FIX:C有顯著性差異(p<0.01),FⅧ:C、FⅪ:C無差別(p>0.05)。近期有效62/65例(95.38%),無效3/65例(4.62%),其中1例進一步檢查Ⅷ因子抗體為0.75Bethesdo?U/ml血漿,另2例治療時間僅2周。

表1:復方血友膠囊治療血友病(脾肝腎氣血虛證)18天主要證候及舌脈象變化

表2:治療血友病(脾肝腎氣血虛證)18天后凝血因子活性變化

表3:65例血友病(脾肝腎氣血虛證)治療前后安全性檢查

3、治療前后血紅蛋白變化:

65例患者的血紅蛋白的均值由治療前(110±18.17)g/L(40g/L~135g/L)上升為(122.09±13.32)g/L(90g/L~140g/L),P<0.05,有差異。

4、不良反應:隨機收住的65例血友病(脾肝腎氣血虛證)患者,除4例(6.15%)因輸液速度較快,出現頭暈、惡心,減慢輸液速度后癥狀消失外,其余病例無明顯不適。用藥前后復查肝腎功、心電圖、電解質、血糖及血、尿常規等。治療前檢查:除3例丙型肝炎ALT輕度升高外,其余檢測均正常。用藥18天后各項檢查均正常(表3),P﹥0.05。

5、隨訪結果:26人出院后繼續服用復方血友膠囊2~6個月,在當地復查凝血因子,其結果均呈指數式上升,上升幅度與用藥時間呈正相關(圖1),其中血友病A24例,服藥2個月、3個月及6個月FⅧ∶C由治療前的(3.25±2.91)%依次上升到(6.31±2.16)%、(8.36±1.06)%、(16.38±2.71)%,最高21.9%,與治療前相比,有顯著性差別(P<0.01)。血友病B2例,服藥2個月、6個月,復查FⅨ∶C由治療前(4.15±2.26)%分別上升到7.8%、11.6%,因例數少,未做統計學分析。

6、討論:

血友病屬中醫“血癥”“虛勞”范疇,已列入國家特殊慢性疾病,是醫學界公認的疑難病研究課題,探討新方法勢在必行。

中醫治病的核心理論是辨證立方,治病求本。申請人認為血友病患者的倦怠無力、肌肉萎縮、反復出血屬脾氣虛;腰膝酸軟、關節腫痛、畸形屬腎虛;肢體麻木、肌腱攣縮、伸屈受限屬肝虛;反復出血、面色不華、舌淡脈虛等癥候屬氣血虛。中醫認為脾為后天之本,生化之源,益氣養血、統血攝血,益氣血友;腎為先天之本,肝藏血,主筋,肝腎同源。二本旺盛,則氣血充足。因此脾肝腎氣血虛是血友病的發病病機。依據辯證立方,治病求本,標本兼治原則前瞻性的擬定了處方。

方中黃芪補氣升陽,紫河車補益陰陽氣血,二者為君藥。健脾補腎、益氣養血攝血。當歸補血調經,活血止痛;生地清熱涼血滋陰;白芍柔肝止痛,養血斂陰;蒼術燥濕健脾,以上四味為臣藥,協助君藥健脾補肝,益氣養血,滋陰養血。仙鶴草、茜草、白茅根、川芎、元胡、海馬六味為佐藥。其中仙鶴草收澀止血;茜草涼血止血、祛瘀通淋;白茅根涼血止血,清熱利尿,三者涼血、止血、清熱,協助君臣藥清熱,血清則涼,血不外溢于脈外。川芎活血通徑,祛風止痛;元胡活血行氣止痛,二者防止君臣藥補氣過度,脈管滯澀不暢而血瘀,補中有行。海馬溫腎壯陽,化結消腫;以上六味為佐藥,溫陽通脈,防止涼血太過,脈絡不通,同時補脾肝腎二本,以生精血,發揮助君臣,防過度作用。甘草味甘平,入十二經,補脾益氣,解毒緩急,通行十二經脈,和中之國老,引藥直達病所。由于組方合理,君臣佐使配伍得當,達到了病、癥、方藥統一,共奏健脾益腎,滋肝補腎,養血攝血之功效。65例血友病(脾肝腎氣血虛證)患者,服用18天,取得了良好治療效果,總結如下。

7、臨床療效總結:

65例血友病(脾肝腎氣血虛證)服用18天,主要臨床證候及舌脈象恢復正常者均值56.2例(86.46±7.06%),與治療前22.7例(34.92±7.89%)相比,有顯著性差異(p<0.01)。除肌肉萎縮恢復較慢29例(44.62%)外,出血、關節腫痛、面色不華、舌脈象、腰膝酸軟、倦怠無力均恢復正常,均值達53例(91.11%)與治療前相比,有顯著性差異(p<0.01)。

