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聚乙二醇聚酯三嵌段共聚物載藥納米膠束的制備方法.pdf

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聚乙二醇 聚酯 三嵌段共聚物 納米 膠束 制備 方法
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摘要
申請專利號:

CN201310319370.7

申請日:

20130726

公開號:

CN103479598B

公開日:

20160928

當前法律狀態:

有效性:

有效

法律詳情:
IPC分類號: A61K9/51,A61K47/34,B82Y5/00,B82Y40/00 主分類號: A61K9/51,A61K47/34,B82Y5/00,B82Y40/00
申請人: 中國科學院長春應用化學研究所
發明人: 丁建勛,劉東紅,陳學思,莊秀麗
地址: 130022 吉林省長春市人民大街5625號
優先權: CN201310319370A
專利代理機構: 北京集佳知識產權代理有限公司 代理人: 趙青朵;李玉秋
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法律狀態
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CN201310319370.7

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法律狀態公告日:

法律狀態類型:

摘要

本發明提供一種聚乙二醇?聚酯三嵌段共聚物載藥納米膠束的制備方法為:將小分子藥物和有機溶劑的混合物滴加到聚乙二醇?聚酯三嵌段共聚物中,得到混合溶液;將所述混合溶液進行第一次攪拌的同時滴加超純水,繼續第二次攪拌后,透析除去有機溶劑并凍干得到載藥納米膠束。該方法制備聚乙二醇?聚酯三嵌段共聚物載藥納米膠束,操作簡單,條件溫和,生成的納米膠束粒子能夠呈現很好的單分散狀態,而且該方法制備的納米膠束內核可以包裹水溶性差的小分子藥物,并大大提高藥物的包封率與溶解性,所得的聚乙二醇?聚酯三嵌段共聚物載藥納米膠束結構穩定,粒徑小,且易于保存。

權利要求書

1.一種聚乙二醇-聚酯三嵌段共聚物載藥納米膠束的制備方法,包括以下步驟:(A)將小分子藥物和有機溶劑的混合物滴加到聚乙二醇-聚酯三嵌段共聚物中,得到混合溶液;所述小分子藥物為甲氨喋呤、5-氟脲嘧啶、環磷酰胺、柔紅霉素、阿霉素、表阿霉素、吡柔比星、喜樹堿類或紫杉類;(B)將所述混合溶液進行第一次攪拌的同時滴加超純水,繼續第二次攪拌后,透析除去有機溶劑并凍干得到載藥納米膠束;所述聚乙二醇-聚酯三嵌段共聚物如式(I)所示,其中,-R-為或m為聚合度,10≤m≤250;n為聚合度,10≤n≤220。2.根據權利要求1所述的制備方法,其特征在于,所述步驟(A)中,所述小分子藥物在有機溶劑中的濃度為0.1~10mg/mL。3.根據權利要求1所述的制備方法,其特征在于,所述步驟(A)中,所述小分子藥物與聚乙二醇-聚酯三嵌段共聚物的質量比為0.01~1。4.根據權利要求1所述的制備方法,其特征在于,所述第一次攪拌的速度為100~2000rpm。5.根據權利要求1所述的制備方法,其特征在于,所述滴加超純水的速度為0.05~5mL/min。6.根據權利要求1所述的制備方法,其特征在于,所述超純水的用量與有機溶劑用量的體積比為0.01~20。7.根據權利要求1所述的制備方法,其特征在于,所述有機溶劑為四氫呋喃、1,4-二氧六環、二甲基亞砜或N,N-二甲基甲酰胺。

說明書

技術領域

本發明涉及高分子領域,特別涉及聚乙二醇-聚酯三嵌段共聚物載藥納米膠束的制備方法。

背景技術

高分子載體藥物是隨著藥物學研究、生物材料科學和臨床醫學的發展而新興的給藥技術。低分子藥物具有療效高、使用方便等優點,但同時也存在很大副作用。通常,低分子藥物通過口服或注射進入人體內,代謝速度快,半衰期短,缺乏選擇性。高分子載體藥物是指本身沒有藥理作用、也不與藥物發生反應的高分子作為藥物的載體,依靠與藥物之間微弱的氫鍵結合形成,或者通過縮聚反應將低分子藥物連接到聚合物主鏈上而得到的一類藥物。其中高分子化合物充當低分子藥物的傳遞系統。

用高分子材料作為小分子藥物的載體可以增加藥物的作用時間,提高藥物的選擇性,降低小分子藥物的毒性,定位準確。近期迅速發展起來的是微米和納米尺度的高分子載體,如:納米膠束、囊泡和納米顆粒等,這類高分子載體可有效的將藥物分子分散到其中,利用載體的各種響應方式,實現藥物的輸送和控制釋放。

其中,納米膠束可以包裹住藥物分子,納米膠束的穩定性能直接影響載藥膠束的性能。目前,納米膠束的制備方法主要有:自組裝法、透析法、化學結合法及靜電作用法等,但是這些方法都存在缺點。自組裝法制備的納米膠束,材料層與層之間僅僅依靠范德華力、氫鍵或靜電力等非共價鍵連接,因此納米膠束的力學穩定性差,效率低。化學結合法需要合適的官能團才能進行反應,對于高分子材料與小分子藥物的選擇較為嚴格。透析法和靜電作用法,不適用于大范圍生產。

因此,載藥膠束的制備方法也受到一定的限制。

發明內容

本發明解決的技術問題在于提供一種聚乙二醇-聚酯三嵌段共聚物載藥納米膠束的制備方法,操作簡單,易于產業化,得到的聚乙二醇-聚酯三嵌段共聚物載藥納米膠束包封率高,結構穩定。

本發明公開了一種聚乙二醇-聚酯三嵌段共聚物載藥納米膠束的制備方法,包括以下步驟:

(A)將小分子藥物和有機溶劑的混合物滴加到聚乙二醇-聚酯三嵌段共聚物中,得到混合溶液;

(B)將所述混合溶液進行第一次攪拌的同時滴加超純水,繼續第二次攪拌后,透析除去有機溶劑并凍干得到載藥納米膠束;

所述聚乙二醇-聚酯三嵌段共聚物如式(I)所示,

其中,-R-為或

m為聚合度,10≤m≤250;n為聚合度,10≤n≤220。

優選的,所述步驟(A)中,所述小分子藥物為甲氨喋呤、5-氟脲嘧啶、環磷酰胺、柔紅霉素、阿霉素、表阿霉素、吡柔比星、喜樹堿類或紫杉類。

優選的,所述步驟(A)中,所述小分子藥物在有機溶劑中的濃度為0.1~10mg/mL。

優選的,所述步驟(A)中,所述小分子藥物與聚乙二醇-聚酯三嵌段共聚物的質量比為0.01~1。

優選的,所述第一次攪拌的速度為100~2000rpm。

優選的,所述滴加超純水的速度為0.05~5mL/min。

優選的,所述超純水的用量與有機溶劑用量的體積比為0.01~20。

優選的,所述有機溶劑為四氫呋喃、1,4-二氧六環、二甲基亞砜或N,N-二甲基甲酰胺。

與現有技術相比,本發明采用納米沉降法制備了聚乙二醇-聚酯三嵌段共聚物載藥的納米膠束。即將小分子藥物和有機溶劑的混合物滴加到聚乙二醇-聚酯三嵌段共聚物中,攪拌,得到混合溶液,將所述混合溶液進行攪拌的同時滴加超純水,繼續第二次攪拌,透析除去有機溶劑并凍干得到載藥納米膠束后得到載藥納米膠束。該方法制備聚乙二醇-聚酯三嵌段共聚物載藥納米膠束,操作簡單,條件溫和,生成的納米膠束粒子能夠呈現很好的單分散狀態,而且該方法制備的納米膠束內核可以包裹水溶性差的小分子藥物,并大大提高藥物的包封率與溶解性,所得的載藥納米膠束結構穩定,粒徑小,且易于保存。

附圖說明

圖1為實施例9得到的聚乙二醇-聚酯三嵌段共聚物在氯仿中的核磁共振圖譜;

圖2為實施例19得到的聚乙二醇-聚酯三嵌段共聚物在氯仿中的核磁共振圖譜;

圖3為實施例37~39、62及84得到的納米膠束粒徑分布圖;

圖4為實施例43~45制備的得到的納米膠束粒徑分布圖;

