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一種利用沙土培育微稻苗接種稻紋枯病的人工發病方法.pdf

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一種 利用 沙土 培育 稻苗 接種 稻紋枯病 人工 發病 方法
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摘要
申請專利號:

CN201310351025.1

申請日:

20130813

公開號:

CN103392526B

公開日:

20150513

當前法律狀態:

有效性:

有效

法律詳情:
IPC分類號: A01G9/00,A01G1/00 主分類號: A01G9/00,A01G1/00
申請人: 廣西大學
發明人: 張君成,郭地
地址: 530004 廣西壯族自治區南寧市大學東路100號
優先權: CN201310351025A
專利代理機構: 廣西南寧公平專利事務所有限責任公司 代理人: 王素娥
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法律狀態
申請(專利)號:

CN201310351025.1

授權公告號:

法律狀態公告日:

法律狀態類型:

摘要

本發明公開了一種利用沙土培育微稻苗接種稻紋枯病的人工發病方法,該發明包括一套配套器具與實施方法步驟。配套器具的構件由育苗盤、玻璃罩、小平底盤、大平底盤組成。實施方法步驟如下:1)沙土準備;2)配套器具準備;3)沙土裝盤;4)微稻苗培育;5)接種體準備;6)接種操作;7)接種后管理。本發明的優點是:整套方法全程時間短;占用空間小,且配套器具裝置可以疊放,空間利用率高;溫度、濕度和水肥等重要發病條件容易控制,一致性好;病害反應清晰穩定,結果重現性好;實施操作簡易,過程管理簡單;總體技術簡單,容易實現技術方法的標準化。

權利要求書

1.一種利用沙土培育微稻苗接種稻紋枯病的人工發病方法,其特征在于,實施操作步驟如下:1)沙土準備:以普通細沙作土料,選取建筑用的干凈細沙,將沙土置于烈日下暴曬一天,收回在干凈容器內貯存備作土料;2)配套器具準備:使用前用潔凈劑洗滌干凈玻璃罩、小平底盤和大平底盤;將從市面購回的育秧盤裁切成適合的育苗盤;3)沙土裝盤:將育苗盤平置于小平底盤內,取備用土料均勻裝滿育苗盤上的盤穴,注意不宜單獨搬動育苗盤,因為育苗盤單獨懸空時沙土會從盤穴底孔漏掉;取清水注入小平底盤內,清水可通過盤穴底孔滲入盤穴中的沙土,待育苗盤內全部沙土充分濕潤后,在小平底盤內保持薄層淺水;4)微稻苗培育:取水稻種子按常規方法浸種催芽,選取催芽萌動一致的種子點播到育苗盤穴的沙土面上,每穴一顆種子,用沙土蓋種子或不蓋種子;維持小平底盤內薄層淺水;將小平底盤連同盤內已播種的育苗盤移到大平底盤內,取玻璃罩將小平底盤罩在大平底盤內,取清水注入大平底盤內,形成和保持薄層淺水,使玻璃罩內部封閉并形成罩內穩定的高濕狀態;將全套育苗裝置放在室內能采光的地方,利用明亮的室內散射光滿足微稻苗生長的要求,應避免直射陽光的照曬,這容易引起玻璃罩內增溫,在溫度為30℃條件下培育;培育的微稻苗的苗高4~5cm;5)接種體準備:將待接種菌株移植到PSA平板培養基上,PSA培養基為:馬鈴薯200g;蔗糖20g;瓊脂20g;水1000ml;在溫度30℃條件下培養至菌落剛長滿平板,取直徑為6mm打孔器在平板菌落外周打取大小一致的菌絲瓊脂圓塊,以此菌絲塊作為定量接種的接種體;6)接種操作:取步驟4)培育獲得的微稻苗,打開育苗盤上方的玻璃罩,定量挑取菌絲塊放置在微稻苗基部沙土面上,菌絲塊邊緣觸及微稻苗基部;7)接種后管理:接種完成后,補充大、小兩個平底盤的薄層淺水,重新罩上玻璃罩,回到原來育苗的條件下繼續培育,將溫度條件改變為28℃;接種30小時后可見發病壞死斑,隨時間推移到接種3天后,微稻苗上呈現清晰的較大病斑。

