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一種從高溫花生粕中直接提取凝血酶抑制肽的方法.pdf

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一種 高溫 花生 直接 提取 凝血酶 抑制 方法
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摘要
申請專利號:

CN201310077210.6

申請日:

20130312

公開號:

CN103098977B

公開日:

20140409

當前法律狀態:

有效性:

有效

法律詳情:
IPC分類號: A23J1/14 主分類號: A23J1/14
申請人: 河南工業大學
發明人: 章紹兵,呂燕紅,陸啟玉,王子偉
地址: 450001 河南省鄭州市高新區蓮花街
優先權: CN201310077210A
專利代理機構: 代理人:
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法律狀態
申請(專利)號:

CN201310077210.6

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法律狀態公告日:

法律狀態類型:

摘要

一種從高溫花生粕中直接提取凝血酶抑制肽的方法,屬于農產品精深加工及其副產物綜合利用的技術領域。它主要解決現有工藝生產花生肽路線長、成本高、花生肽得率低等技術問題。本發明將高溫花生粕加水調酸后進行浸提,分離除去大部分非蛋白成分后,再將濕渣進行堿溶并加入蛋白酶進行酶解反應。酶解結束后進行滅酶,離心,得到水解液相和殘渣,將水解液相進行噴霧干燥后獲得花生肽。采用本發明提取花生肽,省去了制備花生蛋白的過程,通過直接酶解花生粕提取花生肽,生產成本低,得率高。提取得到的花生肽純度高,溶解性好,具有抑制凝血酶的活性,可作為抗血栓食品的配料。

權利要求書

1.一種從高溫花生粕中直接提取凝血酶抑制肽的方法,其特征是將高溫花生粕粉碎后分散在3-6倍重量的水中,調節體系pH范圍在3.0-5.0,溫度為40-45℃,酸浸時間為20-40min;酸浸結束后對體系進行離心分離,將得到的濕渣重新分散在4-8倍重量的水中,再調節體系pH范圍在8.0-10.0,溫度為50-60℃,堿溶時間為20-40min;然后采用Protex?6L堿性蛋白酶進行酶解,加酶量1.5-3.0%(w/w),酶解溫度50-60℃,酶解時間3-6h;酶解結束后進行滅酶、離心,將得到的水解液相進行噴霧干燥,進風溫度120-130℃,出風溫度70-80℃,得到花生肽粉末。

說明書

技術領域????

一種從高溫花生粕中直接提取凝血酶抑制肽的方法,屬于農產品精深加工及其副產物綜合利用的技術領域。

背景技術????

花生是全球最重要的四大油料作物之一,中國是世界上重要的花生生產大國,產量占世界總產量的40%以上。目前,全國花生的年產量基本在1400-1500萬噸左右,總產、單產和出口量一直位居全國油料作物之首。然而我國花生的深加工水平與西方發達國家相比還十分落后。在我國,花生約有50%以上用于提取食用油,花生粕是花生提油的副產物。?根據提油工藝的不同,花生粕又分為熱壓榨花生粕、溶劑浸提花生粕和冷榨花生粕。由于人們對濃香花生油的嗜好性消費,我國花生粕大多為熱壓榨花生粕,其中花生蛋白變性程度嚴重,從中直接提取花生蛋白得率非常低,故國內花生榨油后剩余的花生粕大多用作動物飼料,產品附加值低,資源浪費嚴重。

已有相當多的研究關注了高溫花生粕中蛋白質的利用。高云中等采用堿提酸沉法從高溫花生粕中提取分離蛋白,蛋白提取率僅為45.27%(食品與發酵工業,2009,35(4):103-105)。劉玉蘭等以高溫花生粕為原料,利用醇洗法制取花生濃縮蛋白,對醇洗花生濃縮蛋白進行堿性條件下的水浴加熱改性(中國油脂,2011,36(9):27-30)。CN101558817A也報道了采用乙醇浸出從花生粕中生產花生濃縮蛋白的方法。為提取花生肽,梁蓉等先從高溫花生粕提取花生蛋白,再以內肽酶和端解酶復合酶解得到花生肽(中國油脂,2008,33(5):24-28)。CN101965898A以花生粕為原料,加水和乙醇混合后升溫回流、過濾、脂肪酶脫脂、蛋白酶酶解、滅酶、脫色、膜分離,將得到的濾液經干燥后得到花生肽。從目前已報道的生產花生肽的相關技術來看,大多是采取先提取蛋白,再利用蛋白酶酶解的工藝,整個工藝路線長,生產成本高。而且因為花生蛋白的提取率低,再由花生蛋白制備花生肽的得率也肯定不高。

目前,心腦血管病是我國發病率、致殘率和死亡率最高的疾病,每12s就有一人因中風或心梗而倒下。通常使用的抗凝血物質—肝素、口服香豆素、鏈激酶和尿激酶等會導致血小板減少、出血等副作用。因此,研發有效的、副作用小的抗凝血保健食品引起了越來越多地關注。已有報道稱從蛋清蛋白(CN102229669A)和菜籽蛋白中可提取出抑制凝血酶活性的肽。而利用高溫花生粕直接生產具有抑制凝血酶活性的花生肽目前未見報道。