圖5為50~52制備的不同濃度的納米膠束的粒徑分布圖;

圖6為實施例62制備的納米膠束的透射電鏡圖;

圖7為實施例47、57和79得到的納米膠束對MCF-7細胞存活率的影響曲線圖;

圖8為實施例87~89制備的聚乙二醇-聚酯三嵌段共聚物載藥納米膠束的粒徑分布圖;

圖9為實施例87~89制備的聚乙二醇-聚酯三嵌段共聚物載藥納米膠束在3個星期內的粒徑分布圖。

具體實施方式

為了進一步理解本發明,下面結合實施例對本發明優選實施方案進行描述,但是應當理解,這些描述只是為進一步說明本發明的特征和優點,而不是對本發明權利要求的限制。

本發明實施例公開了一種聚乙二醇-聚酯三嵌段共聚物載藥納米膠束的制備方法,包括以下步驟:

(A)將小分子藥物和有機溶劑的混合物滴加到聚乙二醇-聚酯三嵌段共聚物中,得到混合溶液;

(B)將所述混合溶液進行第一次攪拌的同時滴加超純水,繼續第二次攪拌后,透析除去有機溶劑并凍干得到載藥納米膠束;

所述聚乙二醇-聚酯三嵌段共聚物如式(I)所示,

其中,-R-為或

m為聚合度,10≤m≤250,優選的40≤m≤200,更優選的60≤m≤150;n為聚合度,10≤n≤220,優選的30≤n≤20,更優選的60≤n≤150。

本發明選用了納米沉降法制備了聚乙二醇-聚酯三嵌段共聚物載藥納米膠束,操作簡單,條件溫和,該方法制備的納米膠束內核可以包裹水溶性差的小分子藥物,并大大提高藥物的包封率與溶解性,所得的載藥納米膠束結構穩定,粒徑小,且易于保存。本發明優選通過改變制備過程中的滴加超純水的速度、超純水添加量及攪拌速度等條件來控制多大的載藥納米膠束的粒徑,并調整藥物與聚乙二醇-聚酯三嵌段共聚物的比例,選擇最佳的載藥條件。本發明首先將小分子藥物和有機溶劑的混合物滴加到聚乙二醇-聚酯三嵌段共聚物中,得到混合溶液。由于最終形成的膠束會將小分子藥物包裹在內部,所述小分子藥物優選為甲氨喋呤、5-氟脲嘧啶、環磷酰胺、柔紅霉素、阿霉素、表阿霉素、吡柔比星、喜樹堿類或紫杉類,更優選為10-羥基喜樹堿、阿霉素或多西紫杉醇。所述有機溶劑優選為四氫呋喃、1,4-二氧六環、二甲基亞砜或N,N-二甲基甲酰胺,更優選為四氫呋喃。所述聚乙二醇-聚酯三嵌段共聚物如式(I)所示,

其中,-R-為或

m為聚合度,優選的40≤m≤200,更優選的60≤m≤150;n為聚合度,10≤n≤220,優選的30≤n≤20,更優選的60≤n≤150。

所述聚乙二醇-聚酯三嵌段共聚物優選由丙交酯或己內酯與分子量為1000~40000的聚乙二醇聚合得到;所述丙交酯為D-丙交酯或L-丙交酯。其制備方法具體為:

無水無氧條件下,將聚乙二醇,酯類單體,加入安瓶中,共沸除水后加入一定量甲苯,甲苯體積(mL)用量為酯類單體重量(g)的10倍,用注射器注入0.1mol/L辛酸亞錫的甲苯溶液,辛酸亞錫的體積用量和酯類單體的摩爾比為1/1000,放入120℃油浴中反應24h。反應完畢后,用大量乙醚沉降,乙醚與甲苯的用量比為10/1,布氏漏斗過濾,所得產物再用氯仿溶解,再用乙醚沉降,布氏漏斗過濾所得產物在真空氛圍中干燥24h,既得聚乙二醇-聚酯三嵌段共聚物。

所述制備聚乙二醇-聚酯三嵌段共聚物的過程中,優選選用的引發劑進行引發,所述引發劑優選為聚乙二醇,所述聚乙二醇的分子量優選為4000。獲得的聚酯嵌段的數均分子量優選為2000~30000。

在本發明中,所述小分子藥物和有機溶劑的混合物為均勻的溶液,優選經過攪拌4~6小時獲得,所述小分子藥物在有機溶劑中的濃度優選為0.1~10mg/mL,更優選為0.4~8mg/mL。所述小分子藥物和有機溶劑的混合物滴加到聚乙二醇-聚酯三嵌段共聚物中,得到混合溶液,所述小分子藥物與聚乙二醇-聚酯三嵌段共聚物的質量比優選為0.01~1,更優選為0.05~0.5。由于所述聚乙二醇-聚酯三嵌段共聚物在制備過程中可以選用不同構型的酯類單體,因此其在與所述混合物制備混合溶液時,也可以選用具有不同構型鏈段的聚乙二醇-聚酯三嵌段共聚物進行混合,左旋與右旋的鏈段之間可以相互作用,使得其在形成膠束是具有立體復合作用,從而提高藥物的包封率和溶解性。具有不同構型鏈段的聚乙二醇-聚酯三嵌段共聚物的質量比優選為1:1。優選在所述小分子藥物和有機溶劑的混合物滴加到聚乙二醇-聚酯三嵌段共聚物中后,進行攪拌;所述攪拌的時間優選為1~3小時。

得到混合溶液后,將所述混合溶液進行第一次攪拌的同時滴加超純水,繼續第二次攪拌后,透析除去有機溶劑并凍干得到載藥納米膠束。滴加超純水的裝置優選為注射泵,所述滴加超純水的速度優選為0.05~5mL/min,更優選為0.1~3mL/min。所述超純水的用量與有機溶劑用量的體積比為優選0.01~20,更優選為0.1~10。所述混合液進行第一次攪拌的同時滴加超純水,所述第一次攪拌的速度優選為100~2000rpm,更優選為800~1500rpm。滴加結束后,繼續第二次攪拌,透析除去有機溶劑并凍干得到載藥納米膠束,所述第二次攪拌的時間優選8~12小時。所述第二次攪拌的速度優選與第一次攪拌的速度相同。為了提高得到的載藥納米膠束的純度,優選在第二次攪拌后在超純水中進行透析,透析時間優選為20~30小時,換水5次以上,透析優選采用MWCO為3500的透析袋。為了便于保存,還可以將得到的聚乙二醇-聚酯三嵌段共聚物載藥納米膠束進行凍干。

利用動態光散射測定得到的聚乙二醇-聚酯三嵌段共聚物載藥納米膠束的粒徑,連續測定3個星期,結果表明,其粒徑變化趨勢基本一致,由此可知,本發明所述方法制備的聚乙二醇-聚酯三嵌段共聚物載藥納米膠束結構穩定。

該方法制備聚乙二醇-聚酯三嵌段共聚物載藥納米膠束,操作簡單,條件溫和,生成的納米膠束粒子能夠呈現很好的單分散狀態,而且該方法制備的納米膠束內核可以包裹水溶性差的小分子藥物,并大大提高藥物的包封率與溶解性,所得的載藥納米膠束結構穩定,粒徑小,且易于保存。

為了進一步理解本發明,下面結合實施例對本發明提供的聚乙二醇-聚酯三嵌段共聚物載藥納米膠束的制備方法進行說明,本發明的保護范圍不受以下實施例的限制。

實施例1~6

不同數均分子量的聚乙二醇引發的聚乙二醇-聚(D-丙交酯)三嵌段共聚物的制備

分別稱取分子量為1000、4000、8000、10000、20000、40000的聚乙二醇(PEG)1.67g、6.67g、13.33g、16.67g、33.33g、66.57g放入反應瓶中,共沸除水,在無水無氧環境下加入右旋丙交酯(DLA)12g,換氣,甲苯體積(mL)用量為酯類單體重量(g)的10倍120mL,辛酸亞錫的體積用量和酯類單體的摩爾比為1/1000,用注射器注入0.1mol/L辛酸亞錫的甲苯溶液1mL,放入120℃油浴中反應24h。反應完畢后,待溶液冷卻,用1200mL乙醚邊攪拌邊沉降,乙醚與甲苯的用量比為10/1,布氏漏斗過濾,所得產物再用氯仿溶解,再用乙醚沉降,布氏漏斗過濾所得產物在真空干燥器中冷井干燥24h,既得不同

