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牛蒡苷元用于制備治療動脈粥樣硬化或心肌梗死藥物中的用途.pdf

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牛蒡 用于 制備 治療 動脈粥樣硬化 心肌梗死 藥物 中的 用途
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摘要
申請專利號:

CN201110172482.5

申請日:

20120611

公開號:

CN103479616A

公開日:

20140101

當前法律狀態:

有效性:

有效

法律詳情:
IPC分類號: A61K31/365,A61P9/10 主分類號: A61K31/365,A61P9/10
申請人: 魯南制藥集團股份有限公司
發明人: 趙志全,姚景春,王恩力,孫敬俠,劉奮,董艷紅
地址: 276005 山東省臨沂市紅旗路209號
優先權: CN201110172482A
專利代理機構: 代理人:
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法律狀態
申請(專利)號:

CN201110172482.5

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法律狀態公告日:

法律狀態類型:

摘要

本發明公開了牛蒡苷元在制備治療動脈粥樣硬化或心肌梗死藥物中的用途,屬于醫藥領域。本發明所公開的牛蒡苷元的新醫藥用途中,牛蒡苷元的每日給藥量為0.001~200mg/kg,牛蒡苷元可以制備成口服制劑、注射制劑或外用制劑,其中以牛蒡苷元的口服微乳制劑效果最佳;牛蒡苷元用于動脈粥樣硬化或心肌梗死的治療時,具有副作用小、治療優勢明顯、患者用藥依從性高等優點,具有十分廣闊的醫學應用前景。

權利要求書

1.牛蒡苷元在制備治療動脈粥樣硬化或心肌梗死藥物中的用途。2.如權利要求1所述的用途,其特征在于牛蒡苷元具有抑制動脈粥樣硬化斑塊內新生血管生成的作用。3.如權利要求2所述的用途,其特征在于牛蒡苷元每天的給藥量為0.001mg/kg~200mg/kg。4.如權利要求1-3所述的用途,其特征在于牛蒡苷元為口服制劑、注射制劑或外用制劑。5.如權利要求4所述的用途,其特征在于所述制劑中牛蒡苷元的含量為0.1mg~100mg。6.如權利要求4所述的用途,其特征在于所述口服制劑選自片劑、口服微乳制劑、膠囊劑或緩釋片;所述注射制劑選自注射微乳制劑或注射液;所述外用制劑選自搽劑、凝膠劑、膏劑、軟膏劑或霜劑。7.如權利要求6所述的用途,其特征在于所述口服制劑為口服微乳制劑。8.如權利要求1所述的用途,其特征在于所述心肌梗死為動脈粥樣硬化引發的心肌梗死。

說明書

技術領域

本發明屬于醫藥領域,具體涉及一種治療動脈粥樣硬化或心肌梗死疾病的藥物。

背景技術

動脈粥樣硬化(Arteriosclerosis,AS)是一種與脂質代謝障礙有關的,以大中動脈內膜脂質沉著、粥樣斑塊形成、纖維組織增生、管壁硬化為特征的全身性疾病。動脈粥樣硬化的危害一方面可以造成血管淤積狹窄,供血不足,另一方面更大的危害在于斑塊破裂,形成血栓,造成機體組織缺血、缺氧,嚴重者造成患者死亡。動脈粥樣硬化患者多見于老年人,40~49歲的AS檢出率分別為58.36%和88.31%,并隨著年齡的增加而增加,它是一種嚴重危害人類健康的常見病,其中冠狀動脈硬化引起的冠心病已經成為我國成人死亡率最高的疾病之一。

心肌梗死(myocardial?infarction,MI)是指急性、持續性缺血、缺氧(冠狀動脈功能不全)所引起的心肌壞死,可伴發心率失常、休克或心力衰竭等合并癥,可危及生命,目前其在中國的發病率逐年升高。心肌梗死90%以上是由于冠狀動脈粥樣硬化病變引起的血栓而引起的,心肌梗死的病因基礎為動脈粥樣硬化,因此治療心肌梗死首先要從根本上先治療動脈粥樣硬化。

