• / 10
  • 下載費用:30 金幣  

一種無土培育微稻苗接種稻紋枯病的人工發病方法.pdf

關 鍵 詞:
一種 無土 培育 稻苗 接種 稻紋枯病 人工 發病 方法
  專利查詢網所有資源均是用戶自行上傳分享,僅供網友學習交流,未經上傳用戶書面授權,請勿作他用。
摘要
申請專利號:

CN201310351140.9

申請日:

20130813

公開號:

CN103392605A

公開日:

20131120

當前法律狀態:

有效性:

有效

法律詳情:
IPC分類號: A01H4/00,A01G7/06 主分類號: A01H4/00,A01G7/06
申請人: 廣西大學
發明人: 張君成,郭地
地址: 530004 廣西壯族自治區南寧市大學東路100號
優先權: CN201310351140A
專利代理機構: 廣西南寧公平專利事務所有限責任公司 代理人: 王素娥
PDF完整版下載: PDF下載
法律狀態
申請(專利)號:

CN201310351140.9

授權公告號:

法律狀態公告日:

法律狀態類型:

摘要

本發明公開了一種無土培育微稻苗接種稻紋枯病的人工發病方法,該發明包括一套配套器具與實施方法步驟。配套器具的構件由培養皿、玻璃罩、平底盤組成。實施方法步驟如下:1)配套器具準備;2)育苗用水瓊脂基質平板的制備;3)微稻苗培育;4)接種體準備;5)接種操作;6)接種后管理。本發明的優點是:無土育苗,容易實現全過程的無菌化;整套方法全程時間短;占用空間小;空間利用率高;溫度、濕度和水肥等重要發病條件容易控制,一致性好;病害反應清晰穩定,結果重現性好;實施操作簡易,過程管理簡單;總體技術簡單,容易實現技術方法的標準化。

權利要求書

1.一種無土培育微稻苗接種稻紋枯病的人工發病方法的配套器具,其特征在于:該配套器具的構件由培養皿、玻璃罩、平底盤組成;所述的玻璃罩將培養皿全部罩住;玻璃罩和培養皿全部置在平底盤內。2.一種無土培育微稻苗接種稻紋枯病的人工發病方法,其特征在于,實施操作步驟如下:1)配套器具準備:使用前用潔凈劑洗滌干凈配套器具培養皿、玻璃罩、平底盤;2)育苗用水瓊脂基質平板的制備:用水瓊脂作無土培育微稻苗的基質,水瓊脂基質平板的制備方法是:按比例:瓊脂/水=3g/1000ml,稱取瓊脂放入干凈水中,加熱至全部瓊脂熔化后,倒入培養皿中,形成5mm厚的水瓊脂基質平板,瓊脂的用量比例,以熔化冷卻后,能凝固但不過硬為宜,不同供貨商的瓊脂性能可能有異,因而用量有別;3)微稻苗培育:取水稻種子按常規方法浸種催芽,選取催芽萌動一致的種子點播到制備好的水瓊脂基質平板面上,將種子留在面上或按壓入瓊脂平板內;將播種后的培養皿轉入平底盤內,取玻璃罩將培養皿罩在平底盤內,取清水注入平底盤,形成和保持薄層淺水,使玻璃罩內部封閉并形成罩內穩定的高濕狀態;將全套育苗裝置放在室內能采光的地方,一般明亮的室內散射光即能滿足微稻苗生長的要求,應避免直射陽光的照曬,這容易引起玻璃罩內增溫。在溫度為30℃條件下培育;培育的微稻苗的苗高小于8cm,以4~5cm最合適;4)接種體準備:將待接種菌株移植到PSA平板培養基上,PSA培養基為:馬鈴薯200g;蔗糖20g;瓊脂20g;水1000ml;在溫度30℃下培養至菌落剛長滿平板,取直徑為6mm打孔器在平板菌落外周打取大小一致的菌絲瓊脂圓塊,以此菌絲塊作為定量接種的接種體;5)接種操作:取步驟3)培育獲得的微稻苗,打開微稻苗上方的玻璃罩,挑取步驟4)的菌絲塊定量接種放置在微稻苗基部瓊脂平板面上,菌絲塊邊緣觸及微稻苗基部;6)接種后管理:接種完成后,補充平底盤的薄層淺水,重新罩上玻璃罩,回到原來育苗的條件下繼續培育,將溫度條件改變為28℃,接種30小時后可見發病壞死斑,隨時間推移到接種3天后,微稻苗上呈現清晰的較大病斑。