數均分子量的聚乙二醇-聚(D-丙交酯)三嵌段共聚物。

表1實施例1~6制備的聚乙二醇-聚(D-丙交酯)三嵌段共聚物的數均分子量及反應產率

表1中,數均分子量Mn為不同數均分子量的聚乙二醇引發的聚乙二醇-聚(D-丙交酯)三嵌段共聚物的數均分子量,由1H NMR測定得到。

實施例7~10

聚乙二醇引發的不同聚合度的聚乙二醇-聚(D-丙交酯)三嵌段共聚物的制備

分別稱取分子量為4000的聚乙二醇(PEG)4g、6g、8g、12g放入反應瓶中,共沸除水,在無水無氧環境下加入右旋丙交酯(DLA)12g,換氣,甲苯體積(mL)用量為酯類單體重量(g)的10倍120mL,辛酸亞錫的體積用量和酯類單體的摩爾比為1/1000,用注射器注入0.1mol/L辛酸亞錫的甲苯溶液1mL,放入120℃油浴中反應24h。反應完畢后,待溶液冷卻,用1200mL乙醚邊攪拌邊沉降,乙醚與甲苯的用量比為10/1,布氏漏斗過濾,所得產物再用氯仿溶解,再用乙醚沉降,布氏漏斗過濾所得產物在真空干燥器中冷井干燥24h,即得聚乙二醇引發的不同聚合度的聚乙二醇-聚(D-丙交酯)三嵌段共聚物。

表2實施例7~10制備的聚乙二醇-聚(D-丙交酯)三嵌段共聚物的數均分子量及反應產率

表2中,數均分子量Mn為聚乙二醇引發的不同聚合度的聚乙二醇-聚(D-丙交酯)三嵌段共聚物的數均分子量,由1H NMR測定得到。

實施例9制備的聚乙二醇-聚(D-丙交酯)三嵌段共聚物的核磁共振圖譜參見圖1,圖1為圖1為實施例9得到的聚乙二醇-聚酯三嵌段共聚物在氯仿中的核磁共振圖譜。圖1中,各峰的歸屬為:1.6ppm(S,3H,HO-CH(CH3)OC(O))3.68ppm(S,2H,CH2CH2O)),5.2ppm(S,3H,HO-CH(CH3)OC(O))。圖1表明實施例9制備的聚乙二醇-聚(D-丙交酯)三嵌段共聚物具有式(I)結構。

實施例11~16

不同數均分子量的聚乙二醇引發的聚乙二醇-聚(L-丙交酯)三嵌段共聚物的制備

分別稱取分子量為1000、4000、8000、10000、20000、40000的聚乙二醇(PEG)1.67g、6.67g、13.33g、16.67g、33.33g、66.57g放入反應瓶中,共沸除水,在無水無氧環境下加入左旋丙交酯(LLA)12g,換氣,甲苯體積(mL)用量為酯類單體重量(g)的10倍,即120mL,辛酸亞錫的體積用量和酯類單體的摩爾比為1/1000,用注射器注入0.1mol/L辛酸亞錫的甲苯溶液1mL,放入120℃油浴中反應24h。反應完畢后,待溶液冷卻,用1200mL乙醚邊攪拌邊沉降,乙醚與甲苯的用量比為10/1,布氏漏斗過濾,所得產物再用氯仿溶解,再用乙醚沉降,布氏漏斗過濾所得產物在真空干燥器中冷井干燥24h,既得不同數均分子量的聚乙二醇引發的聚乙二醇-聚(L-丙交酯)三嵌段共聚物。

表3實施例11~16制備的聚乙二醇引發的聚乙二醇-聚(L-丙交酯)三嵌段共聚物的數均分子量及反應產率

上表中,數均分子量Mn為不同數均分子量的聚乙二醇引發的聚乙二醇-聚(L-丙交酯)三嵌段共聚物的數均分子量,由1H NMR測定得到。

實施例17~20

不同數均分子量的聚乙二醇引發的聚乙二醇-聚(L-丙交酯)三嵌段共聚物的制備。

分別稱取分子量為4000的聚乙二醇(PEG)4g、6g、8g、12g放入反應瓶中,共沸除水,在無水無氧環境下加入左旋丙交酯(LLA)12g,換氣,甲苯體積(mL)用量為酯類單體重量(g)的10倍,即120mL,辛酸亞錫的體積用量和酯類單體的摩爾比為1/1000,用注射器注入0.1mol/L辛酸亞錫的甲苯溶液1mL,放入120℃油浴中反應24h。反應完畢后,待溶液冷卻,用1200mL乙醚邊攪拌邊沉降,乙醚與甲苯的用量比為10/1,布氏漏斗過濾,所得產物再用氯仿溶解,再用乙醚沉降,布氏漏斗過濾所得產物在真空干燥器中冷井干燥24h,即得不同數均分子量的聚乙二醇引發的聚乙二醇-聚(L-丙交酯)三嵌段共聚物。

表4實施例17~20制備的聚乙二醇-聚(L-丙交酯)三嵌段共聚物的數均分子量及反應產率

表4中,數均分子量Mn為不同數均分子量的聚乙二醇引發的聚乙二醇-聚(L-丙交酯)三嵌段共聚物的數均分子量,由1H NMR測定得到。

實施例19制備的聚乙二醇-聚(L-丙交酯)三嵌段共聚物的核磁共振圖譜參見圖2,圖2為實施例19得到的聚乙二醇-聚酯三嵌段共聚物在氯仿中的核磁共振圖譜。圖2中,各峰的歸屬為:1.6ppm(S,3H,HO-CH(CH3)OC(O))3.68ppm(S,2H,CH2CH2O)),5.2ppm(S,3H,HO-CH(CH3)OC(O))。圖2表明實施例19制備的聚乙二醇-聚(L-丙交酯)三嵌段共聚物具有式(I)結構。

實施例21~26

不同數均分子量的聚乙二醇引發的聚(ε-己內酯)三嵌段共聚物的制備

分別稱取分子量為1000、4000、8000、10000、20000、40000的聚乙二醇(PEG)1.67g、6.67g、13.33g、16.67g、33.33g、66.57g放入反應瓶中,共沸除水,在無水無氧環境下加入己內酯12g,換氣,甲苯體積(mL)用量為己內脂單體重量(g)的10倍120mL,辛酸亞錫的體積用量和己內脂單體的摩爾比為1/1000,用注射器注入0.1mol/L辛酸亞錫的甲苯溶液1mL,放入120℃油浴中反應24h。反應完畢后,待溶液冷卻,用1200mL乙醚邊攪拌邊沉降,乙醚與甲苯的用量比為10/1,布氏漏斗過濾,所得產物再用氯仿溶解,再用乙醚沉降,布氏漏斗過濾所得產物在真空干燥器中冷井干燥24h,即得不同數均分子量的聚乙二醇-聚(ε-己內酯)三嵌段共聚物。

表5實施例21~26制備的聚乙二醇-聚(ε-己內酯)三嵌段共聚物的數均分子量及反應產率

表5中,數均分子量Mn為不同數均分子量的聚乙二醇引發的聚乙二醇-聚(ε-己內酯)三嵌段共聚物的數均分子量,由1H NMR測定得到。

實施例27~30

不同數均分子量的聚乙二醇引發的聚(ε-己內酯)三嵌段共聚物的制備

分別稱取分子量為4000的聚乙二醇(PEG)4g、6g、8g、12g放入反應瓶中,共沸除水,在無水無氧環境下加入己內脂12g,換氣,甲苯體積(mL)用量為己內酯單體重量(g)的10倍120mL,辛酸亞錫的體積用量和己內脂單體的摩爾比為1/1000,用注射器注入0.1mol/L辛酸亞錫的甲苯溶液1mL,放入120℃油浴中反應24h。反應完畢后,待溶液冷卻,用1200mL乙醚邊攪拌邊沉降,乙醚與甲苯的用量比為10/1,布氏漏斗過濾,所得產物再用氯仿溶解,再用乙醚沉降,布氏漏斗過濾所得產物在真空干燥器中冷井干燥24h,即得不同數均分子量的聚乙二醇-聚(ε-己內酯)三嵌段共聚物。

