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一種大烏嘴金針菜的提純復壯方法.pdf

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一種 大烏嘴 金針菜 提純 復壯 方法
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摘要
申請專利號:

CN201710174110.3

申請日:

20170322

公開號:

CN106937595A

公開日:

20170711

當前法律狀態:

有效性:

審查中

法律詳情:
IPC分類號: A01H4/00 主分類號: A01H4/00
申請人: 江蘇省農業科學院宿遷農科所
發明人: 周玲玲,張黎杰,田福發,姜若勇
地址: 223800 江蘇省宿遷市宿豫區環城北路16號
優先權: CN201710174110A
專利代理機構: 宿遷市永泰睿博知識產權代理事務所(普通合伙) 代理人: 徐曉燕
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法律狀態
申請(專利)號:

CN201710174110.3

授權公告號:

法律狀態公告日:

法律狀態類型:

摘要

本發明公開了一種大烏嘴金針菜的提純復壯方法,包括如下步驟:金針菜母株選擇,外植體剝取,對外植體進行消毒,初代培養,增殖培養,壯苗培養,生根培養,組培苗煉苗移栽,穴盤苗煉苗,本發明操作簡單、成本低、能有效的促使大烏嘴金針菜在短期內進行快速繁殖,在繁殖的過程中保持大烏嘴金針菜的原種性、穩定性及一致性,采用本發明的方式進行組織培養,在穴盤中培育2~3個月后,穴盤苗長至10~15?cm,苗健壯、挺拔和新鮮,葉片在8片葉以上,形態完整,葉片大小協調,葉色具原品種特性,有光澤,具有完整而發達的根系,根系充滿穴盤孔,能輕易拔出而基質不散,同一批次90%以上的苗高達到標準,適合宿遷地區大面積區域種植。

權利要求書

1.一種大烏嘴金針菜的提純復壯方法,其特征在于:包括如下步驟:(1)金針菜母株選擇選擇環境:需在連續晴天為3天以上的上午,無大風和空氣污染的情況下;對母株的形態要求:具有典型性狀,無病害,形態健壯;取株要求:離根部5cm處挖出整株,輕輕抖落根部泥土,減少植株表面附帶的微生物和害蟲;(2)外植體剝取剝去外層葉片,用刀片切取莖尖作為外植體,注意刀口要平整,切割次數盡量少,一般大小約為0.5cm*0.5cm*0.5cm;(3)對外植體進行消毒將莖尖放入大燒杯中,用水搖晃沖洗3次后,加入質量濃度3%洗衣粉或洗潔精溶液,再放在水龍頭下,流水沖洗2小時后用鑷子夾取,之后再用無菌水沖洗3次,然后放入3%的山農一號殺滅劑,滅菌18小時;(4)初代培養在無菌濾紙上將表面滅菌處理后的外植體擦干,切除外表皮,之后放入初代培養基中進行培養;3天后觀察有無污染,7~15天后,幼芽生出;所述初代培養基包括MS4.74g/L+蔗糖20g/L+瓊脂粉8g/L,pH5.8~6.0;(5)增殖培養將初代培養生出的幼芽切割掉,留下莖尖部分接入到增殖培養基1中進行培養;培養周期為45~60天,誘導出愈傷組織,然后再放入增殖培養基2中進行培養,培養周期為45~60天,誘導出新芽;所述增殖培養基1包括MS4.74g/L+6-BA3.0mg/L+NAA0.3~0.5mg/L+蔗糖20g/L+瓊脂粉8g/L,pH5.8~6.0;所述增殖培養基2包括MS4.74g/L+6-BA3.0mg/L+NAA0.1~0.2mg/L+蔗糖20g/L+瓊脂粉8g/L,pH5.8~6.0;(6)壯苗培養將經過增殖培養基2培養后的幼芽上的愈傷去除后,接入壯苗培養基中,培養周期為20~30天后,幼苗高度可達2~5cm;所述壯苗培養基包括MS4.74g/L+蔗糖20g/L+瓊脂粉8g/L,pH5.8~6.0;(7)生根培養將經過壯苗培養基培養后的幼苗中生長健壯、葉色正常、葉片舒展、適于生根的無根苗,接種在生根培養基中進行培養,培養20~30天后幼苗基部長出數根新根;所述生根培養基包括1/2MS39.3g/L+NAA0.2mg/L(或者IBA0.2mg/L)+蔗糖20g/L+瓊脂粉8g/L,pH5.8~6.0;(8)組培苗煉苗移栽①組培苗選取標準幼苗基部長出3條以上、長1~3cm的新根,長勢好、色白健壯,基本無愈傷組織,苗高一般3~5cm,葉片數一般不少于3片,作為組培苗;②組培苗煉苗將選取的組培苗,進行煉苗處理,先旋松瓶蓋1~3天,然后打開瓶蓋2~4天,之后煉苗3~7天;③移瓶用手指或鑷子輕輕取出瓶中的組培苗,放入清水內洗去瓊脂,并將其進行分級等待移栽,冬季水溫為20℃~25℃;④組培苗定植將經過移瓶清洗的組培苗放入混合基質的穴盤中,首先用竹簽在混合基質的穴盤每個穴位上打下能容納根系的孔,然后再把組培苗逐一放入每個穴位的孔中,最后覆土壓實,分類,分日期擺放整齊;所述混合基質包括泥碳土、珍珠巖和蛭石,三者的體積比為3:1:1,此時組培苗成了穴盤苗;(9)穴盤苗煉苗將穴盤苗放在溫室大棚中,先用遮陽網覆蓋,第一天上午8:00-10:00進行采光、通風,然后每日逐漸增加采光和通風時間,7天后,待穴盤苗長出新根后,進行正常的管理,溫度保持在15~25℃,相對濕度保持在60~80%,移栽第4周~8周,每周噴施葉面肥一次,氮:磷:鉀=15:15:15,濃度為1000倍,移栽8周后,視穴盤苗生長情況,濃度逐漸增加;培育2~3個月,穴盤苗長至10~15cm,苗健壯、挺拔和新鮮,葉片在8片葉以上。