目前,臨床上用于治療動脈粥樣硬化的藥物主要有(1)調血脂藥:主要是通過降低TC和LDL來緩解病情,其代表藥物為他汀類和膽汁酸結合樹脂類;(2)抗氧化劑:主要是對抗血液中氧自由基及ox-LDL以達到治療動脈皺樣硬化的目的,代表藥物有普羅布考(probucol)和維生素E;(3)多稀脂肪酸類(PUFA):分為N-6型多稀脂肪酸和N-3型多稀脂肪酸,該類藥物一方面是通過調節血脂,另一方面是通過抑制血小板聚集,擴張血管,改善微循環達到治療的目的;(4)粘多糖和多糖類:該類藥物能夠保護血管內皮細胞,阻止血管平滑肌細胞轉移和增殖,代表藥物有低分子量肝素和硫酸乙酰肝素。

上述藥物在治療動脈粥樣方面基本上都是通過降脂、抗氧化來減輕動脈粥樣硬化的程度,無法從根本上阻止斑塊的發展進程,也達不到穩定斑塊防止斑塊破裂的作用。新生血管有望成為動脈粥樣硬化治療的一個新靶點。Kapiotis等通過對來源于大豆提取的天然血管生成抑制劑genistein的研究,發現了血管生成抑制劑抗動脈粥樣硬化的另一種機制:抑制低密度脂蛋白(LDL)的氧化,保護血管內皮免遭氧化低密度脂蛋白的損傷,長期應用可預防動脈粥樣硬化的早期形成。目前研究證實LDL氧化后形成的ox-LDL能夠與自身抗體形成氧化低密度脂蛋白免疫復合物(OX-LDL-IC),后者在動脈粥樣硬化的發生和發展中起重要作用。牛蒡苷元抑制血管新生的同時抑制LDL的氧化,能夠有效治療動脈粥樣硬化。

“血管生成”則是指無發育完整中膜的新血管的形成,生理意義的血管形成在胚胎發育,創傷修復和側支循環代償缺血等方面發揮重要作用,而病理意義的血管形成,即血管生成異常則在動脈粥樣硬化、腫瘤生長及轉移、糖尿病性視網膜病變、風濕性關節炎等疾病的發生中發揮重要作用。越來越多的證據表明,血管生成在動脈粥樣硬化(AS)發生機制及其發展中發揮重要作用,研究表明:隨著動脈粥樣硬化嚴重程度的加重,血管內膜新生血管發生率也隨之提高,說明新生血管參與了動脈粥樣硬化(AS)的發生、發展。

牛蒡苷元為白色粉末或無色塊狀結晶,在氯仿、甲醇、乙醇等有機溶劑中易溶,熔點為111-112℃。不易揮發,空氣中不易被氧化,物理及化學性質均較為穩定。牛蒡苷元為木脂素類化合物,天然的牛蒡苷元是從菊科植物牛蒡的干燥果實牛蒡子中提取而來,但含量較少,但其前體物質牛蒡苷的含量在牛蒡子中含量很高,可通過轉化獲得大量的牛蒡苷元。已有文獻報道牛蒡苷元具有如下藥理活性:1)抗炎及免疫調節作用;2)抗病毒作用,包括HIV-1與流感病毒;3)誘導腫瘤細胞凋亡的作用;4)腎病及糖尿病、糖尿病并發癥治療作用;5)熱休克反應抑制作用;6)神經保護作用;7)擴張血管作用;8)血小板活化因子拮抗作用;9)抗老年性癡呆的作用;10)抑制K+攣縮的作用等。比如,Cho?J?Y,et?al.Immunomodulatory?effect?of?arctigenin,a?lignan?compound?on?tumor?necrosis?factor-α?and?nitric?oxide?production,and?lymphocyte?proliferation[J].Pharm?Pharmcol.1999;51(11):1267-1273.公開了牛蒡苷元具有抗炎及免疫調節作用;Gao?Y,et?al.Activity?of?in?vitro?anti-influenza?virus?of?arctigenin[J].Chinese?Traditional?and?Herbal?Drugs(中草藥).2002;33(8):724-726.公開了牛蒡苷元具有抗病毒的作用;Kim?S?H,et?al.Hepatoprotective?dibenzylbutyrolactone?lignans?of?Torreya?nucifera?against?CCl4-induced?toxicity?in?primary?cultured?rat?hepatocytes[J].Biol?Pharm?Bull.2003;26(8):1202-1205.公開了牛蒡苷元具有誘導腫瘤細胞凋亡的作用。