表6實施例27~30制備的聚乙二醇-聚(ε-己內酯)三嵌段共聚物

表6中,數均分子量Mn為聚乙二醇引發的不同聚合度的聚乙二醇-聚(ε-己內酯)三嵌段共聚物的數均分子量,由1H NMR測定得到

實施例31~33

分別取實施例19制備的聚乙二醇-聚(L-丙交酯)三嵌段共聚物100mg,分別溶解在四氫呋喃、1,4-二氧六環、二甲基亞砜、N,N-二甲基甲酰胺中,濃度為2.5mg/mL,攪拌3h,設置注射泵流速0.1mL/min、流量(mL)25mL,設置攪拌器的攪拌速度1000rpm。將溶解好的聚酯嵌段共聚物溶液放在攪拌器上攪拌,用設定好的注射泵向溶液中勻速滴加Milli-Q。滴加結束后繼續攪拌10h,用MWCO為3500的透析袋在Milli-Q中透析24h,換水5次以上。透析后將溶液定容,即得具有生物活性的納米膠束。

實施例34~36

分別取實施例19制備的聚乙二醇-聚(L-丙交酯)三嵌段共聚物100mg,分別制備成濃度為2mg/mL、2.5mg/mL、3mg/mL的四氫呋喃溶液,攪拌3h,設置注射泵流速0.1mL/min、流量(mL)25mL,設置攪拌器的攪拌速度1000r/min。將溶解好的聚酯嵌段共聚物溶液放在攪拌器上攪拌,用設定好的注射泵向溶液中勻速滴加Milli-Q。滴加結束后繼續攪拌10h,用透析袋(MWCO=3500)在Milli-Q中透析24h,換水5次以上。透析后將溶液定容,即得具有生物活性的納米膠束。

實施例37~39

取三份實施例9制備的聚乙二醇-聚(D-丙交酯)三嵌段共聚物,每份100mg,溶解在四氫呋喃溶液中,濃度為2.5mg/mL,攪拌3h,設置注射泵流速0.1mL/min、流量(mL)25mL,設置攪拌器的攪拌速度分別為500rpm,1000rpm,1500rpm。將溶解好的聚酯乳酸嵌段共聚物溶液放在攪拌器上攪拌,用設定好的注射泵向溶液中勻速滴加Milli-Q。滴加結束后繼續攪拌10h,用透析袋(MWCO=3500)在Milli-Q中透析24h,換水5次以上。透析后將溶液定容,即得具有生物活性的納米膠束。

圖3為實施例37~39、62及84得到的納米膠束粒徑分布圖,圖3中,為實施例37得到的納米膠束的動態流體力學半徑分布,為實施例38得到的納米膠束的動態流體力學半徑分布,為實施例39得到的納米膠束的動態流體力學半徑分布,為實施例62得到的納米膠束的動態流體力學半徑分布,為實施例84得到的納米膠束的動態流體力學半徑分布。

實施例40~42

取三份實施例19制備的聚乙二醇-聚(L-丙交酯)三嵌段共聚物,每份100mg,溶解在四氫呋喃溶液中,濃度為2.5mg/mL,攪拌3h,設置注射泵流速0.1mL/min、流量(mL)分別設定為20mL、25mL、30mL,設置攪拌器的攪拌速度為1000rpm。將溶解好的聚乳酸嵌段共聚物溶液放在攪拌器上攪拌,用設定好的注射泵向溶液中勻速滴加Milli-Q。滴加結束后繼續攪拌10h,用透析袋(MWCO=3500)在Milli-Q中透析24h,換水5次以上。透析后將溶液定容,即得具有生物活性的納米膠束。

實施例43~45

取三份實施例19制備的聚乙二醇-聚(L-丙交酯)三嵌段共聚物,每份100mg,溶解在四氫呋喃溶液中,濃度為2.5mg/mL,攪拌3h,設置注射泵流速分別為0.1mL/min、0.3mL/min、0.5mL/min,流量(mL)設定為25mL,設置攪拌器的攪拌速度為1000rpm。將溶解好的聚乳酸嵌段共聚物溶液放在攪拌器上攪拌,用設定好的注射泵向溶液中勻速滴加Milli-Q。滴加結束后繼續攪拌10h,用透析袋(MWCO=3500)在Milli-Q中透析24h,換水5次以上。透析后將溶液定容,即得具有生物活性的納米膠束。

圖4為實施例43~45制備的得到的納米膠束粒徑分布圖,圖4中,為實施例43得到的納米膠束的動態流體力學半徑分布,為實施例44得到的納米膠束的動態流體力學半徑分布,為實施例45得到的納米膠束的動態流體力學半徑分布。

實施例46~49

分別稱取實施例1~4制備的聚乙二醇-聚(D-丙交酯)三嵌段共聚物100mg,溶解在四氫呋喃溶液中,濃度為2.5mg/mL,攪拌3h,設置注射泵流速為0.1mL/min、流量(mL)設定為25mL,設置攪拌器的攪拌速度為1000rpm。將溶解好的聚乳酸嵌段共聚物溶液放在攪拌器上攪拌,用設定好的注射泵向溶液中勻速滴加Milli-Q。滴加結束后繼續攪拌10h,用透析袋(MWCO=3500)在Milli-Q中透析24h,換水5次以上。透析后將溶液定容,即得具有生物活性的納米膠束。

實施例50~52

分別稱取實施例7~9制備的聚乙二醇-聚(D-丙交酯)三嵌段共聚物100mg,溶解在四氫呋喃溶液中,濃度為2.5mg/mL,攪拌3h,設置注射泵流速分別為0.1mL/min、0.3mL/min、0.5mL/min,流量(mL)設定為25mL,設置攪拌器的攪拌速度為1000rpm。將溶解好的聚乳酸嵌段共聚物溶液放在攪拌器上攪拌,用設定好的注射泵向溶液中勻速滴加Milli-Q。滴加結束后繼續攪拌10h,用透析袋(MWCO=3500)在Milli-Q中透析24h,換水5次以上。透析后將溶液定容,即得具有生物活性的納米膠束。

圖5為實施例50~52制備的不同濃度的納米膠束的粒徑分布圖,圖5中,為實施例50得到的納米膠束的動態流體力學半徑分布,為實施例51得到的納米膠束的動態流體力學半徑分布,為實施例52得到的納米膠束的動態流體力學半徑分布。

實施例53~55

取三份實施例3制備的聚乙二醇-聚(D-丙交酯)三嵌段共聚物,每份100mg,溶解在四氫呋喃溶液中,濃度為2.5mg/mL,攪拌3h,設置注射泵流速分別為0.1mL/min、0.3mL/min、0.5mL/min,流量(mL)設定為25mL,設置攪拌器的攪拌速度為1000rpm。將溶解好的聚乳酸嵌段共聚物溶液放在攪拌器上攪拌,用設定好的注射泵向溶液中勻速滴加Milli-Q。滴加結束后繼續攪拌10h,用透析袋(MWCO=3500)在Milli-Q中透析24h,換水5次以上。透析后將溶液定容,即得具有生物活性的納米膠束。

實施例56~59

分別稱取實施例11~14制備的聚乙二醇-聚(L-丙交酯)三嵌段共聚物100mg,溶解在四氫呋喃溶液中,濃度為2.5mg/mL,攪拌3h,設置注射泵流速為0.1mL/min,流量(mL)設定為25mL,設置攪拌器的攪拌速度為1000rpm。將溶解好的聚乳酸嵌段共聚物溶液放在攪拌器上攪拌,用設定好的注射泵向溶液中勻速滴加Milli-Q。滴加結束后繼續攪拌10h,用透析袋(MWCO=3500)在Milli-Q中透析24h,換水5次以上。透析后將溶液定容,即得具有生物活性的納米膠束。

實施例60~63

分別稱取實施例17~20制備的聚乙二醇-聚(L-丙交酯)三嵌段共聚物100mg,溶解在四氫呋喃溶液中,濃度為2.5mg/mL,攪拌3h,設置注射泵流速為0.1mL/min,流量(mL)設定為25mL,設置攪拌器的攪拌速度為1000rpm。將溶解好的聚乳酸嵌段共聚物溶液放在攪拌器上攪拌,用設定好的注射泵向溶液中勻速滴加Milli-Q。滴加結束后繼續攪拌10h,用透析袋(MWCO=3500)在Milli-Q中透析24h,換水5次以上。透析后將溶液定容,即得具有生物活性的納米膠束。