說明書

技術領域

本發明涉及植物組織培養技術領域,具體涉及一種大烏嘴金針菜的提純復壯方法。

背景技術

金針菜又名“黃花菜”,屬百合科萱草屬植物,具有豐富的營養成分,與香菇、木耳、冬筍,同為素菜中的珍品。主要分布在江蘇、湖南、湖北、四川等地,宿遷是江蘇省金針菜主要產地之一,尤以“大烏嘴”花蕾長而粗壯,色澤黃亮,肉質緊實,口感甜香脆,品質優而聞名中外;然而,由于一直采用傳統的栽培技術,忽視了大烏嘴的提純復壯工作,導致其混雜嚴重、種性退化、品質和產量下降;針對這一問題,本發明提供一種大烏嘴金針菜組培快繁方法,包括外植體的建立、啟動培養、繼代培養、生根培養、煉苗和移栽等步驟。

發明內容

本發明針對背景技術中的不足,提供一種大烏嘴金針菜的提純復壯方法,目的在于:促使大烏嘴金針菜能在短期內進行快速繁殖,在繁殖的過程中保持大烏嘴金針菜的原種性、穩定性及一致性。

本發明的目的是通過如下途徑實現的:

一種大烏嘴金針菜的提純復壯方法,包括如下步驟:

(1)金針菜母株選擇

選擇環境:需在連續晴天為3天以上的上午,無大風和空氣污染的情況下;

對母株的形態要求:具有典型性狀,無病害,形態健壯;

取株要求:離根部5cm處挖出整株,輕輕抖落根部泥土,減少植株表面附帶的微生物和害蟲;

(2)外植體剝取

剝去外層葉片,用刀片切取莖尖作為外植體,注意刀口要平整,切割次數盡量少,一般大小約為0.5 cm*0.5 cm *0.5 cm;

(3)對外植體進行消毒

將莖尖放入大燒杯中,用水搖晃沖洗3次后,加入質量濃度3%洗衣粉或洗潔精溶液,再放在水龍頭下,流水沖洗2小時后用鑷子夾取,之后再用無菌水沖洗3次,然后放入3%的山農一號殺滅劑,滅菌18小時;

(4)初代培養

在無菌濾紙上將表面滅菌處理后的外植體擦干,切除外表皮,之后放入初代培養基中進行培養;3天后觀察有無污染,7~15 天后,幼芽生出;所述初代培養基包括MS 4.74g/L +蔗糖20g /L+瓊脂粉8g/L,pH 5.8~6.0;