說明書

技術領域

本發明涉及農業技術和生物技術。具體是一種無土培育微稻苗接種稻紋枯病的人工發病方法。

背景技術

稻紋枯病是我國水稻生產的首要病害,每年可造成68億多公斤稻糧損失。該病害的科學有效防治有賴于該病害的基礎研究,而許多基礎研究又離不開人工接種發病這基本手段。至今,有關該病害的人工發病技術,已有不少成熟的方法,歸結起來,主要有成株期接種和苗期接種方法兩大類,并派生出撒施接種、嵌入接種等方法。一般地,成株期接種能獲得更切合生產實際的結果,因而在品種抗病性評比和某些生產試驗中應用較多,但在成株期接種方法體系中,存在費力耗時;占用空間場地較大;試驗結果易受環境條件影響等突出弊病,因而阻礙了其在許多試驗工作中的應用;苗期接方法,所用的稻苗相對地比成株期的小,試驗占用時間和空間方面,與成株期接種方法相比,已大有改觀,不過,當前國內外廣為應用的苗期接種方法均是在稻苗的3~5葉期后進行接種,這種方法體系中,育苗耗時2周以上,接種觀察耗時1周以上,試驗工作一般要跨越3周多的時長,這對某些要求短期內獲得結果的試驗工作,如分子植病研究的致病突變體鑒定,抗病基因表達,以及侵染過程的病菌-寄主互作信息傳遞等,仍有時間過長之嫌;為獲得健壯的稻苗,需要提供充分的陽光和補充肥料,實施全套工作仍需使用溫室等較大的空間場地;而且在試驗期間的局部條件,如濕度、溫度、肥水等控制方面,仍存在一定的難度,或者受到裝備條件的限制等。

發明內容

本發明的目的是利用病菌能侵染微小稻苗而正常致病的特性,提供一種利用無土培育微稻苗接種稻紋枯病的配套器具與實施方法。

本發明解決上述技術問題的技術方案如下:

1.一種無土培育微稻苗接種稻紋枯病的人工發病方法的配套器具,其特征在于:該配套器具的構件由培養皿、玻璃罩、平底盤組成。

所述的玻璃罩將培養皿全部罩住;玻璃罩和培養皿全部置在平底盤內。

2.一種無土培育微稻苗接種稻紋枯病的人工發病方法,其特征在于,實施操作步驟如下:

1)配套器具準備:使用前用潔凈劑洗滌干凈配套器具培養皿、玻璃罩、平底盤。

2)育苗用水瓊脂基質平板的制備:用水瓊脂作無土培育微稻苗的基質,水瓊脂基質平板的制備方法是:按比例:瓊脂/水=3g/1000ml,稱取瓊脂放入干凈水中,加熱至全部瓊脂熔化后,倒入培養皿中,形成約5mm厚的水瓊脂基質平板。瓊脂的用量比例,以熔化冷卻后,能凝固但不過硬為宜,不同供貨商的瓊脂性能可能有異,因而用量有別。

3)微稻苗培育:取水稻種子按常規方法浸種催芽。選取催芽萌動一致的種子點播到制備好的水瓊脂基質平板面上,將種子留在面上或按壓入瓊脂平板內;將播種后的培養皿轉入平底盤內,取玻璃罩將培養皿罩在平底盤內,取清水注入平底盤,形成和保持薄層淺水,使玻璃罩內部封閉并形成罩內穩定的高濕狀態。

將全套育苗裝置放在室內能采光的地方。一般明亮的室內散射光即能滿足微稻苗生長的要求,應避免直射陽光的照曬,這容易引起玻璃罩內增溫。在溫度為30℃條件下培育。

培育的微稻苗的苗高小于8cm,以4~5cm最合適。

4)接種體準備:將待接種菌株移植到PSA平板培養基上,PSA培養基為:馬鈴薯200g;蔗糖20g;瓊脂20g;水1000ml;在溫度30℃下培養至菌落剛長滿平板,取直徑為6mm打孔器在平板菌落外周打取大小一致的菌絲瓊脂圓塊,以此菌絲塊作為定量接種的接種體。

