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一種含耐熱超氧化物歧化酶和生長因子的口腔護理組合物.pdf

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一種 耐熱 超氧化物歧化酶 生長因子 口腔 護理 組合
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摘要
申請專利號:

CN201310413876.4

申請日:

20130911

公開號:

CN103463627A

公開日:

20131225

當前法律狀態:

有效性:

有效

法律詳情:
IPC分類號: A61K38/44,A61K9/127,A61K8/66,A61K8/64,A61K8/14,A23G3/44,A61P1/02,A61Q11/00,A61K38/18 主分類號: A61K38/44,A61K9/127,A61K8/66,A61K8/64,A61K8/14,A23G3/44,A61P1/02,A61Q11/00,A61K38/18
申請人: 拉芳家化股份有限公司
發明人: 田俊
地址: 515041 廣東省汕頭市潮南區國道324線新慶路段拉芳工業城
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法律狀態
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CN201310413876.4

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法律狀態類型:

摘要

本發明公開了一種抗菌消炎、預防修護作用的口腔護理組合物。其有效組分包括耐熱超氧化物歧化酶、表皮細胞生長因子和脂質體。耐熱超氧化物歧化酶比普通超氧化物歧化酶穩定性更高,對多種口腔問題導致的牙齦出血、紅腫的癥狀有改善作用;表皮生長因子具有促進皮膚和粘膜創傷愈合、消炎止痛、防止潰瘍的功效;單室脂質體包裹耐熱超氧化物歧化酶和表皮細胞生長因子使其生物活性更持久,具有靶向性和透皮吸收性。

權利要求書

1.一種口腔護理組合物,其特征在于:所述口腔護理組合物由脂質體以單室脂質體形式包裹耐熱超氧化物歧化酶、表皮細胞生長因子而構成;所述脂質體平均粒徑在600-1000nm之間;所述的耐熱超氧化物歧化酶占組合物重量的0.1-10.0%,濃度為50-500U/ml;所述的表皮細胞生長因子占組合物重量的0.1-10.0%,濃度為0.1-100mg/ml;所述的脂質體占組合物重量的80%-99.8%,平均粒徑在20-5000nm之間。?2.根據權利要求1的口腔護理組合物,其特征在于:所述的耐熱超氧化物歧化酶是從一種極端嗜熱菌(Aquifex?pyrophilus)中提取到的Fe-SOD凍干粉。?3.根據權利要求1或2所述的口腔護理組合物,其中的耐熱超氧化物歧化酶其分子量在38700至40000之間,濃度為100-250U/ml。?4.根據權利要求1的口腔護理組合物,其特征在于:所述的表皮細胞生長因子是凍干粉、原液形態中的至少一種,濃度為0.2-20mg/ml。?5.根據權利要求1的口腔護理組合物,其特征在于:所述脂質體是由一個磷酸基和一個季銨鹽基組成的親水性基團和兩個較長的烴基組成的親脂性基團組成。?6.根據權利要求5的口腔護理組合物,其特征在于:其中脂質體至少包含卵磷脂、膽固醇、神經酰胺、鞘磷脂中的一種或幾種組成,平均粒徑300-1300nm之間。?7.根據權利要求1的口腔護理組合物,其等電點位于5-7之間。?8.前述權利要求中任一項的口腔護理組合物,在牙膏、漱口水凝膠劑、散劑、糖食和錠劑口腔護理產品中的應用。?

說明書

技術領域

本發明涉及口腔護理領域,具體涉及一種脂質體包裹耐熱超氧化物歧化酶和表皮細胞生長因子的口腔護理組合物。

背景技術

超氧化物歧化酶(Superoxide?dismutase),簡稱SOD;是富含金屬離子的蛋白質,廣泛存在于動物、植物、微生物細胞或細胞器中。按其所含金屬輔基不同可分為三類;第一類含Cu、Zn(簡稱Cu-Zn-SOD),主要存在于真核細胞的細胞漿中;第二類含Mn(Mn-SOD),存在于真核細胞的線粒體和原核細胞中;第三類含Fe(Fe-SOD),只存在于原核生物中。1969年Mc?Cord和Fridovich純化并闡明了牛血紅細胞超氧化物歧化酶的酶學特性及主要生物學功能。不同類型、不同來源的超氧化物歧化酶都具有一個極其重要的生物學功能,即催化超氧自由基發生歧化反應,號稱超氧自由基的第一道防線和最重要的抗氧化酶。實驗證明,超氧化物歧化酶具有促進細胞生長、治療皮膚炎癥、抗衰老的作用。

