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LYCOJAPONICUMINA在抗皰疹病毒的藥物中的應用.pdf

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LYCOJAPONICUMINA 皰疹病毒 藥物 中的 應用
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摘要
申請專利號:

CN201310436248.8

申請日:

20130923

公開號:

CN103479628A

公開日:

20140101

當前法律狀態:

有效性:

有效

法律詳情:
IPC分類號: A61K31/424,A61P31/22 主分類號: A61K31/424,A61P31/22
申請人: 南京廣康協生物醫藥技術有限公司
發明人: 江春平,王慧
地址: 210019 江蘇省南京市建鄴區奧體大街69號新城科技大廈01幢5層
優先權: CN201310436248A
專利代理機構: 江蘇銀創律師事務所 代理人: 何震花
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法律狀態
申請(專利)號:

CN201310436248.8

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法律狀態公告日:

法律狀態類型:

摘要

本發明公開了Lycojaponicumin A在制備抗皰疹病毒的藥物中的應用。經實驗證明,Lycojaponicumin A對抗單純皰疹病毒1型(Herpessimplexvirus,HSV-1)和單純皰疹病毒2型(Herpessimplexvirus,HSV-2)有顯著的抑制作用,這提示Lycojaponicumin A在治療皰疹病毒感染性疾病領域存在潛在的應用價值,本發明為Lycojaponicumin A臨床用于治療皰疹病毒感染性疾病提供實驗依據,對研制抗HSV-1和HSV-2病毒的藥物提供了一定的指導意義,具有重要的參考價值。

權利要求書

1.Lycojaponicumin?A在抗皰疹病毒的藥物中的應用,所述化合物Lycojaponicumin?A結構如所示:

說明書

技術領域

本發明涉及Lycojaponicumin?A在制備抗單純皰疹病毒1型(Herpes?simplex?virus,HSV-1)和單純皰疹病毒2型(Herpes?simplex?virus,HSV-2)藥物中的應用。

背景技術

HSV-1、HSV-2屬于皰疹科病毒,HSV-1和HSV-2不僅引起口唇或生殖粘膜皰疹,同時也是引起腦炎、肝炎、全身嚴重感染甚至宮內感染的重要病原;

本發明涉及的化合物Lycojaponicumin?A是一個2012年發表(Wang,?X.?J.?et?al.,?2012.?Lycojaponicumins?A-C,?Three?Alkaloids?with?an?Unprecedented?Skeleton?from?Lycopodium?japonicum.?Organic?Letters?14(10),?2614-2617.)的新骨架化合物,該化合物擁有全新的骨架類型,對于本發明涉及的Lycojaponicumin?A在制備治療皰疹病毒感染藥物中的用途屬于首次公開,由于骨架類型屬于全新的骨架類型,而且其對于皰疹病毒抑制活性強得意想不到,不存在由其他化合物給出任何啟示的可能,具備突出的實質性特點,同時用于皰疹病毒感染的防治顯然具有顯著的進步。

發明內容

針對上述現有技術,本發明提供了Lycojaponicumin?A在制藥中的新用途:

Lycojaponicumin?A在制備抗HSV-1的藥物中的應用。

Lycojaponicumin?A在制備抗HSV-2的藥物中的應用。?

經實驗證明,Lycojaponicumin?A對HSV-1、HSV-2有顯著的抑制作用:抑制HSV-1、HSV-2在HEK293細胞出現CPE效應(Cytopathic?Effect,CPE),IC50分別為2-12.01、2-11.77,TI分別為1192.7、1009.9。

所述化合物Lycojaponicumin?A結構如式(Ⅰ)所示:

本發明為Lycojaponicumin?A臨床用于治療皰疹病毒感染性疾病提供實驗依據,對研制抗HSV-1、HSV-2病毒的藥物提供了一定的指導意義,具有重要的參考價值。

本發明涉及的Lycojaponicumin?A在制備治療皰疹病毒感染藥物中的用途屬于首次公開,由于骨架類型屬于全新的骨架類型,而且其對于皰疹病毒抑制活性強得意想不到,不存在由其他化合物給出任何啟示的可能,具備突出的實質性特點,同時用于黃皰疹病毒感染的防治顯然具有顯著的進步。

為了更好地理解本發明的實質,下面將結合實施例對本發明作進一步的說明。

具體實施方式

本發明所涉及化合物Lycojaponicumin?A的制備方法參見文獻(Wang,?X.?J.?et?al.,?2012.?Lycojaponicumins?A-C,?Three?Alkaloids?with?an?Unprecedented?Skeleton?from?Lycopodium?japonicum.?Organic?Letters?14(10),?2614-2617.)。

