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一種四倍體松花菜的培育方法.pdf

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一種 四倍體 松花 培育 方法
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摘要
申請專利號:

CN201310165859.3

申請日:

20130508

公開號:

CN103392592A

公開日:

20131120

當前法律狀態:

有效性:

失效

法律詳情:
IPC分類號: A01H4/00 主分類號: A01H4/00
申請人: 鎮江瑞繁農藝有限公司
發明人: 張振超,戴忠良,潘躍平,毛忠良,姚悅梅,秦文斌,潘永飛,肖燕,吳國平,孫春青,馬志虎
地址: 212400 江蘇省鎮江市句容市華陽鎮寧杭路112號
優先權: CN201310165859A
專利代理機構: 南京經緯專利商標代理有限公司 代理人: 李紀昌
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法律狀態
申請(專利)號:

CN201310165859.3

授權公告號:

法律狀態公告日:

法律狀態類型:

摘要

本發明公開了一種四倍體松花菜的培育方法,包括以下步驟:挑選飽滿健康的松花菜種子,滅菌后,將無菌種子接種到MS發芽培養基上發芽;切取適當大小的無菌苗放入到含秋水仙堿的MS液體誘導培養基中進行誘導;無菌水清洗后切割成適當大小接入到不含秋水仙堿的固體分化培養基中培養,再分化成芽;切取再生芽接種至生根培養基上生根培養,經煉苗和移栽,得到再生植株;取再生植株的嫩葉檢測各再生植株倍性,并從再生植株群體中確定植株倍性水平。

權利要求書

1.一種四倍體松花菜的培育方法,其特征在于包括以下步驟:(1)挑選松花菜種子,用濃度為70%~75%的乙醇對其表面消毒30~60s,然后用濃度為1%升汞溶液處理12~15min,用無菌水沖洗3~5遍;(2)將無菌種子接種到發芽培養基上,置于25℃、光照時間為14?h·d下培養3~7天;(3)將培養后的無菌苗接種到液體誘導培養基中,14h·d光照下振蕩誘導培養2~3天;(4)將處理過的無菌苗用無菌水清洗2~3次,切割后接入到固體分化培養基中,在室溫25℃、光照時間為14?h·d、光照強度為2?000?lux條件下培養,直至分化,再生成芽;(5)切取再生芽接種至生根培養基上培養,將生長健壯、根系發達的苗經煉苗后移栽,得到再生植株;(6)根據植物學性狀、細胞學性狀及流式細胞儀對田間正常生長的再生植株快速進行倍性鑒定,獲得一代四倍體松花菜突變株。2.根據權利要求1所述的一種四倍體松花菜的培育方法,其特征在于所述松花菜種子為純合二倍體松花菜,所述發芽培養基由1L?MS培養基、20~30g蔗糖和8~9g瓊脂組成,pH為5.8~6.0。3.根據權利要求1所述的一種四倍體松花菜的培育方法,其特征在于所述液體誘導培養基由1L?MS培養基、0.1~0.2mg?NAA、5.0~6.0mg?6-BA、50~200?mg秋水仙堿組成,pH為5.8~6.0。4.根據權利1所述的一種四倍體松花菜的培育方法,其特征在于所述固體分化培養基由1L?MS培養基、0.1~0.2?mg?NAA、5.0~6.0mg?6-BA、20~30g蔗糖、8~9g瓊脂組成,pH為5.8~6.0。5.根據權利要求1所述的一種四倍體松花菜的培育方法,其特征在于所述生根培養基由1L?MS培養基、0.2~0.3?mg?NAA、20~30g蔗糖、8~9g瓊脂組成,pH為5.8~6.0。

說明書

技術領域

本發明涉及一種四倍體松花菜的培育方法,屬于植物育種技術領域。

背景技術

松花菜(Brassica?oleracea?var.?botrytis?L.)又稱散花菜,是十字花科甘藍屬白花椰菜的一個變種,因其蕾枝較長,花層較薄,花球充分膨大時形態不緊實,相對于普通花菜呈松散狀,故此得名。與一般緊實型花菜品種相比,松花菜具有兩個顯著特點:一是耐煮性好,食味鮮美,松花菜的維生素C、可溶性糖含量明顯比緊花球花椰菜高,很受消費者歡迎。

多倍體因其“巨大性”的特點使多倍體育種逐漸成為園藝作物,尤其是以營養器官或多汁多肉果實為食用器官的蔬菜作物育種的主要途徑之一。目前利用秋水仙素誘導四倍體的研究在多種蔬菜作物上已有報道,然而關于松花菜四倍體新種質的創制未見報道。因此,利用化學藥劑處理二倍體松花菜試驗材料,誘變得到品質和產量均優于同源二倍體的四倍體紅皮松花菜新種質具有非常重要的意義。