說明書

技術領域

本發明涉及農業技術和生物技術。具體是一種利用沙土培育微稻苗接種稻紋枯病的人工發病方法。

背景技術

稻紋枯病是我國水稻生產的首要病害,每年可造成68億多公斤稻糧損失。該病害的科學有效防治,有賴于該病害的基礎研究,而許多基礎研究又離不開人工接種發病這基本手段。至今,有關該病害的人工發病技術,已有不少成熟的方法,歸結起來,主要有成株期接種和苗期接種方法兩大類,并派生出撒施接種、嵌入接種等方法。一般地,成株期接種能獲得更切合生產實際的結果,因而在品種抗病性評比和某些生產試驗中應用較多,但在成株期接種方法體系中,存在費力耗時;占用空間場地較大;試驗結果易受環境條件影響等突出弊病,因而阻礙了其在許多試驗工作中的應用;苗期接方法,所用的稻苗相對地比成株期的小,試驗占用時間和空間方面,與成株期接種方法相比,已大有改觀,不過,當前國內外廣為應用的苗期接種方法均是在稻苗的3~5葉期后進行接種,這種方法體系中,育苗耗時2周以上,接種觀察耗時1周以上,試驗工作一般要跨越3周多的時長,這對某些要求短期內獲得結果的試驗工作,如分子植病研究的致病突變體鑒定,抗病基因表達,以及侵染過程的病菌-寄主互作信息傳遞等,仍有時間過長之嫌;為獲得健壯的稻苗,需要提供充分的陽光和補充肥料,實施全套工作仍需使用溫室等較大的空間場地;在試驗期間的局部條件,如濕度、溫度、肥水等控制方面,也存在一定的難度,或者受到裝備條件的限制等。

發明內容

本發明的目的是利用病菌能侵染微小稻苗而正常致病的特性,提供一種在沙土培育的微稻苗上接種稻紋枯病的配套器具與實施方法。

本發明解決上述技術問題的技術方案如下:

1.一種利用沙土培育微稻苗接種稻紋枯病的人工發病方法的配套器具,該配套器具由育苗盤、玻璃罩、小平底盤、大平底盤組成。

所述的育苗盤能全部平置于小平底盤內;所述的玻璃罩能將小平底盤全部罩在玻璃罩內;所述的小平底盤與玻璃罩能全部置在大平底盤內。

2.一種利用沙土培育微稻苗接種稻紋枯病的人工發病方法,實施操作步驟如下:

1)沙土準備:以普通細沙作土料,宜選取建筑用的干凈細沙,將沙土置于烈日下暴曬一天,收回在干凈容器內貯存備作土料。

2)配套器具準備:使用前用潔凈劑洗滌干凈玻璃罩、小平底盤和大平底盤;將從市面購回的育秧盤裁切成適合的育苗盤。

3)沙土裝盤:將育苗盤平置于小平底盤內,取備用土料均勻裝滿育苗盤上的盤穴,注意不宜單獨搬動育苗盤,因為育苗盤單獨懸空時沙土會從盤穴底孔漏掉。取清水注入小平底盤內,清水可通過盤穴底孔滲入盤穴中的沙土,待育苗盤內全部沙土充分濕潤后,在小平底盤內保持薄層淺水即可。

4)微稻苗培育:取水稻種子按常規方法浸種催芽,選取催芽萌動一致的種子點播到育苗盤穴的沙土面上,每穴一顆種子,用沙土蓋種子或不蓋種子。維持小平底盤內薄層淺水。將小平底盤連同盤內已播種的育苗盤移到大平底盤內,取玻璃罩將小平底盤罩在大平底盤內,取清水注入大平底盤內,形成和保持薄層淺水,使玻璃罩內部封閉并形成罩內穩定的高濕狀態。

將全套育苗裝置放在室內能采光的地方,一般明亮的室內散射光即能滿足微稻苗生長的要求,應避免直射陽光的照曬,這容易引起玻璃罩內增溫,在溫度為30℃條件下培育。

培育的微稻苗的苗高小于8cm,以4~5cm最合適。

5)接種體準備:將待接種菌株移植到PSA平板培養基上,PSA培養基為:馬鈴薯200g、蔗糖20g、瓊脂20g和水1000ml。在溫度30℃條件下培養至菌落剛長滿平板,取直徑為6mm打孔器在平板菌落外周打取大小一致的菌絲瓊脂圓塊,以此菌絲塊作為定量接種的接種體。