圖6為實施例62制備的納米膠束的透射電鏡圖,由圖6可知,所述方法制備得到了納米膠束。

實施例64~66

取三份實施例13制備的聚乙二醇-聚(L-丙交酯)三嵌段共聚物,每份100mg,溶解在四氫呋喃溶液中,濃度為2.5mg/mL,攪拌3h,設置注射泵流速分別為0.1mL/min、0.3mL/min、0.5mL/min,流量(mL)設定為25mL,流量(mL)設定為25mL,設置攪拌器的攪拌速度為1000rpm。將溶解好的聚乳酸嵌段共聚物溶液放在攪拌器上攪拌,用設定好的注射泵向溶液中勻速滴加Milli-Q。滴加結束后繼續攪拌10h,用透析袋(MWCO=3500)在Milli-Q中透析24h,換水5次以上。透析后將溶液定容,即得具有生物活性的納米膠束。

實施例67~70

分別稱取實施例21~24制備的聚乙二醇-聚(ε-己內酯)三嵌段共聚物100mg,溶解在四氫呋喃溶液中,濃度為2.5mg/mL,攪拌3h,設置注射泵流速為0.1mL/min,流量(mL)設定為25mL,設置攪拌器的攪拌速度為1000rpm。將溶解好的聚己內酯嵌段共聚物溶液放在攪拌器上攪拌,用設定好的注射泵向溶液中勻速滴加Milli-Q。滴加結束后繼續攪拌10h,用透析袋(MWCO=3500)在Milli-Q中透析24h,換水5次以上。透析后將溶液定容,即得具有生物活性的納米膠束。

實施例71~74

分別稱取實施例27~30制備的聚乙二醇-聚(ε-己內酯)三嵌段共聚物100mg,溶解在四氫呋喃溶液中,濃度為2.5mg/mL,攪拌3h,設置注射泵流速為0.1mL/min,流量(mL)設定為25mL,設置攪拌器的攪拌速度為1000rpm。將溶解好的聚己內酯嵌段共聚物溶液放在攪拌器上攪拌,用設定好的注射泵向溶液中勻速滴加Milli-Q。滴加結束后繼續攪拌10h,用透析袋(MWCO=3500)在Milli-Q中透析24h,換水5次以上。透析后將溶液定容,即得具有生物活性的納米膠束。

實施例75~77

取三份實施例23制備的聚乙二醇-聚(ε-己內酯)三嵌段共聚物,每份100mg,溶解在四氫呋喃溶液中,濃度為2.5mg/mL,攪拌3h,設置注射泵流速分別為0.1mL/min、0.3mL/min、0.5mL/min,流量(mL)設定為25mL,流量(mL)設定為25mL,設置攪拌器的攪拌速度為1000rpm。將溶解好的聚乳酸嵌段共聚物溶液放在攪拌器上攪拌,用設定好的注射泵向溶液中勻速滴加Milli-Q。滴加結束后繼續攪拌10h,用透析袋(MWCO=3500)在Milli-Q中透析24h,換水5次以上。透析后將溶液定容,即得具有生物活性的納米膠束。

實施例78~81

將實施例1~4制備的聚乙二醇-聚(D-丙交酯)三嵌段共聚物與實施例11~14制備的聚乙二醇-聚(L-丙交酯)三嵌段共聚物各50mg混合,溶解在四氫呋喃溶液中,濃度為2.5mg/mL,攪拌3h,設置注射泵流速為0.1mL/min,流量(mL)設定為25mL,設置攪拌器的攪拌速度為1000rpm。將溶解好的聚己內酯嵌段共聚物溶液放在攪拌器上攪拌,用設定好的注射泵向溶液中勻速滴加Milli-Q。滴加結束后繼續攪拌10h,用透析袋(MWCO=3500)在Milli-Q中透析24h,換水5次以上。透析后將溶液定容,即得具有生物活性的納米膠束。

實施例82~85

將實施例7~10制備的聚乙二醇-聚(D-丙交酯)三嵌段共聚物與實施例17~20制備的聚乙二醇-聚(L-丙交酯)三嵌段共聚物各50mg混合,溶解在四氫呋喃溶液中,濃度為2.5mg/mL,攪拌3h,設置注射泵流速為0.1mL/min,流量(mL)設定為25mL,設置攪拌器的攪拌速度為1000rpm。將溶解好的聚己內酯嵌段共聚物溶液放在攪拌器上攪拌,用設定好的注射泵向溶液中勻速滴加Milli-Q。滴加結束后繼續攪拌10h,用透析袋(MWCO=3500)在Milli-Q中透析24h,換水5次以上。透析后將溶液定容,即得具有生物活性的納米膠束。

實施例86

對實施例47、57、79得到的納米膠束在MCF-7細胞中的毒性試驗:

分別將實施例47、57、79得到的納米膠束及PEI配置成濃度分別為0.01μg/mL、0.025μg/mL、0.05μg/mL和0.10μg/mL的細胞培養基。

首先,將MCF-7細胞種于96孔培養板,培養24h后移除培養基,實驗組加入上述各個濃度的實施例47、57、79得到的納米膠束的細胞培養基,對照組加入上述各個濃度的PEI。分別培養72小時后加入MTT,4h后吸除培養基,加入DMSO在酶標儀上測定對照組及實驗組490nm波長處的OD值。

實驗結果參見圖7,圖7為實施例47、57、79得到的納米膠束對MCF-7細胞存活率的影響曲線圖,圖7中,為不同濃度的實施例47得到的納米膠束對細胞存活率的影響曲線,為不同濃度的實施例57得到的納米膠束對細胞存活率的影響曲線,為不同濃度的實施例79得到的納米膠束對細胞存活率的影響曲線;不同濃度的PEI對于細胞存活率的影響曲線。

如圖7所示,在所有測試的濃度范圍內,最高濃度為0.1mg L-1的納米膠束培養72h后,其細胞存活率均為80%以上。也就是說,納米膠束具有較低的細胞毒性,可以安全的作為傳輸生物活性物質的生物相容性載體。

實施例87~89

聚乙二醇醚-聚酯三嵌段共聚物分別選用實施例9制備的聚乙二醇-聚(D-丙交酯)三嵌段共聚物100mg,實施例19制備的聚乙二醇-聚(L-丙交酯)三嵌段共聚物100mg,實施例9制備的聚乙二醇-聚(D-丙交酯)三嵌段共聚物與實施例19制備的聚乙二醇-聚(L-丙交酯)三嵌段共聚物各50mg混合。

將10-羥基喜樹堿溶解于四氫呋喃中,10-羥基喜樹堿的濃度為0.4mg/mL,攪拌5h,溶解后,將10-羥基喜樹堿-四氫呋喃溶液滴加到稱量好的聚乙二醇-聚酯三嵌段共聚物中配置成10-羥基喜樹堿與聚乙二醇-聚酯三嵌段共聚物的質量比為1:5的溶液繼續攪拌2h,設置注射泵流速0.1mL/min、流量(mL)設定為25mL設置攪拌器的攪拌速度1000rpm。將溶有10-羥基喜樹堿的聚乙二醇-聚酯三嵌段共聚物溶液放在攪拌器上攪拌,用設定好的注射泵向溶液中勻速滴加Milli-Q。滴加結束后繼續攪拌10h,用透析袋(MWCO=3500)在Milli-Q中透析24h,換水5次以上。透析后將溶液凍干,即得具有生物活性的聚乙二醇-聚酯三嵌段共聚物載藥納米膠束。

經過計算,實施例87得到的聚乙二醇-聚酯三嵌段共聚物載藥納米膠束的包封率為100%,載藥效率為13.1%;實施例88得到的聚乙二醇-聚酯三嵌段共聚物載藥納米膠束的包封率為88%,載藥效率為11.7%;實施例89得到的聚乙二醇-聚酯三嵌段共聚物載藥納米膠束的包封率為100%,載藥效率為13.2%。

圖8為實施例87~89制備的聚乙二醇-聚酯三嵌段共聚物載藥納米膠束的粒徑分布圖,所述粒徑分布圖由動態光散射(DLS)測得。圖8中,為實施例87得到的聚乙二醇-聚酯三嵌段共聚物載藥納米膠束的動態流體力學半徑分布,為實施例88得到的聚乙二醇-聚酯三嵌段共聚物載藥納米膠束的動態流體力學半徑分布,為實施例89得到的聚乙二醇-聚酯三嵌段共聚物載藥納米膠束的動態流體力學半徑分布。