5)接種操作:取步驟3)培育獲得的微稻苗,打開微稻苗上方的玻璃罩,挑取步驟4)的菌絲塊定量接種放置在微稻苗基部瓊脂平板面上,菌絲塊邊緣觸及微稻苗基部。

6)接種后管理:接種完成后,補充平底盤的薄層淺水,重新罩上玻璃罩,回到原來育苗的條件下繼續培育,將溫度條件改變為28℃。接種30小時后可見發病壞死斑,隨時間推移到接種3天后,微稻苗上呈現清晰的較大病斑。

本發明的優點是:

1)無土法育苗,容易實現全過程的無菌化。

2)整套方法全程時間短;一般不超過一周。

3)占用空間小;且配套器具裝置可以疊放,空間利用率高。

4)溫度、濕度和水肥等重要發病條件容易控制,一致性好。

5)病害反應清晰穩定,結果重現性好。

6)實施操作簡易,過程管理簡單。

7)總體技術簡單,容易實現技術方法的標準化。

附圖說明

圖1是本發明用的配套器具示意圖。

圖中:培養皿1,玻璃罩2,平底盤3。

圖2是本發明配套器具的配套工作示意圖。

圖中:培養皿1、玻璃罩2、平底盤3。

圖3是本發明整套育苗器具裝置的多個(層)疊放示意圖。

圖4是本發明培育的適合接種使用的微稻苗。

圖5是本發明在微稻苗基部接種菌絲塊后的示意圖,示定量接種菌絲塊的位置和狀態。

圖6是本發明無病菌對照接種3天后的微稻苗圖。

圖7是本發明微稻苗接種病菌3天后的發病癥狀圖。

圖8是本發明無病菌對照接種3天后的多個培養皿微稻苗原位狀態圖。

圖9是本發明無病菌對照接種3天后的單個培養皿微稻苗原位狀態圖。

圖10是本發明接種病菌3天后多個培養皿微稻苗發病的原位狀態圖。

圖11是本發明接種病菌3天后單個培養皿微稻苗發病的原位狀態圖。

具體實施方式

下面結合附圖和實施例對本發明作進一步描述。

配套器具如圖1所示,一種無土培育微稻苗接種稻紋枯病的人工發病方法的配套器具,該配套器具的構件由培養皿1、玻璃罩2、平底盤3組成。

培養皿1是實驗室用的普通培養皿。玻璃罩2為方形,一面開口,最好用有機玻璃制成。平底盤3是材料結實的普通平底淺盤。

器具配套要點是:玻璃罩2能將培養皿1全部罩住;玻璃罩2和培養皿1能全部置在平底盤3如圖2所示。

實施例1

應用本發明一種無土培育微稻苗接種稻紋枯病的人工發病方法,以水稻品種中優679為寄主材料,稻紋枯病菌菌株Rs-1為病菌材料,培育微稻苗接種稻紋枯病,按如下步驟實施操作:

1)配套器具準備:使用前用潔凈劑洗滌干凈配套器具培養皿1、玻璃罩2、平底盤3;在需要無菌化操作的情況下,將培養皿1滅菌。

2)育苗用水瓊脂基質平板的制備:用水瓊脂作無土培育微稻苗的基質,水瓊脂基質平板的制備方法是:按比例:瓊脂/水=3g/1000ml,稱取瓊脂放入干凈水中,加熱至全部瓊脂熔化后,倒入培養皿1中,形成約5mm厚的水瓊脂基質平板。瓊脂的用量比例,以熔化冷卻后,能凝固但不過硬為宜,不同供貨商的瓊脂性能可能有異,因而用量有別。在需要無菌化操作的情況下,將水瓊脂滅菌后再用。

3)微稻苗培育:取水稻種子按常規方法浸種催芽。選取催芽萌動一致的種子點播到制備好的水瓊脂基質平板面上,將種子留在面上或按壓入瓊脂平板內;將播種后的培養皿1轉入平底盤3內,取玻璃罩2將培養皿1罩在平底盤3內,取清水注入平底盤3,形成和保持薄層淺水,使玻璃罩2內部封閉并形成罩內穩定的高濕狀態。

在需要無菌化操作的情況下,將稻種表面消毒,并在無菌條件下浸種、催芽和播種。

將全套育苗裝置放在室內能采光的地方。一般明亮的室內散射光即能滿足微稻苗生長的要求,應避免直射陽光的照曬,這容易引起玻璃罩2內增溫。在溫度為30℃條件下培育,培育期間注意補充維持平底盤3的薄層淺水。