6)接種操作:取步驟4)培育獲得的微稻苗,打開育苗盤上方的玻璃罩,定量挑取菌絲塊放置在微稻苗基部沙土面上,菌絲塊邊緣觸及微稻苗基部。

7)接種后管理:接種完成后,補充大、小兩個平底盤的薄層淺水,重新罩上玻璃罩,回到原來育苗的條件下繼續培育,將溫度條件改變定為28℃。接種30小時后可見發病壞死斑,隨時間推移到接種3天后,微稻苗上呈現清晰的較大病斑。

本發明的優點是:

1)整套方法全程時間短,一般不超過一周。

2)占用空間小;且配套器具裝置可以疊放,空間利用率高。

3)溫度、濕度和水肥等重要發病條件容易控制,一致性好。

4)病害反應清晰穩定,結果重現性好。

5)實施操作簡易,過程管理簡單。

6)總體技術簡單,容易實現技術方法的標準化。

附圖說明

圖1是本發明用的配套器具示意圖。

圖中:育苗盤1,玻璃罩2,小平底盤3,大平底盤4。

圖2是本發明配套器具的配套工作示意圖。

圖中:育苗盤1能全部平置于小平底盤3內;玻璃罩2能將小平底盤3全部罩在玻璃罩2內;小平底盤3與玻璃罩2能全部置在大平底盤4內。

圖3是本發明整套育苗器具裝置的多個(層)疊放示意圖。

圖4是本發明培育的適合接種使用的微稻苗。

圖5是本發明在微稻苗基部接種菌絲塊后的示意圖,示定量接種菌絲塊的位置和狀態。

圖6是本發明無病菌對照接種3天后的微稻苗圖。

圖7是本發明微稻苗接種病菌3天后的發病癥狀圖。

圖8是本發明無病菌對照接種3天后的微稻苗原位狀態圖。

圖9是本發明接種病菌3天后微稻苗發病的原位狀態圖。入

具體實施方式

下面結合附圖與實施例對本發明作進一步描述。

配套器具的構件如圖1所示,一種利用沙土培育微稻苗接種稻紋枯病的人工發病方法的配套器具,該配套器具的構件由育苗盤1、玻璃罩2、小平底盤3、大平底盤4組成。

育苗盤1采用水稻拋秧育苗使用的普通育秧盤(盤穴底部帶孔)制成,方法是,用裁切工具將從市面購回的育秧盤裁切成本發明用的育苗盤,該構件不重復使用。玻璃罩2一面開口,最好用有機玻璃制成。小平底盤3和大平底盤4是材料結實的普通平底淺盤。構件玻璃罩2、小平底盤3、大平底盤4能重復使用。

器具配套要點是:①育苗盤1能全部平置于小平底盤3內;②玻璃罩2能將小平底盤3全部罩在玻璃罩2內;③小平底盤3與玻璃罩2能全部置在大平底盤4內(如圖2所示)。

實施例1

應用本發明一種利用沙土培育微稻苗接種稻紋枯病的人工發病方法,以水稻品種中優679為寄主材料,稻紋枯病菌菌株Rs-1為病菌材料,培育微稻苗接種稻紋枯病,按如下步驟實施操作:

1)沙土準備:以普通細沙作土料,宜選取建筑用的干凈細沙,將沙土置于烈日下暴曬一天,收回在干凈容器內貯存備作土料。沙土不宜重復使用,若重復使用,需經過滅菌處理。

2)配套器具準備:使用前用潔凈劑洗滌干凈配套器具玻璃罩2、小平底盤3和大平底盤4;將從市面購回的育秧盤裁切成適合的育苗盤1。育苗盤1為一次性使用的構件,不重復使用。

3)沙土裝盤:將育苗盤1平置于小平底盤3內,取備用土料均勻裝滿育苗盤1上的盤穴,注意不宜單獨搬動育苗盤,因為育苗盤1單獨懸空時沙土會從盤穴底孔漏掉。取清水注入小平底盤3內,清水可通過盤穴底孔滲入盤穴中的沙土,待育苗盤1內全部沙土充分濕潤后,在小平底盤3內保持薄層淺水即可。