圖9為實施例87~89制備的聚乙二醇-聚酯三嵌段共聚物載藥納米膠束在3個星期內的粒徑分布圖,a為實施例87~89制備的聚乙二醇-聚酯三嵌段共聚物載藥納米膠束在1星期時的粒徑分布,b為實施例87~89制備的聚乙二醇-聚酯三嵌段共聚物載藥納米膠束在1星期時的粒徑分布,c為實施例87~89制備的聚乙二醇-聚酯三嵌段共聚物載藥納米膠束在1星期時的粒徑分布,為實施例87得到的聚乙二醇-聚酯三嵌段共聚物載藥納米膠束的動態流體力學半徑分布,為實施例88得到的聚乙二醇-聚酯三嵌段共聚物載藥納米膠束的動態流體力學半徑分布,為實施例89得到的聚乙二醇-聚酯三嵌段共聚物載藥納米膠束的動態流體力學半徑分布。

由圖9可知,本發明制備的聚乙二醇-聚酯三嵌段共聚物載藥納米膠束穩定性好。

實施例90~92

聚乙二醇-聚酯三嵌段共聚物分別選用實施例3制備的聚乙二醇-聚(D-丙交酯)三嵌段共聚物100mg,實施例13制備的聚乙二醇-聚(L-丙交酯)三嵌段共聚物100mg,實施例3制備的聚乙二醇-聚(D-丙交酯)三嵌段共聚物與實施例13制備的聚乙二醇-聚(L-丙交酯)三嵌段共聚物各50mg混合。

將10-羥基喜樹堿溶解于四氫呋喃中,10-羥基喜樹堿的濃度為0.4mg/mL,攪拌5h,溶解后,將10-羥基喜樹堿-四氫呋喃溶液滴加到稱量好的聚乙二醇醚-聚酯三嵌段共聚物中配置成10-羥基喜樹堿與聚乙二醇醚-聚酯三嵌段共聚物質量比為1:5的溶液繼續攪拌2h,設置注射泵流速0.1mL/min、流量(mL)設定為25mL設置攪拌器的攪拌速度1000rpm。將溶有10-羥基喜樹堿的聚乙二醇-聚酯三嵌段共聚物溶液放在攪拌器上攪拌,用設定好的注射泵向溶液中勻速滴加Milli-Q。滴加結束后繼續攪拌10h,用透析袋(MWCO=3500)在Milli-Q中透析24h,換水5次以上。透析后將溶液凍干,即得具有生物活性的聚乙二醇醚-聚酯三嵌段共聚物載藥納米膠束。

實施例90得到的聚乙二醇醚-聚酯三嵌段共聚物載藥納米膠束的包封率為12.76%,載藥效率為92.34%;

實施例91得到的聚乙二醇醚-聚酯三嵌段共聚物載藥納米膠束的包封率為12.03%,載藥效率為95.6%;

實施例92得到的聚乙二醇醚-聚酯三嵌段共聚物載藥納米膠束的包封率為14.3%,載藥效率為100%。

實施例93~97

分別稱取實施例13制備的聚乙二醇-聚(L-丙交酯)三嵌段共聚物100mg。將10-羥基喜樹堿溶解于四氫呋喃中,10-羥基喜樹堿的濃度為0.4mg/mL,攪拌5h,溶解后,將10-羥基喜樹堿-四氫呋喃溶液滴加到稱量好的聚乙二醇醚-聚酯三嵌段共聚物中,配置成10-羥基喜樹堿與聚乙二醇-聚酯三嵌段共聚物質量比分別為1:20,1:10,3:20,4:20,5:20的溶液繼續攪拌2h,設置注射泵流速0.1mL/min、流量(mL)設定為25mL設置攪拌器的攪拌速度1000rpm。將溶有10-羥基喜樹堿的聚乙二醇-聚酯三嵌段共聚物溶液放在攪拌器上攪拌,用設定好的注射泵向溶液中勻速滴加Milli-Q。滴加結束后繼續攪拌10h,用透析袋(MWCO=3500)在Milli-Q中透析24h,換水5次以上。透析后將溶液凍干,即得具有生物活性的聚乙二醇醚-聚酯三嵌段共聚物載藥納米膠束。

實施例93得到的聚乙二醇醚-聚酯三嵌段共聚物載藥納米膠束的包封率為11.39%,載藥效率為87.52%;

實施例94得到的聚乙二醇醚-聚酯三嵌段共聚物載藥納米膠束的包封率為12.51%,載藥效率為89.21%;

實施例95得到的聚乙二醇醚-聚酯三嵌段共聚物載藥納米膠束的包封率為13.21%,載藥效率為97.32%;

實施例96得到的聚乙二醇醚-聚酯三嵌段共聚物載藥納米膠束的包封率為12.74%,載藥效率為90.63%;

實施例97得到的聚乙二醇醚-聚酯三嵌段共聚物載藥納米膠束的包封率為11.94%,載藥效率為87.86%。

實施例98~102

分別稱取實施例6制備的聚乙二醇-聚(D-丙交酯)三嵌段共聚物100mg。將10-羥基喜樹堿溶解于四氫呋喃中,10-羥基喜樹堿的濃度為0.4mg/mL,攪拌5h,溶解后,將10-羥基喜樹堿-四氫呋喃溶液滴加到稱量好的聚乙二醇-聚酯三嵌段共聚物中,配置成10-羥基喜樹堿與聚乙二醇-聚酯三嵌段共聚物質量比分別為1:20,1:10,3:20,4:20,5:20的溶液繼續攪拌2h,設置注射泵流速0.1mL/min、流量(mL)設定為25mL設置攪拌器的攪拌速度1000rpm。將溶有10-羥基喜樹堿的聚乙二醇-聚酯三嵌段共聚物溶液放在攪拌器上攪拌,用設定好的注射泵向溶液中勻速滴加Milli-Q。滴加結束后繼續攪拌10h,用透析袋(MWCO=3500)在Milli-Q中透析24h,換水5次以上。透析后將溶液凍干,即得具有生物活性的聚乙二醇醚-聚酯三嵌段共聚物載藥納米膠束。

實施例98得到的聚乙二醇醚-聚酯三嵌段共聚物載藥納米膠束的包封率為12.17%,載藥效率為86.24%;

實施例99得到的聚乙二醇醚-聚酯三嵌段共聚物載藥納米膠束的包封率為12.84%,載藥效率為91.63%;

實施例100得到的聚乙二醇醚-聚酯三嵌段共聚物載藥納米膠束的包封率為13.42%,載藥效率為98.87%;

實施例101得到的聚乙二醇醚-聚酯三嵌段共聚物載藥納米膠束的包封率為12.76%,載藥效率為91.22%;

實施例102得到的聚乙二醇醚-聚酯三嵌段共聚物載藥納米膠束的包封率為12.16%,載藥效率為87.26%。

實施例103~107

將實施例9制備的聚乙二醇-聚(D-丙交酯)三嵌段共聚物與實施例19制備的聚乙二醇-聚(L-丙交酯)三嵌段共聚物各50mg混合,制備5份相同的所述混合的聚乙二醇醚-聚酯三嵌段共聚物。將10-羥基喜樹堿溶解于四氫呋喃中,10-羥基喜樹堿的濃度為0.4mg/mL,攪拌5h,溶解后,將10-羥基喜樹堿-四氫呋喃溶液滴加到稱量好的聚乙二醇醚-聚酯三嵌段共聚物中配置成10-羥基喜樹堿與聚乙二醇醚-聚酯三嵌段共聚物質量比分別為1:20,1:10,3:20,4:20,5:20的溶液繼續攪拌2h,設置注射泵流速0.1mL/min、流量(mL)設定為25mL設置攪拌器的攪拌速度1000rpm。將溶有10-羥基喜樹堿的聚乙二醇-聚酯三嵌段共聚物溶液放在攪拌器上攪拌,用設定好的注射泵向溶液中勻速滴加Milli-Q。滴加結束后繼續攪拌10h,用透析袋(MWCO=3500)在Milli-Q中透析24h,換水5次以上。透析后將溶液凍干,即得具有生物活性的聚乙二醇醚-聚酯三嵌段共聚物載藥納米膠束。