(5)增殖培養

將初代培養生出的幼芽切割掉,留下莖尖部分接入到增殖培養基1中進行培養;培養周期為45~60 天,誘導出愈傷組織,然后再放入增殖培養基2中進行培養,培養周期為45~60天,誘導出新芽;所述增殖培養基1包括MS 4.74g/L+6-BA3.0mg/L+ NAA 0.3~0.5mg/L+蔗糖20g /L+瓊脂粉8g/L,pH 5.8~6.0;所述增殖培養基2包括MS 4.74g/L +6-BA3.0mg/L +NAA 0.1~0.2mg/L+蔗糖20g /L+瓊脂粉8g/L,pH 5.8~6.0;

(6)壯苗培養

將經過增殖培養基2培養后的幼芽上的愈傷去除后,接入壯苗培養基中,培養周期為20~30天后,幼苗高度可達2~5cm;所述壯苗培養基包括MS 4.74g/L +蔗糖20g /L+瓊脂粉8g/L,pH 5.8~6.0;

(7)生根培養

將經過壯苗培養基培養后的幼苗中生長健壯、葉色正常、葉片舒展、適于生根的無根苗,接種在生根培養基中進行培養,培養20~30天后幼苗基部長出數根新根;所述生根培養基包括1/2MS 39.3g/L + NAA 0.2 mg/L(或者IBA 0.2 mg/L)+蔗糖20g /L+瓊脂粉8g/L, pH 5.8~6.0;

(8)組培苗煉苗移栽

① 組培苗選取標準

幼苗基部長出3條以上、長1~3 cm的新根,長勢好、色白健壯,基本無愈傷組織,苗高一般3~5 cm,葉片數一般不少于3片,作為組培苗;

② 組培苗煉苗

將選取的組培苗,進行煉苗處理,先旋松瓶蓋1~3天,然后打開瓶蓋2~4天,之后煉苗3~7 天;

③ 移瓶

用手指或鑷子輕輕取出瓶中的組培苗,放入清水內洗去瓊脂,并將其進行分級等待移栽,冬季水溫為20 ℃~25 ℃;

④ 組培苗定植

將經過移瓶清洗的組培苗放入混合基質的穴盤中,首先用竹簽在混合基質的穴盤每個穴位上打下能容納根系的孔,然后再把組培苗逐一放入每個穴位的孔中,最后覆土壓實,分類,分日期擺放整齊;

所述混合基質包括泥碳土、珍珠巖和蛭石,三者的體積比為3:1:1,此時組培苗成了穴盤苗;

(9)穴盤苗煉苗

將穴盤苗放在溫室大棚中,先用遮陽網覆蓋,第一天上午8:00-10:00進行采光、通風,然后每日逐漸增加采光和通風時間,7天后,待穴盤苗長出新根后,進行正常的管理,溫度保持在15~25℃,相對濕度保持在60~80%,移栽第4周~8周,每周噴施葉面肥一次,氮: 磷: 鉀=15:15:15,濃度為1000倍,移栽8周后,視穴盤苗生長情況,濃度逐漸增加;培育2~3個月,穴盤苗長至10~15cm,苗健壯、挺拔和新鮮,葉片在8片葉以上。

本發明的有益效果:

本發明操作簡單、成本低、能有效的促使大烏嘴金針菜在短期內進行快速繁殖,在繁殖的過程中保持大烏嘴金針菜的原種性、穩定性及一致性,采用本發明的方式進行組織培養,在穴盤中培育2~3個月后,穴盤苗長至10~15 cm,苗健壯、挺拔和新鮮,葉片在8片葉以上,形態完整,葉片大小協調,葉色具原品種特性,有光澤,具有完整而發達的根系,根系充滿穴盤孔,能輕易拔出而基質不散,同一批次90%以上的苗高達到標準,并且無病蟲害,經過多次實驗反復研究表明,本發明重復利用率高,適合宿遷地區大面積區域種植。