以下通過實施例對本發明作進一步詳細的說明,但本發明的保護范圍不受具體實施例的任何限制,而是由權利要求加以限定。

實施例1:本發明所涉及化合物Lycojaponicumin?A片劑的制備:

取20克化合物Lycojaponicumin?A,加入制備片劑的常規輔料180克,混勻,常規壓片機制成1000片。

實施例2:本發明所涉及化合物Lycojaponicumin?A膠囊劑的制備:

取20克化合物Lycojaponicumin?A,加入制備膠囊劑的常規輔料如淀粉180克,混勻,裝膠囊制成1000片。

下面通過藥效學實驗來進一步說明其藥物活性。

實驗例:Lycojaponicumin?A對皰疹病毒的作用研究:

(1)細胞株與病毒株:

人胚腎細胞(HEK293,為HSV-1、HSV-2病毒敏感細胞)購自美國Clontech公司;單純皰疹病毒1型(HSV-1)Sm44株、單純皰癥病毒2型(HSV-2)333株引自中國CDC病毒病研究所。

(2)細胞毒性測定:

參照文獻(汪受傳,王霖,陳超等,清肺口服液含藥血清對病毒抑制作用的實驗研究,南京中醫藥大學學報,2008;24(1):25~27)的方法,將各樣品以2倍比做系列稀釋(20~-5),然后按稀釋順序橫向接種于96板孔中的HEK293上,每孔100uL,每稀釋度縱向重復3孔(A、B、C行),平行設微孔板D的1~6孔為細胞對照,7~12孔不接種細胞為空白對照,顯微鏡下每日觀察CPE,連續觀察7d,中性紅染色,在540nm波長測定OD值,將實驗組與細胞對照組OD值相比計算細胞存活率,用Reed-Muench方法計算藥物半數細胞中毒濃度(TD50)。

(4)抑毒試驗:

參照文獻(汪受傳,王霖,陳超等,清肺口服液含藥血清對病毒抑制作用的實驗研究,南京中醫藥大學學報,2008;24(1):25~27)的方法,將樣品按稀釋順序(2-3~-14)橫向接種于96板孔中的單層細胞上,每孔100?uL,每稀釋度縱向重復4孔,微孔板的A、B、C行加含100個TCID50的病毒100?uL作為試驗組,D行補充等容量細胞維持液為不同濃度藥物對照,平行設F行作為病毒對照,E行的1~12作為細胞對照。37℃、5%CO2培養,每日觀察CPE,連續觀察4d。病毒對照出現90%以上CPE時,加1%中性紅染色,用酶標儀在波長540nm波長讀取A值,各組A值去除病毒對照組A值,將各試驗組與細胞對照組A值相比,獲得細胞存活率,用Reed-Muench方法計算半數抑毒濃度(IC50),最終將TD50和IC50相比獲得抑毒指數(TI)。

(5)結果:

①樣品TD50的測定:對照組細胞顯微鏡下觀察貼壁生長致密、形態良好。Lycojaponicumin?A的TD50在HEK293分別為2-1.79。

②抑毒實驗:對照組細胞貼壁致密、形態良好。鏡下觀察發現,HSV-1、HSV-2病毒對照組分別在第3d、3d出現90%以上的CPE,HSV?1和HSV?2在HEK293CPE則以腫脹、多細胞融合(HSV?1致多個細胞融和成大泡,而HSV?2致融合為小泡)、變圓、脫落為主要特征。

而抑毒試驗各組細胞,按照Lycojaponicumin?A樣品稀釋梯度,梯度規律出現CPE:HSV?1-HEK293在第10稀釋度之前、HSV?2-HEK293組在第9稀釋度之前細胞完全被保護,之后出現CPE,CPE隨樣品濃度減少逐漸加重。

將上述實驗板用1%中性紅染色、用酶標儀測450nmA值,各組A值減掉病毒對照組A值后,各實驗組A值與細胞對照組A值相比獲得IC50,IC50與TD50相比獲得Lycojaponicumin?A的TI:抑制HSV-1、HSV-2在HEK293細胞發生CPE,IC50分別為2-12.01、2-11.77,TI分別為1192.7、1009.9。

結論:Lycojaponicumin?A具有顯著的抗皰疹科病毒(包括HSV-1、HEV-2)的作用,而且安全性高,因此Lycojaponicumin?A在治療皰疹病毒感染疾病中具有廣泛的應用背景。

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