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意大利牛舌草活性部位在制備抗氧化藥物、化妝品和保健品中的應用.pdf

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意大利 牛舌 活性部位 制備 氧化 藥物 化妝品 保健品 中的 應用
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摘要
申請專利號:

CN201310433113.6

申請日:

20130923

公開號:

CN103463163B

公開日:

20150520

當前法律狀態:

有效性:

有效

法律詳情:
IPC分類號: A61K36/30,A61K8/97,A61P39/06,A61Q19/08 主分類號: A61K36/30,A61K8/97,A61P39/06,A61Q19/08
申請人: 王琪
發明人: 王琪,謝周健,戴溈
地址: 832002 新疆維吾爾自治區石河子市北二路石河子大學藥學院
優先權: CN201310433113A
專利代理機構: 代理人:
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法律狀態
申請(專利)號:

CN201310433113.6

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法律狀態公告日:

法律狀態類型:

摘要

本發明涉及植物提取物在具有抗氧化作用的藥物、化妝品和保健品領域中的應用,公開了一種意大利牛舌草活性部位在具有抗氧化作用藥物、化妝品和保健品中的應用。這種活性部位的制備方法為取意大利牛舌草全草干燥粉末,以乙醇提取,濾液合并,減壓回收溶劑,得到粗提物;粗提物經石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取,萃取物蒸干,得到活性部位。這種活性部位,是一種天然的植物抗氧化劑,對人體無副作用,在抗氧化領域有應用潛能。

權利要求書

1.意大利牛舌草活性部位在制備具有抗氧化作用藥物、化妝品和保健品中的應用,其特征在于,所述的意大利牛舌草活性部位的制備方法包括以下步驟:(1)取干燥的意大利牛舌草全草粉末,加入體積濃度為30%~95%乙醇溶液冷浸后提取2~5次,每次提取時,乙醇溶液與意大利牛舌草全草粉末的用量比為5~15ml/g,超聲提取10~60分鐘,取濾液;(2)合并濾液,去除乙醇后用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇依次萃取,萃取物蒸干,即得。2.根據權利要求1所述意大利牛舌草活性部位的應用,其特征在于,步驟(1)中,所述乙醇溶液的體積濃度為60%~95%。3.根據權利要求1所述意大利牛舌草全草活性部位的應用,其特征在于,所述部位為乙酸乙酯部位和正丁醇部位。

說明書

技術領域

本發明涉及植物提取物、藥品、保健品和化妝品領域,具體為意大利牛舌草活性部位在具有抗氧化藥物、化妝品和保健品領域中的應用。

背景技術

抗氧化劑(Antioxidants)是阻止氧氣不良影響的物質。它是一類能幫助捕獲并中和自由基,從而祛除自由基對人體損害的一類物質。人體的抗氧化劑有自身合成的,也有由食物供給的。所有水果和蔬果中都含有極高的天然抗氧化劑,如維生素A、C、E、P、多酚等。竹葉中提取的竹葉黃酮就是一種優質的天然抗氧化劑,茶葉中也含有天然抗氧化劑,如多酚等。研究表明水果和蔬菜中的天然抗氧化劑具有保護效果。例如維生素E和β-胡蘿卜素可以保護細胞膜;維生素C可以排出細胞內的自由基,等等。天然抗氧化劑可以幫助人類預防心臟病和癌癥等多種疾病,并能增進腦力,延緩衰老。我國臺灣學者對195種中草藥的抗氧化性能進行系統篩選和評價,發現幾乎一半的中草藥表現出抗氧化作用,其中22種中草藥乙醇提取物抗氧化能力強于等重量生育酚。

以天然抗氧化劑取代合成抗氧化劑是藥品、化妝品和保健品行業的發展趨勢,天然植物是一種極有潛力的天然抗氧化劑資源,從天然植物中尋找新的清除體內自由基的抗氧化劑也將是現代醫藥、保健行業的發展方向,因為生物體內或食物中的脂類的氧化產物可能是許多疾病的誘因,而從天然藥物中分離出來的許多抗氧化成分都有治療作用。從天然植物中篩選和開發抗氧化作用確切、安全無毒的新品種或分離提取其有效抗氧化成分,已是當務之急。天然植物抗氧化作用有很大可挖掘的潛能,加之運用現代科學技術,結合現代中醫藥學理論,盡早創立中西醫結合的抗氧化理論體系,定將有益于天然植物抗氧化劑的開發和應用。另外,天然抗氧化劑尚需在有效成分的抗氧化機理、協同作用、構效關系和分子設計等方面開展深入研究,為中草藥開發抗氧化劑的應用奠定理論基礎,同時要加強天然植物原料提取、分離純化有效成分工藝研究,以盡快實現天然抗氧化劑的產業化。