發明內容

解決的技術問題:針對現有松花菜品質及產量較低的問題,本發明提供了一種四倍體松花菜的培育方法,選育出一批四倍體松花菜新種質。

技術方案:本發明提供了一種四倍體松花菜的培育方法,主要包括以下步驟:(1)挑選健康飽滿的松花菜種子,在超凈工作臺上用濃度為70%~75%的乙醇對種子表面消毒30~60s,然后用濃度(體積分數)為1%的升汞溶液處理12~15min,用無菌水沖洗3~5遍;(2)將無菌種子接種到MS發芽培養基上,置于25℃、光照時間為14?h·d-1下培養3~7天;(3)切取含子葉生長點的無菌苗接種到含50~200?mg秋水仙堿的MS液體誘導培養基中,14h·d-1光照下振蕩誘導培養2~3天;(4)將用秋水仙堿處理過的無菌苗用無菌水清洗2~3次,切割后接入固體分化培養基中,在室溫25℃、光照時間為14?h·d-1、光照強度為2000?lux條件下培養,直至分化,再生成芽;(5)切取再生芽接種至生根培養基上培養,將生長健壯、根系發達的苗經煉苗后移栽,得到再生植株;(6)根據植物學性狀、細胞學性狀及流式細胞儀對田間正常生長的再生植株快速進行倍性鑒定,獲得一代四倍體松花菜突變株。

所述松花菜種子為純合二倍體松花菜,松散、綠梗、品質優;所述發芽培養基由1L?MS培養基、20~30g蔗糖和8~9g瓊脂組成,pH為5.8~6.0;所述液體誘導培養基由1L?MS培養基、0.1~0.2?mg?NAA、5.0~6.0mg?6-BA、50~200?mg秋水仙堿組成,pH為5.8~6.0;所述固體分化培養基由1L?MS培養基、0.1~0.2?mg?NAA、5.0~6.0?mg6-BA、20~30g蔗糖、8~9g瓊脂組成,pH為5.8~6.0;所述生根培養基由1L?MS培養基、0.2~0.3?mg?NAA、20~30g蔗糖、8~9?g瓊脂組成,pH為5.8~6.0。

所述的MS培養基,以1L計,組成為:NH4HO3?1650mg,KNO3?1900mg,CaCl2·2H2O?440mg,KH2PO4?170mg,MgSO4·7H2O?370mg,FeSO4·7H2O?27.8mg,?Na2EDTA?37.3mg,H3BO3?6.2mg,MnSO4·H2O?16.9mg,ZnSO4·7H2O?8.6mg,Na2MoO4·2H2O?0.25mg,CuSO4·5H2O?0.025mg,CoCl2·6H2O?0.025mg,KI?0.83mg,肌醇100mg,甘氨酸2mg,煙酸0.5mg,維生素B1?0.1mg,維生素B6?0.5mg和余量的無菌水。

有益效果:本發明所獲得的四倍體松花菜與其同源二倍體相比在植株生長的各個階段均出現了變異。四倍體的莖、葉等營養器官和花器官、肉質根等生殖器官以及葉片下表皮氣孔、保衛細胞葉綠體、花粉粒等細胞觀察方面都表現出多倍體的巨大性,葉片厚度增加30%~45%,花粉粒大小及氣孔大小增加30%以上,差異極顯著。?

具體實施方式

實施例1

(1)培養基配制(包括不同培養階段的培養基,其組分與各組分在每升培養基中所含的重量)

1)發芽培養基為:MS培養基1L+蔗糖20g+瓊脂8g,pH5.8;

2)液體誘導培養基為:MS培養基1L+0.1mg?NAA?+5.0mg?6-BA+50mg秋水仙堿,pH5.8;

3)固體分化培養基為:MS培養基1L+0.15mg?NAA+5.0mg6-BA+20g蔗糖+8g瓊脂,pH5.8;

4)生根培養基為:MS培養基1L+0.2?mg?NAA+20?g蔗糖+8?g瓊脂,pH5.8;

(2)四倍體松花菜誘導處理

1)挑選飽滿健康的松花菜種子,在超凈工作臺上用濃度為70%的乙醇對種子表面消毒30s;用濃度為1%的升汞(氯化汞)溶液處理12min,無菌水沖洗3次;

2)將無菌種子接種到MS發芽培養基上,置于25℃、14?h·d-1培養5天;?