牛蒡苷元具有顯著的抗菌、抗病毒、抗腫瘤、抗PAF受體的作用,但目前并無牛蒡苷元可以治療動脈粥樣硬化或心肌梗死的報道。發明人通過實驗研究,發現牛蒡苷元對動脈粥樣硬化和心肌梗死能夠起到顯著的治療和預防效果,從而提出牛蒡苷元在制備治療/預防動脈粥樣硬化或心肌梗死的藥物中的應用。

發明內容

鑒于目前臨床上動脈粥樣硬化和心肌梗死的藥物治療只能通過降低血脂、抑制血小板聚集、改善微循環等方式進行,而動脈粥樣硬化的最大危害是斑塊不穩定破裂后內容物進入血管形成血栓,堵塞微小血管,造成機體局部組織缺血、缺氧甚至壞死(如心肌梗死)。為了克服上述現有技術的不足,本發明公開一種牛蒡苷元的新的醫藥用途,即牛蒡苷元在用于制備治療動脈粥樣硬化和心肌梗死的藥物中的用途。牛蒡苷元為天然的中藥單體,體外實驗顯示其具有很好的血管抑制效果,因此成為治療動脈粥樣硬化和心肌梗死的治療手段中的新視點,具有十分廣泛的醫藥應用前景。

本發明公開牛蒡苷元在制備治療動脈粥樣硬化或心肌梗死的藥物中的用途。

體外試驗證明牛蒡苷元能夠顯著抑制新生血管的生成,而新生血管對動脈粥樣硬化斑塊的發展作用重大,一方面新生血管能夠營養斑塊組織,使斑塊組織長大,另一方面由于斑塊內的新生血管只是一層內皮組織環繞而成,沒有結締組織等基質支持,血管容易破裂,破裂后血液進入斑塊內,進一步造成斑塊腫大,因此牛蒡苷元對新生血管的抑制作用能夠有效抑制動脈粥樣斑塊的發展。本發明實施例10中通過雞胚絨毛尿囊膜(CAM)模型確定牛蒡苷元在活體中對新生血管生成的影響,發現牛蒡苷元具有很強的新生血管生成的抑制作用,在很低的濃度即可顯著抑制血管的生成情況,并且其血管生成抑制作用呈現劑量依賴性。因此本發明所述的牛蒡苷元的醫藥用途中,牛蒡苷元的治療有效量可以為任意濃度。

本發明所述的醫藥用途中,牛蒡苷元可以制備成合適的制劑給藥。口服制劑如片劑、口服微乳制劑、顆粒劑、口服液、膠囊劑、緩釋片等,外用制劑如搽劑、凝膠劑、膏劑、軟膏劑、霜劑等,注射制劑如注射微乳、注射液。上述含有牛蒡苷元的藥物制劑中,每一制劑中含有牛蒡苷元的有效量為0.1mg-100mg。

