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一種邳州白蒜組織培養方法以及培養基組合.pdf

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一種 邳州 組織培養 方法 以及 培養基 組合
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摘要
申請專利號:

CN201710281468.6

申請日:

20170425

公開號:

CN106937600A

公開日:

20170711

當前法律狀態:

有效性:

審查中

法律詳情:
IPC分類號: A01H4/00 主分類號: A01H4/00
申請人: 江蘇省農業科學院
發明人: 郭文琦,韓曉勇,張培通,殷劍美,李春宏,王立
地址: 210000 江蘇省南京市玄武區鐘靈街50號
優先權: CN201710281468A
專利代理機構: 北京超凡志成知識產權代理事務所(普通合伙) 代理人: 李進
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法律狀態
申請(專利)號:

CN201710281468.6

授權公告號:

法律狀態公告日:

法律狀態類型:

摘要

本發明公開了一種邳州白蒜組織培養方法以及培養基組合,涉及大蒜組織培養技術領域。本發明公開的邳州白蒜組織培養方法以經邳州白蒜鱗莖的莖尖為外植體進行莖尖誘導培養,再將形成的葉片進行葉片誘導培養,形成愈傷組織,愈傷組織再進行愈傷分化培養和生根培養,得到完整的邳州白蒜組織培養苗。該組織培養方法有效地提高了莖尖成活率、降低操作過程中的污染率,具有較高的增殖系數,可達42.5,有利于大蒜種苗例如邳州白蒜工廠化生產。

權利要求書

1.一種邳州白蒜組織培養方法,其特征在于,其包括:取邳州白蒜鱗莖的莖尖置于莖尖誘導分化培養基上進行莖尖誘導培養,形成葉片;將所述葉片置于葉片誘導分化培養基上進行葉片誘導培養,形成愈傷組織;將所述愈傷組織進行愈傷分化培養和生根培養,得到完整的邳州白蒜組織培養苗。2.根據權利要求1所述的邳州白蒜組織培養方法,其特征在于,所述莖尖誘導分化培養基和所述葉片誘導分化培養基的成分均為:MS+1~2mg/L6-BA+0.18~0.22mg/LNAA+6.8~7.2g/L瓊脂+28~32g/L蔗糖。3.根據權利要求1所述的邳州白蒜組織培養方法,其特征在于,所述愈傷分化培養包括:將所述愈傷組織切成塊后,接種于愈傷分化培養基中培養,得到叢生芽。4.根據權利要求3所述的邳州白蒜組織培養方法,其特征在于,所述愈傷分化培養基的成分為:MS+0.4~0.8mg/L6-BA+0.08~0.12mg/LNAA+6.8~7.2g/L瓊脂+28~32g/L蔗糖。5.根據權利要求3所述的邳州白蒜組織培養方法,其特征在于,所述生根培養包括:將高于3cm的所述叢生芽置于生根培養基中進行培養。6.根據權利要求5所述的邳州白蒜組織培養方法,其特征在于,所述生根培養基的成分為:MS+0.48~0.52mg/L6-BA+0.8~1.1mg/LNAA+0.018~0.022%活性炭+6.8~7.2g/L瓊脂+28~32g/L蔗糖。7.根據權利要求2-6中任一項所述的邳州白蒜組織培養方法,其特征在于,所述莖尖誘導培養、所述葉片誘導培養、所述愈傷分化培養和所述生根培養的培養條件為:溫度23-27℃、光照強度1200-1500lx、光照11-13h/d。8.根據權利要求2-6中任一項所述的邳州白蒜組織培養方法,其特征在于,在進行所述莖尖誘導培養之前,還包括無菌處理,所述無菌處理包括:取所述莖尖,置于流水中沖洗10-12min,用70-80%的酒精浸泡30-35s,再用消毒液滅菌15-20min,用無菌水沖洗3-5次。9.一種用于邳州白蒜組織培養的培養基組合,其特征在于,其包括如下培養基中的至少兩種:用于邳州白蒜鱗莖的莖尖進行莖尖誘導分化培養以形成葉片的莖尖誘導分化培養基;用于所述葉片進行葉片誘導培養以形成愈傷組織的葉片誘導分化培養基;用于所述愈傷組織進行愈傷分化培養以形成叢生芽的愈傷分化培養基;以及用于所述叢生芽進行生根培養的生根培養基。10.根據權利要求9所述的培養基組合,其特征在于,所述莖尖誘導分化培養基和所述葉片誘導分化培養基的成分均為:MS+1~2mg/L6-BA+0.18~0.22mg/LNAA+6.8~7.2g/L瓊脂+28~32g/L蔗糖;所述愈傷分化培養基的成分為:MS+0.4~0.8mg/L6-BA+0.08~0.12mg/LNAA+6.8~7.2g/L瓊脂+28~32g/L蔗糖;所述生根培養基的成分為:MS+0.48~0.52mg/L6-BA+0.8~1.1mg/LNAA+0.018~0.022%活性炭+6.8~7.2g/L瓊脂+28~32g/L蔗糖。