意大利牛舌草(Anchusa?italica?Retz.)為紫草科植物,生長于海拔210米至3,000米的地區,國外分布于伊朗、前蘇聯等國及歐洲等地,此種藥材多由巴基斯坦進口,現在新疆南疆喀什地區大量人工栽培。維吾爾醫藥中將意大利牛舌草的地上部分入藥稱牛舌草,維藥名高孜萬,是維吾爾醫治療心腦血管疾病的常用藥材之一。牛舌草藥材具有生濕生熱,調節異常黑膽質,生濕補腦,祛寒補心,爽心悅志,潤燥消炎,止咳平喘等功效。主治干寒性或黑肥質性疾病,如平性腦虛,寒性心虛、心悸,抑郁癥,干性腦膜炎、肺炎及結核疾病,寒性咳嗽、感冒、氣喘等。全草經預試有皂苷,黃酮類,氨基酸,揮發油,黏液質,糖類和微量生物堿反應。

牛舌草屬的植物在土耳其、印度和約旦民間用于治療創傷,胃潰瘍和尿路感染等疾患。土耳其的學者(Helvetica?Chimica?Acta,93:457,2010)研究了蔚藍牛舌草(Anchusa?azurea)的化學成分,從中分離鑒定了11個化學成分,主要為三萜皂苷,黃酮類,脂肪酸和酚酸類化合物,并且發現其正丁醇萃取部位及一個黃酮類化合物quercetin?3-(α-rhamnopyranosyl-β-glucopyranoside和一個酚酸類化合物rosmarinic?acid具有很強的抗DPPH(2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl)自由基的作用。

綜合現有文獻資料,未發現意大利牛舌草及其所含成分具有抗氧化作用的文獻和專利報道。

發明內容

本發明旨在提供一種意大利牛舌草活性部位的用途,將該意大利牛舌草活性部位應用于制備具有抗氧化效果的藥物、化妝品和保健品。

本發明所要解決的技術問題是在于尋找開發高效且對人體無副作用或副作用小的天然植物抗氧化劑。本發明提供了一種在抗氧化領域有應用潛能的意大利牛舌草活性部位。

一種意大利牛舌草活性部位在制備具有抗氧化作用的藥物、化妝品和保健品領域中的應用。

所述的意大利牛舌草活性部位的提取方法,步驟包括:

(1)取干燥的意大利牛舌草全草粉末,加入乙醇溶液冷浸后提取2~5次,取濾液;

提取方法為常溫(10~30℃)下用體積濃度為30%~95%乙醇溶液(優選為60%~95%)冷浸、超聲提取10~60分鐘;每次提取時,乙醇溶液與意大利牛舌草粉末的用量比為5~15ml/g;

(2)合并濾液,依次以石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取,各萃取物蒸干,即得。

本發明的技術方案為,取意大利牛舌草全草,干燥、粉碎成粗粉,取干燥粉末,以乙醇提取,濾液合并,減壓回收溶劑,得到意大利牛舌草全草粗提物;意大利牛舌草全草粗提物依次以石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取,其中乙酸乙酯和正丁醇部位具有良好的抗氧化作用。

通過上述方法得到的意大利牛舌草活性部位,是一種天然的植物抗氧化劑,對人體無副作用,在抗氧化領域有應用潛能。這種意大利牛舌草活性部位可用于制備具有抗氧化效果的藥物、化妝品和保健品。

具體實施方式

實施例1

意大利牛舌草全草干燥粉末20g,室溫下(10~30℃)以體積濃度為30%乙醇200ml冷浸、超聲提取2次,每次10min(500W),取濾液合并,減壓回收溶劑至干,取提取物適量,配制成0.5mg/ml溶液備用,測定其清除DPPH自由基能力和彈性蛋白酶抑制作用,以便與后續制得的意大利牛舌草活性部位的活性作比較。

結果:意大利牛舌草全草粗提物在50μg/ml濃度時DPPH自由基清除率為9%,在1mg/ml濃度時對彈性蛋白酶抑制率為2%。

實施例2

意大利牛舌草全草干燥粉末20g,室溫下以體積濃度為60%乙醇200ml冷浸、超聲提取2次,每次30min(500W),取濾液合并,減壓回收溶劑至干,取提取物適量,配制成0.5mg/ml溶液備用,測定其清除DPPH自由基能力,以便與后續制得的意大利牛舌草全草活性部位的活性作比較。

結果:意大利牛舌草全草粗提物在50μg/ml濃度時DPPH自由基清除率為14%,在1mg/ml濃度時對彈性蛋白酶抑制率為4%。

實施例3

意大利牛舌草全草干燥粉末20g,室溫下以體積濃度為70%乙醇200ml冷浸、超聲提取2次,每次30min(500W),取濾液合并,減壓回收溶劑至干,取提取物適量,配制成0.5mg/ml溶液備用,測定其清除DPPH自由基能力,以便與后續制得的意大利牛舌草全草活性部位的活性作比較。