發明內容

為解決現有工藝的不足,本發明目的是提供一種生產工藝流程短、能夠直接從高溫花生粕中提取獲得凝血酶抑制肽的方法。本發明的技術方案是:將高溫花生粕加水調酸后進行浸提,分離除去大部分非蛋白成分后,再進行堿溶并加入蛋白酶進行酶解反應。酶解結束后進行滅酶,離心,得到水解液相和殘渣,將水解液相進行噴霧干燥后獲得花生肽。

1.??????工藝路線

如圖1所示。

2.??????工藝條件

(1)????花生粕粉碎:用粉碎機將花生粕粉碎,平均粒徑控制在150μm以下。

(2)????酸浸-離心:將粉碎后的花生粕分散在3-6倍重量的水中,用HCl調節體系pH范圍在3.0-5.0,溫度為40-45℃,酸浸時間為20-40min。酸浸的目的是讓可溶性非蛋白成分溶出,蛋白質在等電點附近沉淀。酸浸結束后進行離心分離,得到水相和花生濕渣(花生濃縮蛋白)。

(3)????堿溶-酶解:將花生濕渣分散在4-8倍重量的水中,用NaOH調節體系pH范圍在8.0-10.0,溫度為50-60℃,堿溶時間為20-40min。堿溶結束后向體系中加入Protex?6L堿性蛋白酶開始酶解,加酶量1.5-3.0%(w/w),酶解時間3-6h。

(4)????????滅酶-離心:酶解結束后進行滅酶,滅酶條件為85-90℃,10-20min。滅酶后取樣采用茚三酮法測定蛋白質的水解度。滅酶后對體系進行離心分離得到水解液相和殘渣。

(5)????????噴霧干燥:將水解液相進行噴霧干燥,進風溫度120-130℃,出風溫度70-80℃,得到花生肽粉末。

3.??????分析方法

粗蛋白測定:凱氏定氮法(N×5.46);

物料粒徑分布:采用激光粒徑分析儀進行測定;

蛋白質水解度測定:茚三酮法;

花生肽分子量測定:分子排阻高效液相色譜法;

花生肽得率:花生肽中含氮量/原料中含氮量×100%;

花生肽純度:花生肽中蛋白質含量/花生肽重量×100%;

凝血酶抑制活性測定:比色法。

本發明的有益效果:省去制備花生蛋白的過程,直接酶解花生粕提取花生肽,工藝路線簡短,生產成本低;得到的花生肽溶解性好,相對分子質量小于1000的小肽組分占85%以上,具有抑制凝血酶的活性。本發明應用于花生粕加工,可以得到具有保健功能的食品配料,顯著提高花生產品的附加值。

附圖說明

圖1?從高溫花生粕中直接提取凝血酶抑制肽的工藝流程示意圖。

圖2?花生肽抑制凝血酶活性的能力。

圖3?花生肽抑制凝血酶活性的能力。

具體實施方式?

???????實施例1

???????將高溫花生粕粉碎后分散在4倍重量的水中,用HCl調節體系pH范圍在4.5,溫度保持在40℃,浸提30min。浸提結束后進行離心(3000rpm,15min),得到水相和花生濕渣。棄水相,將花生濕渣復溶在5倍重量的水中,調節體系pH至9.0,溫度50℃,堿溶時間30min。堿溶結束后向體系中加入2.0%(w/w)的Protex?6L堿性蛋白酶開始酶解,溫度保持在50℃,3h后將體系溫度升至90℃進行滅酶(10min)。滅酶結束后進行離心分離(3000rpm,15min)得到水解液相和殘渣。將水解液相進行噴霧干燥后得到花生肽粉末。

花生肽得率72.4%,花生肽純度73.6%,蛋白質水解度23.5%,花生肽抑制凝血酶活性的半抑制率(IC50)為40.9mg/mL(圖2)。

?????實施例2

??????將高溫花生粕粉碎后分散在5倍重量的水中,用HCl調節體系pH范圍在4.3,溫度保持在40℃,浸提20min。浸提結束后進行離心(3000rpm,15min),得到水相和花生濕渣。棄水相,將花生濕渣復溶在6倍重量的水中,調節體系pH至9.5,溫度55℃,堿溶時間30min。堿溶結束后向體系中加入2.5%(w/w)的Protex?6L堿性蛋白酶開始酶解,溫度保持在55℃,5h后將體系溫度升至85℃進行滅酶(15min)。滅酶結束后進行離心分離(3000rpm,15min)得到水解液相和殘渣。將水解液相進行噴霧干燥后得到花生肽粉末。

花生肽得率70.5%,花生肽純度75.8%,蛋白質水解度26.2%,花生肽抑制凝血酶活性的半抑制率(IC50)為24.9?mg/mL(圖3)。

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