說明書

技術領域

本發明涉及大蒜組織培養技術領域,具體而言,涉及一種邳州白蒜組織培養方法以及培養基組合。

背景技術

大蒜是江蘇省邳州市農業的支柱產業,有2000多年的栽培歷史。邳州白蒜以其“個大、色白、光滑、圓實、不散瓣、辛辣度適中”而享譽海內外,是當地農民的主栽品種。近幾年的調研發現,邳州白蒜(Allium sativum L.)病害比較嚴重,給蒜農帶來很大的經濟損失,其原因,主要是由于邳州白蒜長期無性繁殖,造成品種特性退化,抗逆性變差,豐產性和抗病能力降低。離體愈傷誘導技術能有效地防止大蒜品種退化,提高繁殖系數,保持和提高大蒜的優良種性。

目前,大蒜組織培養研究國內外均有報道,但是多以莖尖、葉片等外植體直接進行誘導愈傷組織,這種組織培養方法存在莖尖成活率低及葉片污染率高等現象,進一步導致繁殖系數低、繁殖速度慢等問題。

發明內容

本發明的目的在于提供一種邳州白蒜組織培養方法,該組織培養方法不僅能夠提高莖尖成活率、降低操作過程中的污染率,還能夠提高邳州白蒜的繁殖系數和脫毒效果。

本發明的另一目的在于提供一種用于邳州白蒜組織培養的培養基組合,該培養基組合適用于對邳州白蒜進行組織培養不僅能夠提高莖尖成活率、降低操作過程中的污染率,還能夠提高邳州白蒜繁殖系數和繁殖速度。

本發明是這樣實現的:

一種邳州白蒜組織培養方法,其包括:

取邳州白蒜鱗莖的莖尖置于莖尖誘導分化培養基上進行莖尖誘導培養,形成葉片;

將葉片置于葉片誘導分化培養基上進行葉片誘導培養,形成愈傷組織;

將愈傷組織進行愈傷分化培養和生根培養,得到完整的邳州白蒜組織培養苗。

一種用于邳州白蒜組織培養的培養基組合,其包括如下培養基中的至少兩種:

用于邳州白蒜鱗莖的莖尖進行莖尖誘導分化培養以形成葉片的莖尖誘導分化培養基;

用于所述葉片進行葉片誘導培養以形成愈傷組織的葉片誘導分化培養基;

用于所述愈傷組織進行愈傷分化培養以形成叢生芽的愈傷分化培養基;

以及用于所述叢生芽進行生根培養的生根培養基。

與現有技術相比,本發明的有益效果是:

本發明提供的邳州白蒜組織培養方法,以邳州白蒜鱗莖的莖尖為外植體,在莖尖誘導分化培養基上進行莖尖誘導培養,形成葉片,將葉片在葉片誘導分化培養基上進行葉片誘導培養,形成愈傷組織;形成的愈傷組織再經分化培養和生根培養,得到完整的邳州白蒜組織培養苗。相對于現有的組織培養方法,本發明采用兩次誘導培養即莖尖誘導培養和在莖尖誘導培養之后的葉片誘導培養,有效地提高了莖尖成活率、降低操作過程中的污染率,還提高了邳州白蒜的繁殖系數(可達42.5%)和繁殖速度。本發明提供的邳州白蒜組織培養方法具有繁殖系數高、繁殖速度快、種苗脫毒效果好等優點;有利于大蒜種苗工廠化生產。

此外,本發明提供的培養基組合適用于邳州白蒜的組織培養過程中的各個培養階段,不僅能夠提高莖尖成活率、降低操作過程中的污染率,還能夠提高邳州白蒜種苗的繁殖系數、繁殖速度和脫毒效果。

附圖說明

為了更清楚地說明本發明實施例的技術方案,下面將對實施例中所需要使用的附圖作簡單地介紹,應當理解,以下附圖僅示出了本發明的某些實施例,因此不應被看作是對范圍的限定,對于本領域普通技術人員來講,在不付出創造性勞動的前提下,還可以根據這些附圖獲得其他相關的附圖。