4)微稻苗培育:取水稻種子按常規方法浸種催芽,選取催芽萌動一致的種子點播到育苗盤穴的沙土面上,每穴一顆種子,可以用沙土蓋種,也可以不蓋種;維持小平底盤3內薄層淺水。將小平底盤3連同盤內已播種的育苗盤移到大平底盤4內,取玻璃罩2將小平底盤3罩在大平底盤4內,取清水注入大平底盤4內,形成和保持薄層淺水,使玻璃罩2內部封閉并形成罩內穩定的高濕狀態。

將全套育苗裝置放在室內可采光的地方。一般明亮的室內散射光即能滿足微稻苗生長的要求,應避免直射陽光的照曬,這容易引起玻璃罩2內增溫。在溫度30℃條件下培育,培育期間注意補充維持兩個平底盤的薄層淺水。

本發明設計的全套育苗器具裝置小巧平穩,育苗期間可以多個(層)疊放,能高效利用室內空間(如圖3所示)。

本發明培育的微稻苗,用來接種的適合大小是,微稻苗的苗高小于8cm(約播種后4天內),以苗高約4~5cm的最好(約播種后培育3天)(如圖4所示)。使用苗高超過8cm的稻苗來接種發病的效果較差,且全程歷時延長。

5)接種體準備:將待接種菌株移植到PSA平板培養基(PSA培養基:馬鈴薯200g;蔗糖20g;瓊脂20g;水1000ml)上,在溫度30℃條件下培養至菌落剛長滿平板(約培養45小時左右),取直徑為6mm打孔器在平板菌落外周打取大小一致的菌絲瓊脂圓塊,以此菌絲塊作為定量接種的接種體。

6)接種操作:取上述步驟4)培育獲得苗高約4~5cm的微稻苗,打開育苗盤1上方的玻璃罩2,定量挑取菌絲塊放置在微稻苗基部沙土面上,菌絲塊邊緣觸及微稻苗基部(如圖5所示)。

7)接種后管理:接種完成后,補充大、小兩個平底盤的薄層淺水,重新罩上玻璃罩2,回到原來育苗的條件下繼續培育,將溫度條件改變為28℃。高濕度是稻紋枯病發病的關鍵條件,本發明通過簡單的物理封閉使玻璃罩內維持穩定的高濕狀態,滿足發病條件,不需要特殊的加濕設備。

一般接種30小時后可見發病壞死斑,隨時間推移到接種3天后,微稻苗上呈現清晰的較大病斑(如圖6~圖9所示)。接種導致病情發展的快慢或輕重,隨不同的菌株(或不同的品種)而有所不同。病情的輕重可以用病斑高度等指標來衡量。本實施例1用菌株Rs-1接種品種中優679的微稻苗,接種3天后觀察調查,微稻苗發病的病斑高度為8.4cm。

實施例2

應用本發明一種利用沙土培育微稻苗接種稻紋枯病的人工發病方法,以水稻品種中優679為寄主材料,稻紋枯病菌菌株Rs-2為病菌材料,培育微稻苗接種稻紋枯病,按實施例1的步驟1)至步驟7)操作實施;結果接種發病癥狀與實施例1的一樣,接種3天后觀察調查,微稻苗發病的病斑高度為6.1cm。

實施例3

應用本發明一種利用沙土培育微稻苗接種稻紋枯病的人工發病方法,以水稻品種中優679為寄主材料,稻紋枯病菌菌株Rs-3為病菌材料,培育微稻苗接種稻紋枯病,按實施例1的步驟1)至步驟7)操作實施;結果接種發病癥狀與實施例1的一樣,接種3天后觀察調查,微稻苗發病的病斑高度為4.9cm。

實施例4

應用本發明一種利用沙土培育微稻苗接種稻紋枯病的人工發病方法,以水稻品種中浙優1號為寄主材料,稻紋枯病菌菌株Rs-1為病菌材料,培育微稻苗接種稻紋枯病,按實施例1的步驟1)至步驟7)操作實施;結果接種發病癥狀與實施例1的一樣,接種3天后觀察調查,微稻苗發病的病斑高度為6.1cm。

實施例5

應用本發明一種利用沙土培育微稻苗接種稻紋枯病的人工發病方法,以水稻品種特優524為寄主材料,稻紋枯病菌菌株Rs-1為病菌材料,培育微稻苗接種稻紋枯病,按實施例1的步驟1)至步驟7)操作實施;結果接種發病癥狀與實施例1的一樣,接種3天后觀察調查,微稻苗發病的病斑高度為4.3cm。

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