實施例103得到的聚乙二醇醚-聚酯三嵌段共聚物載藥納米膠束的包封率為11.89%,載藥效率為86.84%

實施例104得到的聚乙二醇醚-聚酯三嵌段共聚物載藥納米膠束的包封率為12.51%,載藥效率為92.52%;

實施例105得到的聚乙二醇醚-聚酯三嵌段共聚物載藥納米膠束的包封率為13.42%,載藥效率為98.62%;

實施例106得到的聚乙二醇醚-聚酯三嵌段共聚物載藥納米膠束的包封率為12.35%,載藥效率為94.23%;

實施例107得到的聚乙二醇醚-聚酯三嵌段共聚物載藥納米膠束的包封率為11.72%,載藥效率為88.24%。

實施例108~110

聚乙二醇-聚酯三嵌段共聚物分別選用實施例9制備的聚乙二醇-聚(D-丙交酯)三嵌段共聚物100mg,實施例19制備的聚乙二醇-聚(L-丙交酯)三嵌段共聚物100mg,實施例9制備的聚乙二醇-聚(D-丙交酯)三嵌段共聚物與實施例19制備的聚乙二醇-聚(L-丙交酯)三嵌段共聚物各50mg混合。

將甲氨喋呤溶解于四氫呋喃中,甲氨喋呤的濃度為0.4mg/mL,攪拌5h,溶解后,將甲氨喋呤-四氫呋喃溶液滴加到稱量好的聚乙二醇醚-聚酯三嵌段共聚物中配置成甲氨喋呤與聚乙二醇醚-聚酯三嵌段共聚物質量比分別為1:5的溶液繼續攪拌2h,設置注射泵流速0.1mL/min、流量(mL)設定為25mL設置攪拌器的攪拌速度1000rpm。將溶有甲氨喋呤的聚乙二醇-聚酯三嵌段共聚物溶液放在攪拌器上攪拌,用設定好的注射泵向溶液中勻速滴加Milli-Q。滴加結束后繼續攪拌10h,用透析袋(MWCO=3500)在Milli-Q中透析24h,換水5次以上。透析后將溶液凍干,即得具有生物活性的聚乙二醇醚-聚酯三嵌段共聚物載藥納米膠束。

實施例108得到的聚乙二醇醚-聚酯三嵌段共聚物載藥納米膠束的包封率為22.21%,載藥效率為89.93%;

實施例109得到的聚乙二醇醚-聚酯三嵌段共聚物載藥納米膠束的包封率為22.27%,載藥效率為90.42%;

實施例110得到的聚乙二醇醚-聚酯三嵌段共聚物載藥納米膠束的包封率為24.52%,載藥效率為100%。

實施例111~113

聚乙二醇-聚酯三嵌段共聚物分別選用實施例9制備的聚乙二醇-聚(D-丙交酯)三嵌段共聚物100mg,實施例19制備的聚乙二醇-聚(L-丙交酯)三嵌段共聚物100mg,實施例9制備的聚乙二醇-聚(D-丙交酯)三嵌段共聚物與實施例19制備的聚乙二醇-聚(L-丙交酯)三嵌段共聚物各50mg混合。

將環磷酰胺溶解于四氫呋喃中,環磷酰胺的濃度為0.4mg/mL,攪拌5h,溶解后,將環磷酰胺-四氫呋喃溶液滴加到稱量好的聚乙二醇醚-聚酯三嵌段共聚物中配置成環磷酰胺與聚乙二醇醚-聚酯三嵌段共聚物質量比分別為1:5的溶液繼續攪拌2h,設置注射泵流速0.1mL/min、流量(mL)設定為25mL設置攪拌器的攪拌速度1000rpm。將溶有環磷酰胺的聚乙二醇-聚酯三嵌段共聚物溶液放在攪拌器上攪拌,用設定好的注射泵向溶液中勻速滴加Milli-Q。滴加結束后繼續攪拌10h,用透析袋(MWCO=3500)在Milli-Q中透析24h,換水5次以上。透析后將溶液凍干,即得具有生物活性的載聚乙二醇醚-聚酯三嵌段共聚物藥納米膠束。

實施例111得到的聚乙二醇醚-聚酯三嵌段共聚物載藥納米膠束的包封率為52.34%,載藥效率為90.63%;

實施例112得到的聚乙二醇醚-聚酯三嵌段共聚物載藥納米膠束的包封率為52.41%,載藥效率為91.46%;

實施例113得到的聚乙二醇醚-聚酯三嵌段共聚物載藥納米膠束的包封率為63.63%,載藥效率為98.95%。

實施例114~116

聚乙二醇-聚酯三嵌段共聚物分別選用實施例9制備的聚乙二醇-聚(D-丙交酯)三嵌段共聚物100mg,實施例19制備的聚乙二醇-聚(L-丙交酯)三嵌段共聚物100mg,實施例9制備的聚乙二醇-聚(D-丙交酯)三嵌段共聚物與實施例19制備的聚乙二醇-聚(L-丙交酯)三嵌段共聚物各50mg混合。

將5-氟脲嘧啶溶解于四氫呋喃中,5-氟脲嘧啶的濃度為0.4mg/mL,攪拌5h,溶解后,將5-氟脲嘧啶-四氫呋喃溶液滴加到稱量好的聚乙二醇醚-聚酯三嵌段共聚物中配置成5-氟脲嘧啶與聚乙二醇醚-聚酯三嵌段共聚物質量比分別為1:5的溶液繼續攪拌2h,設置注射泵流速0.1mL/min、流量(mL)設定為25mL設置攪拌器的攪拌速度1000rpm。將溶有5-氟脲嘧啶的聚乙二醇-聚酯三嵌段共聚物溶液放在攪拌器上攪拌,用設定好的注射泵向溶液中勻速滴加Milli-Q。滴加結束后繼續攪拌10h,用透析袋(MWCO=3500)在Milli-Q中透析24h,換水5次以上。透析后將溶液凍干,即得具有生物活性的聚乙二醇醚-聚酯三嵌段共聚物載藥納米膠束。

實施例114得到的聚乙二醇醚-聚酯三嵌段共聚物載藥納米膠束的包封率為43.34%,載藥效率為84.52%;

實施例115得到的聚乙二醇醚-聚酯三嵌段共聚物載藥納米膠束的包封率為45.63%,載藥效率為84.63%;

實施例116得到的聚乙二醇醚-聚酯三嵌段共聚物載藥納米膠束的包封率為51.37%,載藥效率為95.47%。

實施例117~119

聚乙二醇-聚酯三嵌段共聚物分別選用實施例9制備的聚乙二醇-聚(D-丙交酯)三嵌段共聚物100mg,實施例19制備的聚乙二醇-聚(L-丙交酯)三嵌段共聚物100mg,實施例9制備的聚乙二醇-聚(D-丙交酯)三嵌段共聚物與實施例19制備的聚乙二醇-聚(L-丙交酯)三嵌段共聚物各50mg混合。

將多西紫杉醇溶解于四氫呋喃中,多西紫杉醇的濃度為0.4mg/mL,攪拌5h,溶解后,將多西紫杉醇-四氫呋喃溶液滴加到稱量好的聚乙二醇醚-聚酯三嵌段共聚物中配置成多西紫杉醇與聚乙二醇醚-聚酯三嵌段共聚物質量比分別為1:20,1:10,3:20,4:20,5:20的溶液繼續攪拌2h,設置注射泵流速0.1mL/min、流量(mL)設定為25mL設置攪拌器的攪拌速度1000rpm。將溶有多西紫杉醇的聚乙二醇-聚酯三嵌段共聚物溶液放在攪拌器上攪拌,用設定好的注射泵向溶液中勻速滴加Milli-Q。滴加結束后繼續攪拌10h,用透析袋(MWCO=3500)在Milli-Q中透析24h,換水5次以上。透析后將溶液凍干,即得具有生物活性的聚乙二醇醚-聚酯三嵌段共聚物載藥納米膠束。

實施例117得到的聚乙二醇醚-聚酯三嵌段共聚物載藥納米膠束的包封率為14.37%,載藥效率為84.58%;

實施例118得到的聚乙二醇醚-聚酯三嵌段共聚物載藥納米膠束的包封率為14.47%,載藥效率為86.54%;