圖1為本發明實施例1提供的邳州白蒜鱗莖莖尖的分化結果的照片;

圖2為本發明實施例1提供的葉片誘導分化形成愈傷組織的結果的照片;

圖3為本發明實施例1提供的愈傷組織形式叢生芽的結果的照片;

圖4為本發明實施例1提供的完整的邳州白蒜組織培養苗的照片。

具體實施方式

為使本發明實施例的目的、技術方案和優點更加清楚,下面將對本發明實施例中的技術方案進行清楚、完整地描述。實施例中未注明具體條件者,按照常規條件或制造商建議的條件進行。所用試劑或儀器未注明生產廠商者,均為可以通過市售購買獲得的常規產品。

下面對本發明的一種邳州白蒜組織培養方法以及培養基組合進行具體說明。

一方面,本發明提供了一種邳州白蒜組織培養方法,其包括如下步驟:

S1無菌處理步驟:

選取飽滿無病蟲害的上述邳州白蒜鱗莖,剝去上述邳州白蒜鱗莖的鱗片,取邳州白蒜鱗莖的莖尖,置于流水中沖洗10-12min,用70-80%的酒精浸泡30-35s,再用消毒液滅菌15-20min,用無菌水沖洗3-5次。

S2莖尖誘導培養步驟:

取經無菌處理后的邳州白蒜鱗莖的莖尖置于莖尖誘導分化培養基上進行莖尖誘導培養,形成邳州白蒜苗,取邳州白蒜苗的葉片用于后續步驟。

進一步地,莖尖的長度為1.0~1.5cm。

其中,莖尖誘導分化培養基的成分為:MS+1~2mg/L 6-BA+0.18~0.22mg/L NAA+6.8~7.2g/L瓊脂+28~32g/L蔗糖,pH值為5.8。

其中,莖尖誘導培養的條件為:溫度23-27℃、光照強度1200-1500lx、光照11-13h/d。培養時間為40d左右。

上述莖尖誘導分化培養基有利于邳州白蒜鱗莖的莖尖分化,莖尖的分化率可達60%以上,培養42d即可分化出邳州白蒜苗,株高可達6.8cm。

S3葉片誘導培養步驟:

將上述葉片置于葉片誘導分化培養基上進行葉片誘導培養,形成愈傷組織。

其中,葉片誘導分化培養基的成分為:MS+1~2mg/L 6-BA+0.18~0.22mg/L NAA+6.8~7.2g/L瓊脂+28~32g/L蔗糖,pH值為5.8。

其中,葉片誘導培養的條件為:溫度23-27℃、光照強度1200-1500lx、光照11-13h/d。培養時間為60d左右。

S4愈傷分化培養步驟:

將上述愈傷組織切成0.5cm左右的塊后,接種于愈傷分化培養基中培養,得到叢生芽。

其中,愈傷分化培養基的成分為:MS+0.4~0.8mg/L 6-BA+0.08~0.12mg/L NAA+6.8~7.2g/L瓊脂+28~32g/L蔗糖,pH值為5.8。

其中,愈傷分化培養的條件為:溫度23-27℃、光照強度1200-1500lx、光照11-13h/d。

上述的愈傷分化培養基有利于愈傷組織的分化,提高分化率,培養30d左右分化率可達69.2%,周期短,平均芽數2.55,平均高度為4.8cm,繼續培養60d左右,增殖系數達42.5,叢生芽的形態也較粗,有利于后期生長。

S5生根培養步驟:

將高于3cm、長勢健壯的叢生芽切下,置于生根培養基中培養,以使叢生芽長出根系,培養60d左右,形成完整的邳州白蒜組織培養苗。

其中,生根培養基的成分為:MS+0.48~0.52mg/L 6-BA+0.8~1.1mg/L NAA+0.018~0.022%活性炭+6.8~7.2g/L瓊脂+28~32g/L蔗糖,pH值為5.8。

其中,生根培養的條件為:溫度23-27℃、光照強度1200-1500lx、光照11-13h/d。

本發明提供的邳州白蒜組織培養方法,以邳州白蒜鱗莖的莖尖為外植體,經無菌處理后,在莖尖誘導分化培養基上進行莖尖誘導培養,形成葉片,將葉片在葉片誘導分化培養基上進行葉片誘導培養,形成愈傷組織;形成的愈傷組織再經分化培養和生根培養,得到完整的邳州白蒜組織培養苗。相對于現有的組織培養方法,本發明采用兩次誘導培養即莖尖誘導培養和在莖尖誘導培養之后的葉片誘導培養,有效地提高了莖尖成活率、降低操作過程中的污染率,還提高了邳州白蒜的繁殖系數(可達42.5)、繁殖速度和脫毒效果。