具體實施方式

下面結合實施例對本發明作進一步的描述。

實施例

準備工作,購買濟南普朗特生物科技有限公司生產的山農一號(III型),許可證號:201300720;購買上海雨涵生物科技有限公司生產的MS培養基,編號為A0025-500G;購買濟南普朗特生物科技有限公司生產的1/2MS干粉培養基,許可號:20120805;制作初代培養基:稱取MS 4.74g/L +蔗糖20g /L+瓊脂粉8g/L溶于蒸餾水中,調節pH 5.8~6.0; 制作增殖培養基1:在制作完成的初代培養基中+6-BA 3.0mg/L+ NAA 0.3~0.5mg/L,制作增殖培養基2:在制作完成的初代培養基中+6-BA 3.0mg/L + NAA 0.1~0.2mg/L;制作壯苗培養基: 與初代培養基相同;制作生根培養基: 1/2MS 39.3g/L + NAA 0.2 mg/L或IBA 0.2 mg/L+蔗糖20g /L+瓊脂粉8g/L溶于蒸餾水中,調節pH 5.8~6.0;所述一種大烏嘴金針菜的提純復壯方法,包括如下步驟:(1)金針菜母株選擇:需在連續晴天為3天以上的上午,無大風和空氣污染的情況下;母株具有典型性狀,無病害,形態健壯;離根部5cm處挖出整株,輕輕抖落根部泥土,減少植株表面附帶的微生物和害蟲;(2)外植體剝取:剝去外層葉片,用刀片割去根系2-5cm,直接剝取莖尖做外植體,一般大小約為0.5 cm*0.5 cm *0.5 cm;(3)外植體消毒: 將莖尖放入大燒杯中,用水搖晃沖洗3次后,加入質量濃度3%洗衣粉或洗潔精溶液,流水沖洗2小時后用鑷子夾取,之后再用無菌水沖洗3次,然后放入3%的山農一號殺滅劑,滅菌18小時;所述山農一號是一種殺滅劑,可以直接從市場中買到;(4)初代培養,用無菌濾紙將滅菌處理后的外植體表面擦干,在不銹鋼托盤上切割掉外表層,之后放入初代培養基中進行培養;3天后檢查有無污染,初代培養7~15 天后,幼芽生出;(5)增殖培養:將初代培養生出的幼芽切除,留下莖尖部分接種到增殖培養基1中進行培養;培養周期為45~60 天,誘導出愈傷組織,然后再放入增殖培養基2中進行培養,培養周期為45~60天,誘導出新芽;(6)壯苗培養:將經過增殖培養后的新芽上的愈傷切除后,接入壯苗培養基中,培養周期為20~30天后,幼苗高度可達2~5 cm;(7)生根培養:選取經過壯苗培養后的幼苗中生長健壯、葉色正常、葉片舒展、適于生根的無根苗,接種在生根培養基中進行培養,培養20~30天后幼苗基部長出數根新根;(8)組培苗煉苗移栽:①組培苗選取標準:幼苗基部長出3條以上、長1~3 cm的新根,長勢好、色白健壯,根長適中,基本無愈傷組織,苗高一般3~5 cm,葉片數一般不少于3片; ②煉苗:將選取的組培苗,先旋松瓶蓋1~3天,然后打開瓶蓋2~4天,之后煉苗3~7 天;③移瓶:用手指或鑷子輕輕取出瓶中的組培苗,放入清水內洗去瓊脂,并將其進行分級等待移栽,冬季水溫為20 ℃~25 ℃;④定植:將經過移瓶清洗的組培苗移入混合基質的穴盤中,首先用竹簽在混合基質的穴盤每穴中間打下能容納根系的孔,然后再把組培苗逐一放入孔中,最后覆土壓實,分類,分日期擺放整齊;所述混合基質包括泥碳土、珍珠巖和蛭石,三者之間的比例為3:1:1,此時完成組培苗向穴盤苗轉化;(9)穴盤苗煉苗:將穴盤苗放在溫室大棚中,先用遮陽網覆蓋,第一天上午8:00-10:00進行采光、通風,然后每日逐漸增加采光和通風時間,7天后,待穴盤苗長出新根后,進行正常的管理,溫度保持在15~25 ℃,相對濕度保持在60~80%,移栽第4周~8周,每周噴施葉面肥(氮: 磷: 鉀=15:15:15,濃度為1000倍)一次,移栽8周后,視穴盤苗生長情況,濃度逐漸增加;培育2~3個月,穴盤苗長至10~15 cm,苗健壯、挺拔和新鮮,葉片在8片葉以上。

說明書中MS是指上海雨涵生物科技有限公司生產的MS培養基,編號為A0025-500G;6-BA是指6-芐氨基腺嘌呤;NAA是指萘乙酸;IBA是指吲哚丁酸。

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