1、65例血友病(脾肝腎氣血虛證)服用18天,其中血友病A56例,Ⅷ因子由治療前均值(3.32±2.21)%上升到(5.64±1.96)%,治療前后相比,有顯著性差異(p<0.01)。血友病B9例,IX因子由治療前均值(4.92±1.81)%上升到(5.64±1.96)%,前后相比,有顯著性差異(p<0.01)。65例血友病總有效率95.38%(62/65例),無效率4.62%(3/65例)。

2、長期隨訪:65例血友病(脾肝腎氣血虛證)治療18天出院后繼續服復方血友膠囊2~6個月者26例,其中血友病A24例,服藥2個月、3個月及6個月者,FⅧ均值由治療前的(3.25±2.91)%分別上升到(6.31±2.16)%、(8.36±1.06)%、(16.38±2.71)%,與治療前相比,有顯著性差別(P<0.01)。血友病B2例,服藥2個月、6個月,Ⅸ因子由治療前(4.15±2.26)%分別上升到7.8%、11.6%。

3、65例血友病(脾肝腎氣血虛證)服用18天,血紅蛋白的均值由治療前(11.52±18.17)g/L(40g/L~135g/L)上升為(122.09±13.32)g/L(90g/L~140g/L),有差異(P<0.05)。

4、65例血友病(脾肝腎氣血虛證)服用復方血友膠囊18天,復查肝腎功、電解質、血糖、心電圖等均未見異常。

通過65例血友病(脾肝腎氣血虛證)臨床觀察,說明復方血友膠囊是一種安全、有效的中藥方劑,有良好、廣闊的廣用前景。

參考文獻:

【1】葉仕高,內科學,第6版,北京:人民衛生出版社,2004:663-666。

【2】張之南主編,血液病診斷及療效標準,第2版,北京:科學出版社,1998:304-311。

【3】沈丕安編著,中藥藥理與臨床運用,[M].北京:人民衛生出版社,2006,201~202。

9、典型病例:

病例1:血友病A并發Ⅷ因子抗體新療法一月痊愈

患者:熊××,男,83歲,湖北襄陽鐵路二院。2013年年2月27日以血友病A并發Ⅷ因子抗體,全身多部位反復出血12年之病史就診陜西醫大血友病研究院醫大醫院,采用服用復方血友膠囊結合非血液制品治療一月,病情好轉,出血停止。經申請人醫院與第四軍醫大學西京醫院的檢查,各項凝血因子都已恢復正常(見下表),特別是Ⅷ因子由入院時2.1%提高到269%,且體內抗體已經清除,身體恢復健康。

中西醫結合非血液制品新療法治療前后凝血因子恢復經過

病例2:血友病血囊腫術后傷口愈合、FⅧ恢復正常(86%)

崔××,女,28歲,陜西銅川籍,2012年6月5日,以“右股部包塊”之主訴就診。FⅧ3.8%,APTT60.6秒;B超示右股部皮下可見5.8﹡2.8*4.2cm3低回音區,邊界清。因此診斷為血友病A并右股部血囊腫。

采用服用復方血友膠囊結合非血液制品療法綜合治療方案進行止血、消炎、消腫、提升因子活性、手術切除血囊腫、換藥等,治療26天,傷口愈合,FⅧ由3.8%上升為86%出院。

病例3:血友病A治療三周FⅧ由1.0%上升到172%

安××,女,寧夏靈武市人,1970年出生。一歲時,出現皮膚紫斑。六年前,生產時出血過多,之后兩年內經常出現皮膚紫斑、青紫塊。月經量偏多。2013年8月在銀川分院檢查第八凝血因子活性:Ⅷ5.57%,Ⅸ40%,Ⅺ40%。

醫院了解了患者既往病史,同時檢查凝血因子活性為Ⅷ1.0%,Ⅸ72%,Ⅺ75%,APTT延長至60.5S,CT延長時間為150分。抗“0”(+),C-反應蛋白(+),B超顯示:左股內側3.2*3.3*5.7cm低回音區,右膝關節3.2*3.1*4.2cm低回音區。因此診斷患者為:血友病A、左膝關節出血,外傷后左股部血腫。

西安醫大醫院依據患者情況,運用服用復方血友膠囊結合非血液制品療法綜合治療。2013年9月21日,患者左膝膝關節恢復良好,股部腫痛消失,可以自行走動。同時檢查第八凝血因子活性為32%。

2013年9月28日,患者左膝關節伸屈基本正常。檢查第八凝血因子活性為172%,凝血因子抗體為0。因子恢復正常出院。

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