實施例119得到的聚乙二醇醚-聚酯三嵌段共聚物載藥納米膠束的包封率為16.74%,載藥效率為96.35%。

實施例120~122

聚乙二醇-聚酯三嵌段共聚物分別選用實施例9制備的聚乙二醇-聚(D-丙交酯)三嵌段共聚物100mg,實施例19制備的聚乙二醇-聚(L-丙交酯)三嵌段共聚物100mg,實施例9制備的聚乙二醇-聚(D-丙交酯)三嵌段共聚物與實施例19制備的聚乙二醇-聚(L-丙交酯)三嵌段共聚物各50mg混合。

將柔紅霉素溶解于四氫呋喃中,柔紅霉素的濃度為0.4mg/mL,攪拌5h,溶解后,將柔紅霉素-四氫呋喃溶液滴加到稱量好的聚乙二醇醚-聚酯三嵌段共聚物中配置成柔紅霉素與聚乙二醇醚-聚酯三嵌段共聚物質量比分別為1:20,1:10,3:20,4:20,5:20的溶液繼續攪拌2h,設置注射泵流速0.1mL/min、流量(mL)設定為25mL設置攪拌器的攪拌速度1000rpm。將溶有柔紅霉素的聚乙二醇-聚酯三嵌段共聚物溶液放在攪拌器上攪拌,用設定好的注射泵向溶液中勻速滴加Milli-Q。滴加結束后繼續攪拌10h,用透析袋(MWCO=3500)在Milli-Q中透析24h,換水5次以上。透析后將溶液凍干,即得具有生物活性的聚乙二醇醚-聚酯三嵌段共聚物載藥納米膠束。

實施例120得到的聚乙二醇醚-聚酯三嵌段共聚物載藥納米膠束的包封率為15.36%,載藥效率為86.35%;

實施例121得到的聚乙二醇醚-聚酯三嵌段共聚物載藥納米膠束的包封率為15.32%,載藥效率為87.12%;

實施例122得到的聚乙二醇醚-聚酯三嵌段共聚物載藥納米膠束的包封率為16.83%,載藥效率為97.32%。

實施例123~125

聚乙二醇-聚酯三嵌段共聚物分別選用實施例9制備的聚乙二醇-聚(D-丙交酯)三嵌段共聚物100mg,實施例19制備的聚乙二醇-聚(L-丙交酯)三嵌段共聚物100mg,實施例9制備的聚乙二醇-聚(D-丙交酯)三嵌段共聚物與實施例19制備的聚乙二醇-聚(L-丙交酯)三嵌段共聚物各50mg混合。

將阿霉素溶解于四氫呋喃中,阿霉素的濃度為0.4mg/mL,攪拌5h,溶解后,將阿霉素-四氫呋喃溶液滴加到稱量好的聚乙二醇醚-聚酯三嵌段共聚物中配置成阿霉素與聚乙二醇醚-聚酯三嵌段共聚物質量比分別為1:20,1:10,3:20,4:20,5:20的溶液繼續攪拌2h,設置注射泵流速0.1mL/min、流量(mL)設定為25mL設置攪拌器的攪拌速度1000rpm。將溶有阿霉素的聚乙二醇-聚酯三嵌段共聚物溶液放在攪拌器上攪拌,用設定好的注射泵向溶液中勻速滴加Milli-Q。滴加結束后繼續攪拌10h,用透析袋(MWCO=3500)在Milli-Q中透析24h,換水5次以上。透析后將溶液凍干,即得具有生物活性的聚乙二醇醚-聚酯三嵌段共聚物載藥納米膠束。

實施例123得到的聚乙二醇醚-聚酯三嵌段共聚物載藥納米膠束的包封率為15.23%,載藥效率為86.34%;

實施例124得到的聚乙二醇醚-聚酯三嵌段共聚物載藥納米膠束的包封率為15.47%,載藥效率為86.25%;

實施例125得到的聚乙二醇醚-聚酯三嵌段共聚物載藥納米膠束的包封率為17.82%,載藥效率為96.35%。

實施例126~128

聚乙二醇-聚酯三嵌段共聚物分別選用實施例9制備的聚乙二醇-聚(D-丙交酯)三嵌段共聚物100mg,實施例19制備的聚乙二醇-聚(L-丙交酯)三嵌段共聚物100mg,實施例9制備的聚乙二醇-聚(D-丙交酯)三嵌段共聚物與實施例19制備的聚乙二醇-聚(L-丙交酯)三嵌段共聚物各50mg混合。

將表阿霉素溶解于四氫呋喃中,表阿霉素的濃度為0.4mg/mL,攪拌5h,溶解后,將表阿霉素-四氫呋喃溶液滴加到稱量好的聚乙二醇醚-聚酯三嵌段共聚物中配置成表阿霉素與聚乙二醇醚-聚酯三嵌段共聚物質量比分別為1:20,1:10,3:20,4:20,5:20的溶液繼續攪拌2h,設置注射泵流速0.1mL/min、流量(mL)設定為25mL設置攪拌器的攪拌速度1000rpm。將溶有表阿霉素的聚乙二醇-聚酯三嵌段共聚物溶液放在攪拌器上攪拌,用設定好的注射泵向溶液中勻速滴加Milli-Q。滴加結束后繼續攪拌10h,用透析袋(MWCO=3500)在Milli-Q中透析24h,換水5次以上。透析后將溶液凍干,即得具有生物活性的聚乙二醇醚-聚酯三嵌段共聚物載藥納米膠束。

實施例126得到的聚乙二醇醚-聚酯三嵌段共聚物載藥納米膠束的包封率為15.78%,載藥效率為86.34%;

實施例127得到的聚乙二醇醚-聚酯三嵌段共聚物載藥納米膠束的包封率為15.62%,載藥效率為85.96%;

實施例128得到的聚乙二醇醚-聚酯三嵌段共聚物載藥納米膠束的包封率為17.35%,載藥效率為97.42%。

實施例129~131

聚乙二醇-聚酯三嵌段共聚物分別選用實施例9制備的聚乙二醇-聚(D-丙交酯)三嵌段共聚物100mg,實施例19制備的聚乙二醇-聚(L-丙交酯)三嵌段共聚物100mg,實施例9制備的聚乙二醇-聚(D-丙交酯)三嵌段共聚物與實施例19制備的聚乙二醇-聚(L-丙交酯)三嵌段共聚物各50mg混合。

將吡柔比星溶解于四氫呋喃中,吡柔比星的濃度為0.4mg/mL,攪拌5h,溶解后,將吡柔比星-四氫呋喃溶液滴加到稱量好的聚乙二醇醚-聚酯三嵌段共聚物中配置成吡柔比星與聚乙二醇醚-聚酯三嵌段共聚物質量比分別為1:20,1:10,3:20,4:20,5:20的溶液繼續攪拌2h,設置注射泵流速0.1mL/min、流量(mL)設定為25mL設置攪拌器的攪拌速度1000rpm。將溶有吡柔比星的聚乙二醇-聚酯三嵌段共聚物溶液放在攪拌器上攪拌,用設定好的注射泵向溶液中勻速滴加Milli-Q。滴加結束后繼續攪拌10h,用透析袋(MWCO=3500)在Milli-Q中透析24h,換水5次以上。透析后將溶液凍干,即得具有生物活性的聚乙二醇醚-聚酯三嵌段共聚物載藥納米膠束。

實施例129得到的聚乙二醇醚-聚酯三嵌段共聚物載藥納米膠束的包封率為15.31%,載藥效率為86.34%;

實施例130得到的聚乙二醇醚-聚酯三嵌段共聚物載藥納米膠束的包封率為15.53%,載藥效率為87.53%;

實施例131得到的聚乙二醇醚-聚酯三嵌段共聚物載藥納米膠束的包封率為17.83%,載藥效率為97.36%。

以上實施例的說明只是用于幫助理解本發明的方法及其核心思想。應當指出,對于本技術領域的普通技術人員來說,在不脫離本發明原理的前提下,還可以對本發明進行若干改進和修飾,這些改進和修飾也落入本發明權利要求的保護范圍內。

對所公開的實施例的上述說明,使本領域專業技術人員能夠實現或使用本發明。對這些實施例的多種修改對本領域的專業技術人員來說將是顯而易見的,本文中所定義的一般原理可以在不脫離本發明的精神或范圍的情況下,在其它實施例中實現。因此,本發明將不會被限制于本文所示的這些實施例,而是要符合與本文所公開的原理和新穎特點相一致的最寬的范圍。

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