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一種貉精液常溫保存稀釋液和采精方法.pdf

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一種 精液 常溫 保存 稀釋液 方法
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摘要
申請專利號:

CN201310274435.0

申請日:

20130627

公開號:

CN103380770B

公開日:

20150902

當前法律狀態:

有效性:

失效

法律詳情:
IPC分類號: A01N1/02,A61D19/02 主分類號: A01N1/02,A61D19/02
申請人: 中國農業科學院特產研究所
發明人: 徐超,趙家平,李光玉,吳艷玲,宋興超,劉晗璐,魏海軍,王桂武,張秀麗,趙偉剛
地址: 130122 吉林省長春市凈月區聚業大街4899號
優先權: CN201310274435A
專利代理機構: 代理人:
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法律狀態
申請(專利)號:

CN201310274435.0

授權公告號:

法律狀態公告日:

法律狀態類型:

摘要

本發明公開了一種貉子精液常溫保存稀釋液和采精方法,其特征在于稀釋液各組分及其適宜濃度為:葡萄糖36-38g、碳酸氫鈉1.20-1.30g、乙二胺四乙酸1.20-1.30g、檸檬酸鈉5.50-6.30g、氯化鉀0.65-0.85g、牛血清白蛋白0.50-3.05g、乙酰半胱氨酸0.05-0.30g、青霉素0.50-1.20g、鏈霉素0.30-1.00g、林可霉素0.05-1.50g、壯觀霉素0.01-0.05g,三蒸水定容至1000ml;采精方法關鍵為利用發情母貉為臺畜訓練公貉使之對人工采精形成條件反射,重復3-4次待其形成條件反射后利用放置有發情母貉尿液的模擬母貉臺架代替發情母貉可順利采得公貉精液。利用本發明可順利采得公貉精液稀釋保存后人工授精獲得后代,將在促進貉人工授精技術的推廣,提高養貉業經濟效益。

權利要求書

1.一種貉子精液常溫保存稀釋液,其特征在于精液稀釋液各組分及其適宜濃度為:葡萄糖37.538g、碳酸氫鈉1.255g、乙二胺四乙酸1.262g、檸檬酸鈉6.035g、氯化鉀0.758g、牛血清白蛋白1.052g、N-乙酰-L-半胱氨酸0.169g、青霉素0.625g、鏈霉素0.505g、林可霉素0.150g、壯觀霉素0.305g,三蒸水定容至1000ml。

說明書

技術領域

本發明涉及繁殖生物技術領域,特別是涉及一種貉精液常溫保存稀釋液和采精方法。

背景技術

貉是珍貴的毛皮動物,以飼養成本低、耐粗飼、抗病力強的特點成為我國三大毛皮動物之一,其養殖數量逐年增加,目前我國年產貉皮量居世界第一。貉雖然在我國養殖量很大,但其繁殖目前還采用本交方式,本交需要大量的種公貉增加飼養成本,浪費人力物力,而且公貉發情早于母貉,在配種后期經常出現大量種公貉無法使用情況,貉人工授精技術可解決這些問題。

貉由于馴養時間短、飼養規模小和物種特異性差異等因素的限制,國內外貉精液采集及相關方面的研究資料很少。目前狐、犬等動物人工授精已較成熟,關于貉人工授精由于采精問題影響研究和推廣。目前貉精液保存的研究主要集中在采精方法上,關于貉精液常溫保存專用稀釋液的研究很少,尚未在中國知網上檢索發現。

發明內容

為了提高良種公貉的利用率,降低飼養管理成本。加速貉群改良速度,提高了貉養殖經濟效益,本發明的目的是為貉人工授精提供一種貉精液常溫保存稀釋液和采精方法。在對前人研究和借鑒其他動物的精液常溫稀釋液配方和采精方法的基礎上,根據貉子精子特性和生物學特點,以保存的精子活率、生存指數、頂體完整率、畸形率等重要客觀指標為依據,研制出一種貉精液常溫保存稀釋液配方和一種貉采精方法。