牛蒡苷元制備成用于治療動脈粥樣硬化或心肌梗死藥物時,可以采用合適的給藥途徑給藥,如口服給藥、注射給藥或者制備成外用制劑局部用藥。口服給藥時優選將牛蒡苷元制備成片劑、膠囊劑、顆粒劑、口服液或口服微乳制劑,每日的用量為0.001~100mg/kg。注射給藥時,優選將牛蒡苷元制備成注射微乳、注射液等,每日的用量為0.001~25mg/kg。對于裸露在體表外部的血管生成性疾病,如皮膚瘤、黑色素瘤等,牛蒡苷元還可以制備成局部外用制劑給藥,優選的制劑為搽劑、凝膠劑、膏劑、軟膏劑、霜劑等,每日用量為0.01~200mg/kg。上述制劑均采用各種制劑常規的藥用輔料按照常規的制備工藝制備。

牛蒡苷元用于制備治療動脈粥樣硬化或心肌梗死的藥物時,以口服微乳制劑不良反應最小,效果最佳。本發明將牛蒡苷元制備成的微乳制劑,包括牛蒡苷元和微乳載體,平均粒徑為15-90nm,牛蒡苷元與微乳載體組成牛蒡苷元的微乳濃縮物。其中牛蒡苷元的微乳濃縮物以辛葵酸甘油脂為油相、以壬烷基酚聚氧乙烯醚作為乳化劑、以1,2-丙二醇作為助乳化劑的微乳載體制成。

牛蒡苷元制成微乳后能夠有效提高藥物的溶解度,提高生物利用度,經口服給藥后可經淋巴管吸收,克服首過效應及通過胃腸道上皮細胞膜的障礙,起效迅速,此外該劑型還適合不能吞服固體制劑的患者服用。本發明制備的微乳制劑由于其粒徑小,吸收快,亦可以通過注射方式給藥。

本發明所公開的的牛蒡苷元治療動脈粥樣硬化或心肌梗死疾病的用途,與現有技術相比具有以下治療優勢:

1、本發明中藥效實施例10證明了牛蒡苷元在很低的藥物濃度下即可顯著抑制血管生成情況,且呈現劑量依賴性。故牛蒡苷元用于治療動脈粥樣硬化或心肌梗死時,用量小,作用明顯。

2、本發明實施例11中證明了在兔動脈粥樣硬化模型中,牛蒡苷元具有良好的降脂作用,在減輕動脈粥樣硬化炎癥反應、抑制斑塊發展方面也有良好的效果,能夠有效的治療動脈粥樣硬化。本發明的實施例12中證明在大鼠心肌梗死模型中,牛蒡苷元對動脈粥樣硬化造成的心肌梗死有良好的治療效果,能夠有效減輕心肌損傷程度。

3、由于牛蒡苷元為天然提取產物,牛蒡苷元用于動脈粥樣硬化或心肌梗死相關疾病治療時,副作用和不良反應率低,不但可以降低患者的用藥費用,而且可以提高患者的用藥依從性。

4、牛蒡苷元用于動脈粥樣硬化或心肌梗死相關疾病治療時,其直接作用于血管生成,血管生成為許多疾病的發病病因和誘發因素,故其治愈后復發幾率低,可以大大提高患者的生存率。

5、牛蒡苷元用于動脈粥樣硬化或心肌梗死相關疾病治療時,可以制備成多種用藥劑型以適應不同適應癥的治療需要。故其可制備的制劑種類多,用藥適應癥廣,可降低并發癥的發生,具有重要的醫學應用前景。