總之,本發明提供的邳州白蒜組織培養方法具有繁殖系數高、繁殖速度快、種苗脫毒效果好等優點。

另一方面,本發明提供了一種用于邳州白蒜組織培養的培養基組合,其包括如下培養基中的至少兩種:

用于邳州白蒜鱗莖的莖尖進行莖尖誘導分化培養以形成葉片的莖尖誘導分化培養基;

用于所述葉片進行葉片誘導培養以形成愈傷組織的葉片誘導分化培養基;

用于所述愈傷組織進行愈傷分化培養以形成叢生芽的愈傷分化培養基;

以及用于所述叢生芽進行生根培養的生根培養基。

進一步地,上述莖尖誘導分化培養基和上述葉片誘導分化培養基的成分均為:MS+1~2mg/L 6-BA+0.18~0.22mg/L NAA+6.8~7.2g/L瓊脂+28~32g/L蔗糖,pH值為5.8;

上述愈傷分化培養基的成分為:MS+0.4~0.8mg/L 6-BA+0.08~0.12mg/L NAA+6.8~7.2g/L瓊脂+28~32g/L蔗糖;

上述生根培養基的成分為:MS+0.48~0.52mg/L 6-BA+0.8~1.1mg/L NAA+0.018~0.022%活性炭+6.8~7.2g/L瓊脂+28~32g/L蔗糖。

本發明提供的培養基組合適用于邳州白蒜的組織培養過程中的各個培養階段:

莖尖誘導分化培養基適用于莖尖的誘導分化培養階段,使莖尖分化形成邳州白蒜苗,提高莖尖的分化率(61%以上)和存活率。

葉片誘導分化培養基的成分與莖尖誘導分化培養基保持一致,適用于上述形成的邳州白蒜苗的葉片進行葉片誘導分化培養,使葉片分化形成愈傷組織。

愈傷分化培養基適用于愈傷組織的愈傷分化培養階段,使愈傷組織分化形成大量的叢生芽,提高愈傷組織的分化率(61%以上)和出芽數。

生根培養基適用于叢生芽的生根培養階段,使叢生芽生根,形成完整的邳州白蒜組織培養苗。

上述的培養基組合針對邳州白蒜的組織培養過程中各培養階段的營養需求進行特異性地設置,從整體上提高了莖尖成活率、繁殖系數和繁殖速度,有效地降低操作過程中的污染率。

以下結合實施例對本發明的特征和性能作進一步的詳細描述。

實施例1

本實施例提供的邳州白蒜組織培養方法,包括如下步驟:

1.1無菌處理步驟:

選取飽滿無病蟲害的邳州白蒜(Allium sativum L.)鱗莖,剝去邳州白蒜鱗莖的鱗片,取邳州白蒜鱗莖的莖尖,置于流水中沖洗10min左右,置于超凈工作臺上,用75%的酒精浸泡30s,再用消毒液(84消毒液)滅菌15min,用無菌水沖洗5次。

1.2莖尖誘導培養步驟:

取1-1.5cm大小的、經無菌處理后的邳州白蒜鱗莖的莖尖接種于莖尖誘導分化培養基上進行莖尖誘導培養以形成葉片。

莖尖誘導培養的條件為:溫度25℃、光照強度1200-1500lx、光照12h/d。培養時間為40d左右。

其中,莖尖誘導分化培養基的成分為:MS+2mg/L 6-BA+0.2mg/L NAA+7g/L瓊脂+30g/L蔗糖,pH5.8。

觀察莖尖分化情況,結果如圖1所示,培養42d莖尖即可分化出邳州白蒜苗。

并以成分為MS+0.5mg/L 6-BA+0.2mg/L NAA+7g/L瓊脂+30g/L蔗糖(作為對照1組)、MS+2.0mg/L 2,4-D+0mg/L NAA+7g/L瓊脂+30g/L蔗糖(作為對照2組)、MS+0.5mg/L TDZ+0mg/L NAA+7g/L瓊脂+30g/L蔗糖(作為對照3組)的三種含有不同激素種類和濃度的莖尖誘導分化培養基作為對照,檢測莖尖的分化率和株高等指標,結果如表1所示。