本發明設計的全套育苗器具裝置小巧平穩,育苗期間可以多個(層)疊放,能高效利用室內空間如圖3所示。

本發明培育的微稻苗,用來接種的適合大小是,微稻苗的苗高小于8cm(約播種后4天內),以苗高約4~5cm的最好(約播種后培育3天)如圖4所示。使用苗高超過8cm的稻苗來接種發病的效果較差,且全程歷時延長。

4)接種體準備:將該菌株移植到PSA平板培養基上,PSA培養基為:馬鈴薯200g;蔗糖20g;瓊脂20g;水1000ml;在溫度30℃下培養至菌落剛長滿平板,取直徑為6mm打孔器在平板菌落外周打取大小一致的菌絲瓊脂圓塊,以此菌絲塊作為定量接種的接種體。

5)接種操作:取步驟3)培育獲得苗高約4~5cm的微稻苗,打開微稻苗上方的玻璃罩2,挑取步驟4)的菌絲塊定量接種放置在微稻苗基部瓊脂平板面上,菌絲塊邊緣觸及微稻苗基部,如圖5所示。

6)接種后管理:接種完成后,補充平底盤3的薄層淺水,重新罩上玻璃罩2,回到原來育苗的條件下繼續培育,將溫度條件改變為28℃。高濕度是稻紋枯病發病的關鍵條件,本發明通過簡單的物理封閉使玻璃罩內維持穩定的高濕狀態,滿足發病條件,不需要特殊的加濕設備。

一般接種30小時后可見發病壞死斑,隨時間推移到接種3天后,微稻苗上呈現清晰的較大病斑,如圖6~11所示。接種導致病情發展的快慢或輕重,隨不同的菌株(或不同的品種)而有所不同。病情的輕重可以用病斑高度等指標來衡量。本實施例1用菌株Rs-1接種品種中優679的微稻苗,接種3天后觀察調查,微稻苗發病的病斑高度為7.6cm。

實施例2

應用本發明一種無土培育微稻苗接種稻紋枯病的人工發病方法,以水稻品種中優679為寄主材料,稻紋枯病菌菌株Rs-2為病菌材料,培育微稻苗接種稻紋枯病,按實施例1的步驟1)至步驟7)操作實施;結果接種發病癥狀與實施例1的一樣,接種3天后觀察調查,微稻苗發病的病斑高度為6.9cm。

實施例3

應用本發明一種無土培育微稻苗接種稻紋枯病的人工發病方法,以水稻品種中優679為寄主材料,稻紋枯病菌菌株Rs-3為病菌材料,培育微稻苗接種稻紋枯病,按實施例1的步驟1)至步驟7)操作實施;結果接種發病癥狀與實施例1的一樣,接種3天后觀察調查,微稻苗發病的病斑高度為5.5cm。

實施例4

應用本發明一種無土培育微稻苗接種稻紋枯病的人工發病方法,以水稻品種中浙優1號為寄主材料,稻紋枯病菌菌株Rs-1為病菌材料,培育微稻苗接種稻紋枯病,按實施例1的步驟1)至步驟7)操作實施;結果接種發病癥狀與實施例1的一樣,接種3天后觀察調查,微稻苗發病的病斑高度為5.3cm。

實施例5

應用本發明一種無土培育微稻苗接種稻紋枯病的人工發病方法,以水稻品種中浙優1號為寄主材料,稻紋枯病菌菌株Rs-2為病菌材料,培育微稻苗接種稻紋枯病,按實施例1的步驟1)至步驟7)操作實施;結果接種發病癥狀與實施例1的一樣,接種3天后觀察調查,微稻苗發病的病斑高度為4.3cm。

關于本文
本文標題:一種無土培育微稻苗接種稻紋枯病的人工發病方法.pdf
鏈接地址:http://www.rgyfuv.icu/p-6983181.html
關于我們 - 網站聲明 - 網站地圖 - 資源地圖 - 友情鏈接 - 網站客服 - 聯系我們

[email protected] 2017-2018 zhuanlichaxun.net網站版權所有
經營許可證編號:粵ICP備17046363號-1 
 


收起
展開
山东11选5中奖结果走势图