附圖說明

附圖1為陰性對照組(未用牛蒡苷元)的CAM血管生成形態觀察。

附圖2為牛蒡苷元低劑量組的CAM血管生成形態觀察。

附圖3為牛蒡苷元中劑量組的CAM血管生成形態觀察。

附圖4為牛蒡苷元高劑量組的CAM血管生成形態觀察。

附圖5為動脈粥樣硬化模型硬化形態學觀察。

附圖6為牛蒡苷元高劑量組動脈粥樣硬化形態學觀察。

附圖7為心肌梗死模型組形態學觀察。

附圖8為牛蒡苷元低劑量心肌梗死形態學觀察。

附圖9為牛蒡苷元中劑量心肌梗死形態學觀察。

附圖10為牛蒡苷元高劑量心肌梗死形態學觀察。

具體實施方式

下面以具體實驗進一步說明本發明,但應該理解,本發明實施例并不以任何方式限制本發明。

實施例1片劑的制備

制備工藝:將牛蒡苷元和輔料微晶纖維素、羧甲基淀粉鈉混合均勻,加入適量的淀粉漿制軟材,然后過16目篩制粒。濕顆粒在60℃干燥,干顆粒過20目篩整粒,篩出干粒中的細粉,與硬脂酸鎂混勻,然后再與干顆粒混勻,壓片,每片約200mg,即得。

實施例2注射液的制備

牛蒡苷元????????????????????10g

吐溫80??????????????????????1g

石蠟注射用水????????????????1000mL

制備工藝:將10g牛蒡苷元和1g吐溫混合均勻,加注射用水至1000mL,分裝即得。

實施例3膠囊的制備

牛蒡苷元????????????????????100g

乳糖????????????????????????120g

玉米淀粉????????????????????130g

硬脂酸鎂????????????????????5g

制備工藝:將牛蒡苷元100g,乳糖120g和玉米淀粉130g在混合機中混合10-15分鐘,加入硬脂酸鎂5g混合1~3分鐘,裝入1000粒膠囊殼即可。

實施例4凝膠劑的制備

制備工藝:將卡波姆緩慢加入到處方量50%左右的水,邊加邊攪拌直至形成透明的凝膠基質,將牛蒡苷元加入處方量丙二醇中,攪拌均勻,再加入基質中,攪拌均勻,加入甘油、純化水至全量,三乙醇胺調節PH值至中性,即得。

實施例5微乳濃縮物

制備工藝:稱取處方量中鏈脂肪酸甘油酯、聚氧乙烯蓖麻油EL-40、1,2-丙二醇、無水乙醇,混合后攪拌均勻,然后加入牛蒡苷元溶解,也可以超聲波處理以加速溶解,得澄清濃縮液,即為牛蒡苷元微乳濃縮物。

實施例6微乳濃縮物

?組分 ??重量/g ?牛蒡苷元 ??10 ?PEG-2-硬脂酸酯 ??85 ?聚氧乙烯蓖麻油EL-40 ??60 ?1,2-丙二醇 ??60

制備工藝同實施例5。

實施例7微乳濃縮物

??組分 ??重量/g ??牛蒡苷元 ??1 ??月桂酰基聚乙二醇-32-甘油酯 ??20 ??聚氧乙烯蓖麻油EL-40 ??35 ??1,2-丙二醇 ??15

制備工藝同實施例5。

實施例8微乳濃縮物

??組分 ??重量/g ??牛蒡苷元 ??1 ??氫化椰油甘油酯 ??5 ??月桂酰基聚乙二醇-32-甘油酯 ??20 ??1,2-丙二醇 ??5 ??聚乙二醇3350 ??20

制備工藝:稱取處方量氫化椰油甘油脂、月桂酰基聚乙二醇-32-甘油酯、1,2-丙二醇、聚乙二醇3350,混合后攪拌均勻,然后加入牛蒡苷元溶解,也可以超聲波處理以加速溶解,得澄清濃縮液,即為牛蒡苷元微乳濃縮物。

實施例9微乳濃縮物

??組分 ??重量/g

??牛蒡苷元 ??5 ??PEG-2-硬脂酸酯 ??30 ??吐溫-20 ??50 ??1-己醇 ??20 ??PEG3350 ??25

稱取處方量PEG-2-硬脂酸酯、吐溫-20、1-己醇、PEG3350混合后攪拌均勻,然后加入牛蒡苷元溶解,也可以超聲波處理以加速溶解,得澄清濃縮液,即為牛蒡苷元微乳濃縮物。實施例10牛蒡苷元對雞胚絨毛尿囊膜血管生成的抑制作用