表皮細胞生長因子(Epidermai?Growth?Factor),簡稱EGF;是一種廣泛存在于人的皮膚細胞、體液、腎臟和腦組織中的由53個氨基酸組成的生物活性多肽,是一種具有生理功能的生物活性物質,具有很強的生物學效應。在人體內,極微量的表皮細胞生長因子就能起到很大的生物學作用,能促進皮膚組織細胞的增殖與生長,使新生年輕的細胞迅速代替衰老和死亡細胞。定期為皮膚細胞補充表皮細胞生長因子,就可以持續促進細胞的合成,保持表皮細胞旺盛的新陳代謝,還有促進皮膚和粘膜創傷愈合、消炎止痛、防治潰瘍的功效。

但是在研究中發現,超氧化物歧化酶在口腔護理應用方面存在以下問題:首先,超氧化物歧化酶進入細胞后其活性半衰期較短(僅幾小時);再者,超氧化物歧化酶生物活性可能受到口腔用品中其他基質的影響而不穩定。表皮細胞生長因子也屬于生物技術制劑,具有特殊的生物活性,往往會與口腔用品中的化學物質發生反應而失去活性。同時,表皮細胞生長因子、超氧化物歧化酶在高于37℃或者在中性以外的pH條件下均會失活。各種生物制劑都有不同的作用點和受體,如果配方不當或者使用不當,不僅效果不明顯,而且不安全。

有研究人員從一種極端嗜熱菌(Aquifex?pyrophilus)提取到的Fe-SOD,制成耐熱超氧化物歧化酶,解決了普通超氧化物歧化酶應用當中穩定性不夠的問題。

同時采用脂質體包裹也可以提高生物制劑的穩定性。脂質體在化妝品中的應用比較多,主要包括兩方面:一、脂質體作為功能性成分的載體避免生物活性物質相互作用或發生生物降解;二、脂質體膜中的磷脂和不飽和脂肪酸本身具有很好的保濕和護膚作用。脂質體特別是其與皮膚組成相似的類脂,如神經鞘磷脂所形成的脂質體與皮膚角質層脂質有高度相似性,能增加藥物在皮膚局部的蓄積,增強皮膚靶向性,并能持續釋放藥物;具有增強藥物進入角質層和表皮類脂內的作用。

脂質體在化妝品中應用本質上是為皮膚的局部給藥:在以皮膚為靶向部位設計脂質體時,應使藥物最大量地保留在皮膚中,盡量少地進入血液循環,即有效性成分作用于皮膚表面的角質層或進入表皮或真皮。即化妝品中脂質體及其他功能性成分要實現經皮滲透而又同時避免透過皮膚進入血循環,引起毒副作用。目前,脂質體經皮給藥的研究表明:脂質體粒徑大于1000nm的脂質體主要滯留于角質層;600nm-1000nm的脂質體可以滲透到表皮層和真皮層;而小于200nm的脂質體則會直接進入體循環系統,引起毒副作用。因此,我們在選擇制備方法時以制備單室脂質體的方法為基礎。

目前,將超氧化物歧化酶或者表皮細胞生長因子單獨使用于口腔護理產品已有相關研究報道;而耐熱超氧化物歧化酶沒有相關應用研究報道,將耐熱超氧化物歧化酶和表皮細胞生長因子通過脂質體包裹應用于口腔護理產品也沒有相關研究報道。

發明內容

本發明的目的在于克服現有技術的不足,提供了一種穩定性好、靶向性、緩釋控釋效果好、且對口腔炎癥、潰瘍防治有效的脂質體包裹耐熱超氧化物歧化酶和表皮細胞生長因子的口腔護理組合物。

本發明的另外一個目的是提供上述口腔護理組合物在口腔護理產品中的應用。

本發明的上述目的是通過如下方案予以實現的:

一種口腔護理組合物,所述口腔護理組合物由脂質體以單室脂質體形式包裹耐熱超氧化物歧化酶、表皮細胞生長因子而構成;所述脂質體平均粒徑在600-1000nm之間;所述的耐熱超氧化物歧化酶占組合物重量的0.1-10.0%,濃度為50-500U/ml;所述的表皮細胞生長因子占組合物重量的0.1-10.0%,濃度為0.1-100mg/ml;所述的脂質體占組合物重量的80%-99.8%,平均粒徑在20-5000nm之間。