該稀釋液的配方為:葡萄糖36-38g、碳酸氫鈉1.20-1.30g、乙二胺四乙酸1.20-1.30g、檸檬酸鈉5.50-6.30g、氯化鉀0.65-0.85g、牛血清白蛋白0.50-3.05g、N-乙酰-L-半胱氨酸0.05-0.30g、青霉素0.50-1.20g、鏈霉素0.30-1.00g、林可霉素0.05-1.50g、壯觀霉素0.01-0.05g,三蒸水定容至1000ml。稀釋液采用0.22μm濾器過濾,精液稀釋后常溫保存溫度為17℃。

采精方法的關鍵為利用發情母貉為臺畜訓練公貉使之對人工采精形成條件反射,重復3-4次待其形成條件反射后利用放置有發情母貉尿液的模擬母貉臺架代替發情母貉即可順利采得公貉精液。

與現有技術相比,利用本發明可順利采得公貉精液并稀釋后進行保存和人工授精并順利獲得后代,實用的采精技術和效果良好的精液稀釋液,必將在很大程度上促進貉人工授精技術的推廣,提高養貉業經濟效益。

具體實施方式

1.稀釋液的配制:取葡萄糖37.538g、碳酸氫鈉1.255g、乙二胺四乙酸1.262g、檸檬酸鈉6.035g、氯化鉀0.758g、牛血清白蛋白1.052g、N-乙酰-L-半胱氨酸0.169g、青霉素0.625g、鏈霉素0.505g、林可霉素0.150g、壯觀霉素0.305g溶于三蒸水中,定容至1000ml容量瓶中,用0.22μm濾器過濾后及時使用或分裝于無菌瓶中-20℃凍存。

2.精液采集:將發情母貉固定于采精架上,將其脖子置于卡環中并鎖死。讓采精公貉爬跨母貉,助手保定公貉。用溫肥皂水清洗公貉外陰部后溫水沖凈,然后用38-50℃0.1%-0.2%新潔爾滅浸泡消毒毛巾浸濕公貉下腹部毛,以不往下滴水為準。采精時先按摩公貉睪丸和會陰部15-60s,刺激性欲給公貉一個采精信號。采精者將拇指、食指捏在公貉陰莖兩側,中指捏在陰莖腹面,握筆狀捏住陰莖中部并沿陰莖縱向擼壓和滑動陰莖包皮,對陰莖進行摩擦刺激。開始時滑動速度4-6次/s,擼動幅度5-7厘米。待陰莖勃起和球狀海綿體膨大后,將包皮擼至球狀海綿體后方繼續擼壓球狀海綿體和后部的陰莖,擼壓速度減慢,每秒擼壓1次,擼壓球狀海綿體時;稍用力些,如此反復擼壓按摩直至公貉射精為止,另一手握住集精杯迅速收集精液。或待海綿體膨大后用另一手拇指和食指輕輕刺激龜頭,用無名指和掌心握住集精杯收集精液。采精時盡量不要將陰莖從公貉兩后腿之間拉向后方,應拉向側前方。隔一天采精一次,重復3-4次形成條件反射后可不用發情母貉,采用放置有發情母貉尿液的模擬母貉臺架讓采精公貉爬跨模擬臺架后即可順利采出精液,利用本方法配合模擬母貉臺架采精成功率可達80%以上。

3.將集精杯放入35℃水浴鍋中,用移液器吸取20μl精液檢查精子活力和密度,取活力0.8以上精液與提前預熱好的本精液稀釋液等溫稀釋,將稀釋液緩慢注入精液中,邊加入邊搖勻。稀釋好的精液可即時用于輸精,也可緩慢降溫至室溫后17℃保存24-48h后輸精。

4.精液常規指標檢測:精子活力的測定采用目測法。從恒溫箱中取出常溫保存精液,用移液器吸取30μl置于37℃預熱載玻片上,蓋上蓋玻片后立即在200倍光學顯微鏡下觀察。每個樣品隨機觀察3個視野,檢測視野中直線前進運動的精子數占總精子數的比例作為精子活力,計算精子有效存活時間和生存指數。采用南京建成精子快速染色(快速改良巴氏法)試劑盒,檢測保存精子畸形率和頂體完整率,具體結果見表1。

5.人工授精:應用本實例保存的精液即時和24h后對發情正常的烏蘇里貉進行人工授精。25d后進行妊娠檢查,將妊娠母飼養直至分娩得健康幼崽,人工授精受胎率90%以上。

表1用本實施例制作的稀釋液保存貉精液品質檢測結果

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