1.實驗材料

海蘭褐種雞蛋共50個,蛋重(65±10g),臨沂大成種禽有限公司提供,種蛋洗凈,75%乙醇擦拭干凈、晾干,置生化培養箱在(38±0.5)℃、相對濕度65%-70%環境中孵育,每日早晚各翻轉一次。從第3天起于檢卵燈下觀察種蛋生長情況,無血管出現者退出實驗(未受精、弱精、散黃及死蛋);牛蒡苷元微乳劑(自制)。

2.實驗方法

2.1實驗分組:雞胚發育至第8天,隨機分為4組。

2.2?CAM模型建立:

2.2.1假氣室的制備:

孵育第8天,酒精消毒氣室(大頭端)表面2cm×3cm區域,用牙科砂輪在蛋殼表面劃出凹痕,用眼科彎鑷小心揭去蛋殼,形成1.5cm×1.5cm的小窗。然后用一次性注射器(1mL在CAM上滴一滴生理鹽水,用注射器針頭透過鹽水滴在氣室膜上輕輕點刺一下,然后用針頭小心推開氣室膜并及時用眼科彎鑷夾住,在注射針頭協助下,輕輕揭去氣室膜,使CAM完全暴露,開窗成功的雞胚隨機分組。

2.2.2藥物載體的制備:

用移液槍吸取各濃度組的牛蒡苷元溶液各10μL,加于載體上,用生理鹽水作為陰性對照。將各組載體放入培養皿中,再置于生物安全柜中風干。

2.2.3藥物載體的植入:

將載體置于CAM中央血管稀少區,用無菌透明膠帶密封窗后繼續孵育,觀察雞胚的存活情況。

2.2.4結果的觀察:

雞胚發育48h后,由觀察窗加入甲醇/丙酮等體積混合固定液預固定15min,待CAM的血管完全凝固后,以載體為中心完整剪下CAM,置于生理鹽水的培養皿中,拍照。

2.2.5檢測指標及方法:

按表1就藥物對CAM血管生成的影響進行等級評估,記錄載體邊緣5mm內的血管數,并根據下列公式計算血管抑制率(inhibition?rate,IR)。

IR%=[陰性對照組血管平均數-實驗組血管平均數/陰性對照組血管平均數]×100%,凡屬趨向性生長的血管,即為載體從中心發出,與濾膜半徑的夾角小于45°者均予以計數,而穿行、繞行的血管則不算在內。

2.3統計學處理:

對等級評定結果進行等級分組資料的秩和檢驗,比較各組對CAM血管生成的影響。采用SPSS13.0統計軟件,CAM載體邊緣的微血管數以均數±標準差(χ±s)表示,采用One-WayANOVY單因素方差分析,比較組間差異,P<0.05為有顯著差異。

3.實驗結果

3.1牛蒡苷元對CAM血管生成影響的形態學觀察

從本發明的附圖可以看出,陰性對照組(附圖1所示)血管明顯生長,可見尿囊膜血管排列成車輻狀,類似樹葉的葉脈狀分布,大血管和小血管都明顯發育。與對照組相比較,牛蒡苷元低劑量組(附圖2所示)僅載體覆蓋區內部分血管生成被抑制,牛蒡苷元中劑量組(附圖3所示)載體覆蓋區內以及周圍血管部分血管生成均被抑制,牛蒡苷元高劑量組(附圖4所示)的血管生成明顯受抑制,載體覆蓋區及周圍血管網模糊,顏色變淺,血管分支處多出斷裂,密度減少,新生血管被破壞,出現溶血現象,甚至未見血管,出現空斑。可見,牛蒡苷元能夠表現出很強的血管生成抑制活性,并呈現劑量依賴性,即隨著血漿中牛蒡苷元濃度增大,其血管抑制活性越強。