結果:意大利牛舌草全草粗提物在50μg/ml濃度時DPPH自由基清除率為25%,在1mg/ml濃度時對彈性蛋白酶抑制率為12%。

實施例4

意大利牛舌草全草干燥粉末20g,室溫下以體積濃度為75%乙醇200ml冷浸、超聲提取2次,每次30min(500W),取濾液合并,減壓回收溶劑至干,取提取物適量,配制成0.5mg/ml溶液備用,測定其清除DPPH自由基能力,以便與后續制得的意大利牛舌草全草活性部位的活性作比較。

結果:意大利牛舌草全草粗提物在50μg/ml濃度時DPPH自由基清除率為29%,在1mg/ml濃度時對彈性蛋白酶抑制率為14%。

實施例5

意大利牛舌草全草干燥粉末20g,室溫下(10~30℃)以體積濃度為95%乙醇200ml冷浸、超聲提取2次,每次30min(500W),取濾液合并,減壓回收溶劑至干,取提取物適量,配制成0.5mg/ml溶液備用,測定其清除DPPH自由基能力,以便與后續制得的意大利牛舌草全草活性部位的活性作比較。

結果:意大利牛舌草全草粗提物在50μg/ml濃度時DPPH自由基清除率為41%,在1mg/ml濃度時對彈性蛋白酶抑制率為26%。

實施例6活性部位富集

取意大利牛舌草全草干燥粉末500g,室溫下(10~30℃)以體積濃度為95%乙醇5000ml冷浸、超聲提取2次,每次30min(500W),取濾液合并,減壓回收溶劑至無醇味;依次以石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取,分別收集各萃取液、蒸干,分別得到石油醚部位、乙酸乙酯部位和正丁醇部位,并配制成不同濃度的溶液備用。

實施例7清除DPPH自由基能力測試

在藥物、化妝品和保健品領域,通常抗氧化性能的優劣是用清除DPPH自由基能力測試來表征的,清除DPPH自由基能力測試原理如下:

1,1-二苯基-2-三硝基苯肼[1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl?radical2,2-Diphenyl-1-(2,4,6-trinitrophenyl)hydrazyl,DPPH]是一種穩定的氮中心有機自由基。DPPH法于1958年被提出,廣泛用于地量測定生物試樣、分類物質和食品的抗氧化能力。此法是根據DPPH自由基有單電子,在517nm處有一強吸收,其醇溶液呈紫色的特性。當有自由基清除劑存在時,由于與其單電子配對而使其吸收逐漸消失,其褪色程度與其接受的電子數量成定量關系,因而可用分光光度計進行快速的定量分析,來檢測自由基清除情況,從而評價樣品的抗氧化能力。其能力用清除率來表示,清除率越大,則表明其抗氧化能力越強。

試驗方法:

1)將不同稀釋度的待測樣品溶液2ml加入試管中;

2)加入2ml?76μmol/L?DPPH乙醇溶液,混勻;

3)室溫下避光在黑暗處反應30min;

4)在525nm處測定吸光度Abs;每個濃度重復三次測試以保證實驗結果的準確性,最后取平均值作為擬合數據。

清除率I(%)=[1-(T-T0)/(C-C0)]×100%

式中:

T0:2ml水或DMSO加2ml?DPPH溶液的吸光度;

T:2ml樣品液加2ml?DPPH溶液的吸光度;

C:2ml樣品液加2ml?95%乙醇的吸光度;

C0:2ml水或DMSO加2ml?95%乙醇的吸光度;

按照上面公式計算清除率,清除率越大抗氧化能力越強。結果如表1。

表1意大利牛舌草各部位清除DPPH自由基活性測試結果

實施例6所得石油醚部位、乙酸乙酯部位和正丁醇部位中,在0.05mg/ml時,對DPPH自由基清除率分別為10%,87%和76%,由此可見,乙酸乙酯和正丁醇部位均具有很強的自由基清除作用,其中,以乙酸乙酯部位抑制作用最強。。

實施例8彈性蛋白酶抑制作用

測定方法按照文獻(Am.J.Pharmacol.Toxicol.,2009,4,127-129)方法進行,測定步驟為:在96孔板中加入10uL樣品溶液和130uL含有1.015mM反應底物Succ-Ala-Ala-Ala-p-硝基酰替苯胺的0.1M?Tris-C1緩沖溶液(PH8.0),在25℃下溫育5分鐘,加入15uL彈性蛋白酶溶液(0.5U/ml),繼續在25℃下溫育30min,然后用酶標儀測定410nm波長的吸光度A410。用去離子水替換樣品水溶液,作為參比溶液同樣測定吸光度。結果見表2。

表2意大利牛舌草各部位彈性蛋白酶抑制作用

實施例6所得石油醚部位、乙酸乙酯部位和正丁醇部位中,在1.0mg/ml時,對彈性蛋白酶抑制率分別為2%,50%和56%,由此可見,乙酸乙酯和正丁醇部位均具有較強的彈性蛋白酶抑制作用,其中,以正丁醇部位抑制作用最強。

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