3)切取生長5天的無菌苗放入到含秋水仙堿的MS液體誘導培養基中,14?h·d-1光照下振蕩培養72?h;

4)將秋水仙堿處理過的無菌苗用無菌水清洗2次,切割后接入到不含秋水仙堿的固體分化培養基中,在室溫25℃、光照時間為14?h·d-1、光照強度為2?000?lux條件下培養,直至分化,再生成芽;

5)切取生長健康的再生芽接種至生根培養基上,在每天14h光照、25℃下進行生根培養;3周后將根生長健壯的苗進行煉苗3天;移栽時用清水洗凈組培苗根部培養基,800倍75%百菌清浸泡基部2分鐘;后把植株植于蔬菜育苗專用基質穴盤,塑料膜罩住保濕,在溫室中培養10天后移栽,得到再生植株;

6)取再生植株的嫩葉,用流式細胞儀檢測各植株倍性,確定發生變異植株的倍性水平;

(3)除步驟(2)中3)液體誘導培養基中不添加秋水仙堿進行誘導外,其它操作同“(2)四倍體松花菜誘導處理”,作為對照松花菜。

結果:經流式細胞儀檢測發現,松花菜四倍體誘導率達26.3%。四倍體的莖、葉等營養器官和花器官、肉質根等生殖器官以及葉片下表皮氣孔、保衛細胞葉綠體、花粉粒等細胞觀察方面都表現出多倍體的巨大性,花粉粒大小及氣孔大小增加30%以上,差異極顯著。

實施例2

(1)培養基配制:1)發芽培養基為:MS培養基1L+蔗糖20g+瓊脂9g,pH5.9;2)液體誘導培養基為:MS培養基1L+0.15mg?NAA?+5.5mg?6-BA+100mg?秋水仙堿,pH5.9;3)固體分化培養基為;MS培養基1L+0.1mg?NAA+5.5mg6-BA+20?g蔗糖+9g瓊脂,pH5.9;4)生根培養基為:MS培養基1L+0.25?mg?NAA+20?g蔗糖+8g瓊脂,pH5.9;

(2)四倍體松花菜誘導處理

1)挑選飽滿健康的松花菜種子,在超凈工作臺上用濃度為75%的乙醇對種子表面消毒60s;用濃度為1%升汞(氯化汞)溶液處理15min,無菌水沖洗5遍;

2)將無菌種子接種到MS發芽培養基上,置于25℃、14?h·d-1培養7天;?

3)切取生長7天的無菌苗放入到含秋水仙堿的MS液體誘導培養基中,14?h·d-1光照下振蕩培養48?h;

4)將秋水仙堿處理過的無菌苗用無菌水清洗3次,切割后接入到不含秋水仙堿的固體分化培養基中,在室溫25℃、光照時間為14?h·d-1、光照強度為2?000?lux條件下培養,直至分化,再生成芽;

其余操作同實施例1。

結果:經流式細胞儀檢測發現,松花菜四倍體誘導率達27.6%。四倍體的莖、葉等營養器官和花器官、肉質根等生殖器官以及葉片下表皮氣孔、保衛細胞葉綠體、花粉粒等細胞觀察方面都表現出多倍體的巨大性,花粉粒大小及氣孔大小增加31%以上,差異極顯著。

實施例3

(1)培養基配制

1)發芽培養基為:MS培養基1L+蔗糖20g+瓊脂8.5g,pH6.0;2)液體誘導培養基為:MS培養基1L+0.2mg?NAA?+6mg?6-BA+200mg秋水仙堿,pH6.0;3)固體分化培養基為:MS培養基1L+0.15mg?NAA+6.0mg6-BA+20?g蔗糖+9?g瓊脂,pH6.0;4)生根培養基為;MS培養基1L+0.3?mg?NAA+20?g蔗糖+9g瓊脂,pH6.0;

(2)四倍體松花菜誘導處理

1)挑選飽滿健康的松花菜種子,在超凈工作臺上用濃度為73%的乙醇對種子表面消毒40s;用濃度為1%的升汞(氯化汞)溶液處理13min,無菌水沖洗4遍;

2)將無菌種子接種到MS發芽培養基上,置于25℃、14?h·d-1培養6天;?

3)切取生長6天的無菌苗放入到含秋水仙堿的MS液體誘導培養基中,14?h·d-1光照下振蕩培養48?h;

4)將秋水仙堿處理過的無菌苗用無菌水清洗3次,切割后接入到不含秋水仙堿的固體分化培養基中,在室溫25℃、光照時間為14?h·d-1、光照強度為2?000?lux條件下培養,直至分化,再生成芽;

其余操作同實施例1。

結果:經流式細胞儀檢測發現,松花菜四倍體誘導率達26.6%。四倍體的莖、葉等營養器官和花器官、肉質根等生殖器官以及葉片下表皮氣孔、保衛細胞葉綠體、花粉粒等細胞觀察方面都表現出多倍體的巨大性,花粉粒大小及氣孔大小增加32%以上,差異極顯著。

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