3.2牛蒡苷元對CAM血管生成影響的等級評定

表1?藥物對CAM生成影響的判斷標準

表2?牛蒡苷元對CAM血管生成的影響統計(個)

由表2可見,各組雞胚的血管生長狀態等級不同,中劑量組與高劑量組為3+和4+陰性對照組和低劑量組都明顯增加,經檢驗發現,中、高劑量組與陰性對照組比較有顯著差異(P<0.05),說明牛蒡苷元對CAM血管新生有一定的抑制作用,并跟劑量正相關。

3.3牛蒡苷元對CAM血管密度的影響

表3?牛蒡苷元各劑量組作用CAM后膜上血管數統計(χ±s)

通過比較(表3),與陰性對照組相比較,低劑量組顯著性差異(P<0.05),而中、高劑量組的血管數有極顯著性差異(P<0.01)。與低劑量組相比,中劑量組的血管數差異顯著(P<0.05),高劑量組的微血管數差異極顯著(P<0.01),低、中和高劑量組的抑制率分別達到19.04%、52.17%和72.95%。血管統計的差異性比較和等級評定一致,提示牛蒡苷元具有抑制血管生成的作用并跟劑量正相關。

實施例11牛蒡苷元微乳對兔頸動脈粥樣硬化抑制作用

1.實驗目的

驗證牛蒡苷元微乳對兔頸動脈粥樣硬化抑制作用。

2.受試藥物

牛蒡苷元微乳:由山東新時代藥業有限公司提供,根據實施例6配制而成,濃度為50mg/ml,使用前用純化水稀釋為2.5mg/ml、7.5mg/ml和22.5mg/ml。

3.組別設置與給藥

3.1劑量設置(見表4)

表4?劑量設置

4.實驗方法

取40只健康新西蘭大白兔,體重為2.5~3.0kg,隨機分為正常對照組、模型對照組、牛蒡苷元微乳低、中、高劑量組共4組,每組8只,全部雄性,所有動物用記號筆在左耳描記阿拉伯數字以區分個體。動物先行灌胃高脂乳1個月,耳緣動脈取血檢測動物TG、TC升高后,戊巴比妥鈉30mg/kg耳緣靜脈注射麻醉,剔除頸部被毛,消毒、手術暴露動物左側頸總動脈2.5cm左右,用動脈夾先后夾閉血管近心端與遠心端,兩端之間保留血管長度為2cm左右,用胰島素注射針吸取1%濃度月桂酸鈉0.1ml注入血管,5min后松開遠心端血管夾,棉球壓迫止血后再松開近心端,縫合傷口,消毒處理后放回飼養籠。術后連續3天肌肉注射80萬單位青霉素消毒后,開始灌胃給藥,給藥期限為2個月,每天給藥1次,同時每天繼續灌胃高脂乳。

5.實驗結果

給藥兩個月后耳緣動脈取血4ml,離心取血清,利用全自動生化分析儀檢測血清TG(血脂)、TC(膽固醇)、HDL(高密度脂)、LDL(低密度脂蛋白),利用酶聯免疫法檢測MM-9(基質金屬蛋白酶-9)、VCAM-1(血管內皮細胞黏附因子);動物放血處死,取左側頸總動脈做病理組織學檢查,檢測頸總動脈動脈粥樣硬化程度。

血清生化學結果表明,與空白對照組相比,模型組HDL顯著降低,其它指標顯著升高,均有統計學差異,表明造模成功;與模型組相比,牛蒡苷元微乳組HDL顯著升高,其它各項指標顯著降低;與模型組比較,牛蒡苷元微乳各劑量組MM-9和VCAM-1均顯著降低,有統計學差異(P<0.05),表明牛蒡苷元微乳組有良好的抗炎效果(見表5)。