本發明的口腔護理組合物,所述的耐熱超氧化物歧化酶是從一種極端嗜熱菌(Aquifex?pyrophilus)中提取到的Fe-SOD凍干粉。

本發明的口腔護理組合物,其中的耐熱超氧化物歧化酶其分子量在38700至40000之間,濃度在100-250U/ml之間。

本發明的口腔護理組合物,所述的表皮細胞生長因子是凍干粉、原液形態中的至少一種,濃度在0.2-20mg/ml之間。

本發明的口腔護理組合物,所述的脂質體是由一個磷酸基和一個季銨鹽基組成的親水性基團和兩個較長的烴基組成的親脂性基團。

本發明的口腔護理組合物,其中脂質體至少包含卵磷脂、膽固醇、神經酰胺、鞘磷脂中的一種或幾種組成,平均粒徑300-1300nm之間。

本發明的口腔護理組合物,其等電點位于5-7之間。

本發明的口腔護理組合物可在牙膏、漱口水、凝膠劑、散劑、糖食和錠劑等口腔護理產品中使用。其含量占口腔護理產品中重量百分比為0.01%-5%。

與現有技術相比,本發明有如下有益效果:

1.本發明提供的口腔護理用品組合物中采用耐熱超氧化物歧化酶,在生產應用和產品儲存期的穩定性高于普通超氧化物歧化酶。

2.本發明提供的口腔護理用品組合物采用單室脂質體包裹耐熱超氧化物歧化酶和表皮細胞生長因子,脂質體對兩種生物制劑提供保護,提高了組合物的穩定性。

3.由于人體皮膚的角質層磷脂層含量較少,基底層中磷脂質含量最高,本發明提供的口腔護理用品組合物在基底層中更容易被磷脂質溶解并緩慢釋放,讓耐熱超氧化物歧化酶和表皮細胞生長因子被皮膚吸收。

4.本發明提供的口腔護理用品組合物采用耐熱超氧化物歧化酶和表皮細胞生長因子復配使用,起到協同增效的作用,擴大了在口腔用品里的使用范圍。

5.本發明提供的口腔護理用品的組合物使用范圍廣泛,適用于牙周炎、牙齦炎、牙齦出血等多種口腔疾病。

具體實施方式

本發明耐熱超氧化物歧化酶是由一種極端嗜熱菌(Aquifex?pyrophilus)提取到的Fe-SOD,其分子量在38700至40000之間。具有以下兩個特征:(1)在高溫條件下表現出良好的熱穩定性,在80℃處理1~2小時,酶活力保持在95%以上,在100℃處理1~2小時,酶活力保持在40%以上;(2)在pH4-11范圍內保持90%以上的酶活力。發酵耐高溫超氧化物歧化酶的工藝技術已獲得國家發明專利(Zl200510005207.9)。

本發明的脂質體可以由卵磷脂、膽固醇、神經酰胺、鞘磷脂中的一種或幾種組成。可以保證耐熱超氧化物歧化酶和表皮細胞生長因子的穩定性、生物相容性、透皮吸收和緩釋控釋效果。

本發明的脂質體可由以脫水再水化法或預制脂質體法制備。該制備方法已被現有技術所公開,且包封率相比較其他方法最高,達到65-80%。

本發明的組合物采用單室脂質體包裹,粒徑在600-1000nm之間。根據研究直徑600nm以下的脂質體極易穿透皮膚,直徑1000nm以上的脂質體則易停留在角質層內。該脂質體結構能有效將包裹物作用在皮膚層中,體現其靶向性。

附圖說明

圖1是牙周病患者使用實施例2牙膏組合物前后的LDH比較(n=40)。

下面結合具體實施例對本發明做進一步地描述,但具體實施例并不對本發明做任何限定。

實施例1

本發明口腔護理組合物由如下質量分數各組分組成:

上述口腔護理組合物的平均粒徑為600-800nm。

上述口腔護理組合物耐熱超氧化物歧化酶、表皮細胞生長因子、卵磷脂、膽固醇、鞘磷脂均為市售純品。

上述口腔護理組合物制備方法,其具體步驟如下:

將耐熱超氧化物歧化酶、表皮細胞生長因子、卵磷脂、膽固醇、鞘磷脂通過加熱熔融或用有機溶劑溶解,制成脂質溶液。

通過流化床將上述脂質體溶液直接噴霧與懸浮在流化床中間的支撐劑上,揮發有機溶劑,即得耐熱超氧化物歧化酶/表皮細胞生長因子脂質體。

本發明所述的有機溶劑包括二氯甲烷、三氯甲烷、乙醚和乙醇。

本發明所述的支撐劑選自甘露醇、葡萄糖、山梨醇、蔗糖、乳糖、海藻糖、氯化鈉和聚乙烯吡咯烷酮中的一種。

實施例2

一種含有脂質體包裹耐熱超氧化物歧化酶和表皮細胞生長因子的口腔護理組合物的牙膏組合物,其組分配比如下:

上述牙膏組合物具體制備方法步驟如下:

將糖精鈉、苯甲酸鈉溶于水,制成水相;加入山梨糖醇和PEG400后,混合均勻。

將二氧化硅、羧甲基纖維素鈉、十二烷基硫酸酯鈉、實施例1中A、B、C、D組合物分別均勻分散在步驟1的液相中,高速攪拌并充分混合,真空脫氣后得到牙膏組合物。

實施例3

一種含有脂質體包裹耐熱超氧化物歧化酶和表皮細胞生長因子的口腔護理組合物的漱口水組合物,其組分配比如下:

上述漱口水組合物具體制備方法如下:

將糖精鈉、苯甲酸鈉溶于水中,加入泊洛沙姆407陳化過夜。

將山梨糖醇、香料和實施例1中A、B、C、D組合物分別加入步驟1的液相中,攪拌均勻后過濾得到漱口水組合物。

實施例4脂質體包裹耐熱超氧化物歧化酶和表皮細胞生長因子的口腔護理組合物在口腔護理產品應用中的穩定性實驗

將實施例2的牙膏A組合物和單獨添加超氧化物歧化酶、表皮細胞生長因子的牙膏組合物于溫度40℃、相對濕度75%條件下密閉放置,于放置后0、1、2、3月,分別用ELISA法測定脂質體中耐熱超氧化物歧化酶和表皮細胞生長因子的含量,以0月時脂質體中耐熱超氧化物歧化酶含量和表皮細胞生長因子含量分別為100%,其它各時間耐熱超氧化物歧化酶和表皮細胞生長因子的含量分別與之作比較,觀察耐熱超氧化物歧化酶和表皮細胞生長因子的含量隨時間變化的情況。

超氧化物歧化酶變化百分率

表皮細胞生長因子變化百分率

結果表明,脂質體包裹耐熱超氧化物歧化酶和表皮細胞生長因子的口腔護理組合物比普通超氧化物歧化酶和表皮細胞生長因子單獨應用與到牙膏產品中穩定性更高。

實施例5脂質體包裹耐熱超氧化物歧化酶和表皮細胞生長因子的口腔護理組合物使用效果實驗

牙周病是一種發病率很高,嚴重危害人類健康的牙齒組織的慢性疾病。臨床癥狀為牙齦紅腫、出血以及牙齒松動,嚴重者甚至發展成牙齒脫落。含耐熱超氧化物歧化酶和表皮細胞生長因子的牙膏產品可直接作用在牙齦組織,有利于防御炎癥組織內過多的超氧化物對細胞的損傷,使炎癥得到控制并消失,同時修復受損細胞組織。達到預防和緩解牙周組織病的目的。

材料:

牙周病患者40例,男性20例,女性20例,年齡20-60歲,平均年齡32歲,至少半年未進行牙周治療;陰性對照組40例,男性20例,女性20例,年齡20-60歲,平均年齡33歲,經臨床檢查均無全身系統疾病,口腔內均無急慢性病灶。

實施例2中牙膏A組合物

方法:

實驗室鑒別:唾液乳酸脫氫酶(LDH)生化指標測定。

乳酸脫氫酶(LDH)是一種極為穩定的細胞質酶,存在于正常細胞的胞質中,一旦細胞膜受損,乳酸脫氫酶即被釋放到細胞外;乳酸脫氫酶催化乳酸形成丙酮酸鹽,和INT(四唑鹽類)反應轉化成紅色甲臢化合物,可通過酶標儀進行檢測。顏色形成的量與裂解細胞的數目成正比。應用一個96孔平板讀數計收集可見光波長的吸收值數據。這個分析可用于測量在細胞介導的細胞毒性分析中細胞膜的完整性,這種情況下目標細胞被效應細胞裂解,可判斷細胞受損的程度。有報道可以用作監測牙周組織破壞程度的生化指標,牙周炎患者唾液中乳酸脫氫酶明顯升高。

測試者與使用實施例2牙膏前及后兩周、一個月、兩個月各收集唾液1ml,送檢。

測試結果:

正常人群在使用實施例2牙膏組合物前乳酸脫氫酶平均為268,最低為47,最高為580。

牙周患者在是使用實施例2牙膏組合物前乳酸脫氫酶平均為668,最低為58,最高為1789。

臨床表現:

正常人群在使用后,40例陰性對照者口腔無明顯變化。

牙周患者在使用實施例2牙膏組合物兩周后,40例牙周病患者表現為牙齦出血減少;一個月后,37例牙周病患者已不再有牙齦出血癥狀、牙齦腫痛次數減少,臨床有效率92.5%,無效率7.5%。

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