表1不同激素濃度和激素種類對莖尖分化的影響

表1的結果顯示,莖尖在本實施例中的成分為MS+2mg/L 6-BA+0.2mg/L NAA+7g/L瓊脂+30g/L蔗糖,pH5.8的莖尖誘導分化培養基上的分化率可達61.5%,明顯高于對照1組、對照2組以及對照3組,平均株高達6.8cm,植株長勢粗。說明本發明實施例提供的莖尖誘導分化培養基有效地提高了莖尖的分化率和存活率。

1.3葉片誘導培養步驟:

將上述步驟得到邳州白蒜苗的葉片置于葉片誘導分化培養基上進行葉片誘導培養,以形成愈傷組織。

其中,葉片誘導分化培養基的成分為:MS+2mg/L 6-BA+0.2mg/L NAA+7g/L瓊脂+30g/L蔗糖,pH5.8。

其中,葉片誘導培養的條件為:溫度25℃、光照強度1200-1500lx、光照12h/d。培養時間為60d左右,結果如圖2所示,葉片分化出大量的愈傷組織塊。

1.4愈傷分化培養步驟:

將培養60d左右形成的愈傷組織切成小塊(0.5cm左右大小)后,接種于愈傷分化培養基中進行增殖培養,得到叢生芽。結果如圖3所示,愈傷組織小塊增生出大量的叢生芽。

其中,愈傷分化培養基的成分為:MS+0.8mg/L 6-BA+0.1mg/L NAA+7g/L瓊脂+30g/L蔗糖,pH5.8。

其中,愈傷分化培養的條件為:溫度25℃、光照強度1200-1500lx、光照12h/d。

并以含有濃度0.2mg/L(對照1組)、1.0mg/L(對照2組)、2.0mg/L(對照3組)的6-BA的三種愈傷分化培養基(對照組培養基的其余成分與本實施例的愈傷分化培養基相同)作為對照,統計愈傷組織的分化率(已分化愈傷的瓶數占接種總瓶數的百分比)、出芽數(每瓶產生的芽數)以及平均高度,結果如表2所示。

表2不同激素濃度對葉片愈傷誘導分化的影響

表2結果顯示,本實施例中的愈傷組織培養30d左右分化率達69.2%,平均芽數2.55,平均高度為4.8cm,得到的叢生芽的形態也較粗,各項指標數據均高于對照1組、對照2組以及對照3組;繼續培養60d左右,本實施例的增殖系數(由單個邳州白蒜的鱗莖莖尖擴增的組培苗的數量)達42.5。由此說明本發明實施例提供的愈傷分化培養基有效地提高了愈傷組織的分化率和出芽數。

1.5生根培養步驟:

將高于3cm、長勢健壯的叢生芽切下,置于生根培養基中培養,以使叢生芽長出根系,培養60d左右,得到完整的邳州白蒜組織培養苗(如圖4所示)。

其中,生根培養基的成分為:MS+0.5mg/L 6-BA+1.0mg/L NAA+0.02%活性炭+7.g/L瓊脂+30g/L蔗糖,pH5.8。

其中,生根培養的條件為:溫度25℃、光照強度1200-1500lx、光照12h/d。

實施例2

本實施例提供的邳州白蒜組織培養方法,包括如下步驟:

2.1無菌處理步驟:

同步驟1.1

2.2莖尖誘導培養步驟:

與步驟1.2基本相同,不同的是:莖尖誘導分化培養基的成分為:MS+1mg/L 6-BA+0.2mg/L NAA+7g/L瓊脂+30g/L蔗糖,pH5.8。

需要說明的是,在其他的實施例中,莖尖誘導分化培養基中的6-BA的濃度可以是1.2、1.4、1.6、1.8mg/L中的任意一種,只要在1-2mg/L的范圍內均可;NAA的濃度可以是0.18、0.19、0.21、0.22mg/L中的任意一種,只要在0.18~0.22mg/L的范圍內均可,瓊脂的濃度可以是6.8、6.9、7.1、7.2g/L中的任意一種,只要在6.8~7.2g/L范圍內均可;蔗糖的濃度可以是28、29、31、32g/L中的任意一種,只要在28~32g/L范圍內均可。

觀察莖尖分化情況,并統計分化率和株高。結果如表1所示。

本實施例中,莖尖培養42d左右分化出邳州白蒜苗,莖尖的分化率達62.5%,平均株高達4cm,植株長勢細。

2.3葉片誘導培養步驟:

與步驟1.3基本相同,不同的是:葉片誘導分化培養基的成分為:MS+1mg/L 6-BA+0.2mg/L NAA+7g/L瓊脂+30g/L蔗糖,pH5.8。

需要說明的是,在其他的實施例中,葉片誘導分化培養基中的6-BA的濃度可以是1.2、1.4、1.6、1.8mg/L中的任意一種,只要在1-2mg/L的范圍內均可;NAA的濃度可以是0.18、0.19、0.21、0.22mg/L中的任意一種,只要在0.18~0.22mg/L的范圍內均可,瓊脂的濃度可以是6.8、6.9、7.1、7.2g/L中的任意一種,只要在6.8~7.2g/L范圍內均可;蔗糖的濃度可以是28、29、31、32g/L中的任意一種,只要在28~32g/L范圍內均可。

2.4愈傷分化培養步驟:

與步驟1.4基本相同,不同的是:

愈傷分化培養基的成分為:MS+0.4mg/L 6-BA+0.1mg/L NAA+7g/L瓊脂+30g/L蔗糖,pH5.8。

需要說明的是,在其他的實施例中,愈傷分化培養基中的6-BA的濃度可以是0.45、0.5、0.6、0.75mg/L中的任意一種,只要在0.4~0.8mg/L的范圍內均可;NAA的濃度可以是0.08、0.09、0.11、0.12mg/L中的任意一種,只要在0.08~0.12mg/L的范圍內均可,瓊脂的濃度可以是6.8、6.9、7.1、7.2g/L中的任意一種,只要在6.8~7.2g/L范圍內均可;蔗糖的濃度可以是28、29、31、32g/L中的任意一種,只要在28~32g/L范圍內均可。

觀察并統計愈傷組織的分化率、出芽數以及平均高度,結果如表2所示。

在本實施例中,培養30d,愈傷組織的分化率可達61.1%,平均芽數1.91,平均高度為3.8cm,少量的培養苗的形態較粗。

2.5生根培養步驟:

同步驟1.5。

需要說明的是,在其他的實施例中,生根培養基中的6-BA的濃度可以是0.48、0.49、0.51、0.52mg/L中的任意一種,只要在0.48~0.52mg/L的范圍內均可;NAA的濃度可以是0.8、0.9、1.1mg/L中的任意一種,只要在0.8~0.11mg/L的范圍內均可;活性炭的濃度可以是0.018、0.019、0.021、0.022%中的任意一種,只要是在0.018~0.022%范圍內均可;瓊脂的濃度可以是6.8、6.9、7.1、7.2g/L中的任意一種,只要在6.8~7.2g/L范圍內均可;蔗糖的濃度可以是28、29、31、32g/L中的任意一種,只要在28~32g/L范圍內均可。

還需要說明的是,在其他的實施例中,莖尖誘導培養、葉片誘導培養、愈傷分化培養和生根培養的培養條件可以是如下情形:溫度可以是23、24、26、27℃中的任意一種,只要是23-27℃的范圍內均可;光照強度可以是1200、1300、1400、1500lx中的任意一種、只要是1200-1500lx的范圍內均可;光照可以是11、12、13(h/d)中的任意一種,只要是每天在光照11-13h的范圍內均可。

綜上,本發明提供的邳州白蒜組織培養方法,以邳州白蒜鱗莖的莖尖為外植體,經無菌處理后,在莖尖誘導分化培養基上進行莖尖誘導培養,形成葉片,將葉片在葉片誘導分化培養基上進行葉片誘導培養,形成愈傷組織;形成的愈傷組織再經分化培養和生根培養,得到完整的邳州白蒜組織培養苗。相對于現有的組織培養方法,本發明采用兩次誘導培養即莖尖誘導培養和在莖尖誘導培養之后的葉片誘導培養,有效地提高了莖尖成活率、降低操作過程中的污染率,還提高了邳州白蒜的繁殖系數(可達42.5)和繁殖速度,有利于大蒜種苗尤其是邳州白蒜的工廠化生產。

總之,本發明提供的邳州白蒜組織培養方法具有繁殖系數高、繁殖速度快、種苗脫毒效果好等優點。

以上所述僅為本發明的優選實施例而已,并不用于限制本發明,對于本領域的技術人員來說,本發明可以有各種更改和變化。凡在本發明的精神和原則之內,所作的任何修改、等同替換、改進等,均應包含在本發明的保護范圍之內。

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