病理組織學結果顯示模型組動物局部血管內皮出現破壞,內皮下見泡沫細胞聚集灶,泡沫細胞體積大,圓形,胞漿內有大量空泡(見圖5)。牛蒡苷元微乳各劑量組未見血管新生及平滑肌增生,僅見內皮下有散在的泡沫細胞(見圖6),表明牛蒡苷元微乳對動脈粥樣硬化發展有抑制作用。

綜上所述,牛蒡苷元微乳能夠減輕動脈粥樣硬化炎癥反應、抑制斑塊發展,能夠有效的治療動脈粥樣硬化。

表5?牛蒡苷元微乳對兔頸總動脈粥樣硬化的抑制作用

注:數據均以表示

#與正常對照組相比,p<0.05;*與模型對照組相比,p<0.05;

實施例12牛蒡苷元微乳對大鼠心肌梗死模型心肌的保護作用

1.實驗目的

牛蒡苷元微乳對大鼠心肌梗死模型心肌的保護作用。

2.受試藥物

牛蒡苷元微乳,由山東新時代藥業有限公司提供,根據實施例6配制而成,濃度為50mg/ml,使用前用純化水稀釋為1.25mg/ml、2mg/ml和5mg/ml。

3.組別設置與給藥

3.1劑量設置(見表6)

表6?牛蒡苷元微乳對大鼠心肌梗死模型心肌的保護作用試驗劑量設置

4.實驗方法

清潔級健康大鼠70只,雌雄各35只,體重在230~280g之間,分為假手術組、模型對照組、牛蒡苷元微乳低、中、高劑量組,每組14只,雌雄各7只。3%戊巴比妥鈉50mg/kg腹腔注射麻醉,直視下行氣管插管,調節動物呼吸機待大鼠呼吸頻率與呼吸機一致且穩定后,剔除術區(左胸第3肋間)被毛,消毒、手術暴露心臟,在左心耳邊緣進針,肺動脈圓錐處下1mm出陣,結扎左冠狀動脈前降支,心臟表面點利多卡因注射劑1~2滴,防止室顫發生,逐層關胸,切口處消毒放回飼養籠。除假手術組只穿線不結扎外,其它動物全部按照上述方法進行手術,術后每只動物肌注青霉素10萬單位/天,連續3天。動物術后第2天開始給藥,連續給藥2周,每天1次。

5實驗結果

5.1大鼠存活情況:假手術組動物全部存活,模型對照組、牛蒡苷元微乳低、中、高劑量組分別存活11、12、10、11只動物。

5.2血清生化學檢查:所有動物麻醉后腹主靜脈取血,3000rpm離心后取血清進行血清生化學檢查,結果見表7,結果顯示與假手術組相比,模型對照組AST、CKMB、LDH升高有統計學差異(P<0.05),表明造模成功;與模型組比較牛蒡苷元微乳組上述指標均有降低并有統計學差異(P<0.05),表明兩者對心肌梗死均有治療效果。

表7?血清生化學檢查結果

注:數據均以表示

#與假手術組相比,p<0.05;*與模型對照組相比,p<0.05;

5.3病理學檢查:所有存活動物麻醉放血處死后,取心臟進行病理組織學檢查。結果顯示假手術組心肌纖維排列規則,無炎性浸潤,無纖維組織增生。模型組在心肌組織出現大面積凝固性壞死,細胞核碎裂或消失,胞漿裂解,呈均質紅染或不規則顆粒狀,間質水腫伴炎細胞浸潤(圖7),表明模型成功。牛蒡苷元微乳各劑量組心肌壞死面積減小,壞死區可見纖維組織增生及膠原化,瘢痕組織形成,有劑量關系(見圖8、9、10),表明牛蒡苷元微乳對心肌梗死均有治療效果。

5.4綜上所述,我們認為牛蒡苷元微乳對動脈粥樣硬化造成的心肌梗死有良好的治療效果,能夠有效減輕心肌損傷程度。

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本文標題:牛蒡苷元用于制備治療動脈粥樣硬化或心肌梗死藥物中的用途.pdf
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